申请/专利权人：杨涛

申请日：2017-07-28

公开（公告）日：2022-06-14

公开（公告）号：CN111849899B

主分类号：C12N5/079

分类号：C12N5/079;C12N5/0793;C12N5/0797

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2022.06.14#授权;2020.11.17#实质审查的生效;2020.10.30#公开

摘要：本发明公开了一种定向诱导hiPSC分化为神经细胞体系的诱导培养基。本发明方法包括分阶段培养所述hiPSC诱导其神经分化，所述阶段包括：阶段a.共培养所述hiPSC与骨髓基质细胞HS5于诱导培养基；阶段b.用HS5条件培养基连续培养所述hiPSC；阶段c.用培养神经元细胞的基础培养基继续培养所述hiPSC。本发明的方法诱导人类hiPSC细胞定向分化为神经系统细胞，同时抑制非神经系统细胞的生成，从而获得成熟、广谱的神经细胞群。该神经细胞群不仅经过体外验证为具有电冲动发放的成熟神经元，而且这类神经细胞群在小鼠体内实验中也被证实，具有有效的治疗神经系统疾病如脑卒中、脑损伤的作用。

主权项：1.一种定向诱导hiPSC分化为神经细胞体系的组合培养基，其特征在于，所述组合培养基为基础培养基、HS5条件培养基和诱导培养基；所述诱导培养基为包括下述组分：20％血清替代品、1％非必需氨基酸、1mM的谷氨酰胺、0.1mMβ-巯基乙醇、10ngml碱性成纤维细胞生长因子、10ngml表皮生长因子、10ngml脑源性神经营养因子、10ngml神经营养因子-3、1ngml转化生长因子β3、0.5mM双丁酰环磷酸腺苷、500ngml头蛋白以及2％B27细胞培养添加剂的DMEMF12培养基，所述百分比为体积百分比；所述的基础培养基为添加有20ngmlbFGF、20ngmlEGF、2％B27添加剂、1％N2添加剂、1％胎牛血清、10μM佛司可林和0.2mM抗坏血酸的neurobasal培养基，所述百分比为体积百分比；所述HS5条件培养基为含有骨髓基质细胞HS5的分泌液的诱导培养基；所述HS5为经过照射的HS5；所述照射的条件为：γ射线辐照强度75-85Gy，照射时间为28-35分钟；所述神经细胞体系中含有神经系统细胞包括神经干细胞、功能性神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞；所述功能性神经元包括多巴胺能神经元、乙酰胆碱能神经元、γ-氨基丁酸能神经元、5-羟色胺能神经元和幼稚神经元；所述血清替代品为KnockOutTM血清替代品。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 杨涛 定向诱导hiPSC分化为神经细胞体系的诱导培养基

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