申请/专利权人：遵义医科大学

申请日：2020-03-20

公开（公告）日：2022-10-28

公开（公告）号：CN111172298B

主分类号：C12Q1/6888

分类号：C12Q1/6888;C12Q1/686

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2022.10.28#授权;2020.06.12#实质审查的生效;2020.05.19#公开

摘要：一种基于物种COI基因的吸血蠓寄主鉴定方法，含有12种常见寄主动物COI基因的扩增引物，通过提取吸血蠓饱血腹部的血液基因组DNA，采用不同引物进行PCR扩增，再根据扩增产物大小鉴定出相应的寄主。本申请提供扩增12种常见寄主动物COI基因的扩增引物及寄主鉴定方法，有利于实现吸血蠓常见寄主的快速、准确鉴定，降低物种鉴定成本。

主权项：1.一种基于物种COI基因的吸血蠓寄主鉴定方法，含有12种常见寄主动物COI基因的特异性扩增引物，引物序列及其扩增片段长度如下：a、人的COI基因的特异性扩增引物，上游引物：5’CAATACCAAACGCCCCTCTTC3’；下游引物：5’AGGTTTATGGAGGGTTCTTCTAC3’；扩增片段长度为：944bp；b、牛的COI基因的特异性扩增引物，上游引物：5’TGAATTAGGCCAACCCGGAA3’；下游引物：5’GTCGACGTCTATTCCGACAGT3’；扩增片段长度为：784bp；C、羊的COI基因的特异性扩增引物，上游引物：5’CAACCCGGAACCCTACTTGG3’；下游引物：5’ATGCCTGCTAGGTGTAGGGA3’；扩增片段长度为：338bp；d、鸭的COI基因的特异性扩增引物，上游引物：5’CCCGACATAGCATTCCCACG3’；下游引物：5’CGTGTAGGGTGGCGAGTCAG3’；扩增片段长度为：718bp；e、狗的COI基因的特异性扩增引物，上游引物：5’ACTAGGTCAGCCCGGTACTT3’；下游引物：5’CAGTGGGCAAATCCTCCCAT3’；扩增片段长度为：1068bp；f、猪的COI基因的特异性扩增引物，上游引物：5’TCACCCGCAATACTATGAGCTCTG3’；下游引物：5’TGATAGGGAGGAGGACATCCG3’；扩增片段长度为：506bp；g、鼠的COI基因的特异性扩增引物，上游引物：5’GCTAGCCGCAGGCATTACTA3’；下游引物：5’TGGGTGCCCAAAGAATCAGA3’；扩增片段长度为：121bp；h、马的COI基因的特异性扩增引物，上游引物：5’ACCACAAAGACATCGGCACT3’；下游引物：5’AATCGAGGACACCCCAGCTA3’；扩增片段长度为：443bp；i、兔的COI基因的特异性扩增引物，上游引物：5’GCAGGAGGAGGAGACCCTAT3’；下游引物：5’TAGTCTGAGTACCGTCGGGG3’；扩增片段长度为：662bp；j、猫的COI基因的特异性扩增引物，上游引物：5’GGGCCAACCTGGTACACTAC3’；下游引物：5’ATTCCGGACAGGCCTAGGAA3’；扩增片段长度为：1185bp；k、鹿的COI基因的特异性扩增引物，上游引物：5’TACAGTCGGAGGCTTAACCG3’；下游引物：5’GGATGCAAACGCTTCTCAG3’；扩增片段长度为：391bp；l、鸡的COI基因的特异性扩增引物，上游引物：5’CTTCGGTCACCCCGAAGTTT3’；下游引物：5’CCAGTTGGGATGGCGATGAT3’；扩增片段长度为：240bp；所述鉴定方法包括以下步骤：步骤1：将吸血蠓饱血腹部内容物分离出来，用于提取基因组DNA；步骤2：以基因组DNA为模板，分别加入12种常见寄主动物COI基因的特异性扩增引物进行PCR扩增，PCR反应体系如下；2×EsTaqMasterMix4.5μL；引物p1（100pmolL）0.2μL；引物p2（100pmolL）0.2μL；模板DNA1μL；ddH2O6.6μL；总体积12.5μL；反应条件为：95℃预变性5min，1个循环；94℃变性30sec，牛、羊、人53℃，鸭、鼠、鹿54℃，狗、马、兔、猫、鸡55℃，猪56℃，退火30sec，72℃延伸30sec，35个循环；72℃延伸10min，1个循环；最后16℃，保存；步骤3：取出一定量的PCR扩增产物，通过琼脂糖凝胶电泳分离，与DNAMarker电泳条带进行比对判断出扩增条带的大小，即人944bp、牛784bp、羊338bp、鸭718bp、狗1068bp、猪506bp、鼠121bp、马443bp、兔662bp、猫1185bp、鹿391bp、鸡240bp；步骤4：最后，根据PCR扩增产物与Marker电泳条带的对比结果，即可判断待测的蠓虫腹部血粉属于哪一物种即对应的寄主。

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权利要求：

百度查询： 遵义医科大学 一种基于物种COI基因的吸血蠓寄主鉴定方法

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