申请/专利权人：中国科学院新疆生态与地理研究所

申请日：2022-09-24

公开（公告）日：2022-11-22

公开（公告）号：CN115362938A

主分类号：A01H4/00

分类号：A01H4/00

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.05.26#授权;2022.12.09#实质审查的生效;2022.11.22#公开

摘要：本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种基于同化枝诱导的准噶尔无叶豆扩繁体系建立的方法，该方法是由同化枝的诱导，同化枝增殖，生根培养以及炼苗和移栽步骤完成，通过本发明提供的方法，同化枝诱导率为100%，生根率可达65%。准噶尔无叶豆是沙漠环境极端耐旱的典型代表，具有抗旱、抗高温、抗风蚀沙埋等抵抗多种非生物胁迫的能力，显示出该种是挖掘优质抗旱基因的优良材料，尤其可作为豆科抗旱分子机制研究的模式种，但由于其长期生活在极端恶劣的流动沙丘环境中，种子萌发率低，其物种保育就显得尤为重要。本发明方法为准噶尔无叶豆的物种保育和抗逆基因的挖掘提供基础。

主权项：1.一种基于同化枝诱导的准噶尔无叶豆快速扩繁体系建立的方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：（一）同化枝的诱导：外植体的获得与处理：（1）采自新疆古尔班通古特沙漠的准噶尔无叶豆种子，剥除果荚，获得干净种子；使用分析纯浓硫酸浸泡种子4-5min，100℃水浴加热，期间用玻璃棒进行搅拌，加速种皮腐蚀，打破物理休眠，直到每个种壳表面出现3个及以上小黑点即可；随后取出浸泡后的种子用无菌水冲洗干净去除浓硫酸残留；（2）将种子倒入50mL离心管，再使用75%酒精浸泡5-10s后取出种子，用无菌水冲洗2-3遍并用无菌水浸泡3-4h；（3）将上述处理过的种子倒入无菌的离心管，在超净工作台上用75%的酒精消毒8-10s，接着用无菌水冲洗3-4次，期间不断晃动离心管；（4）将上一步的种子去除无菌水后倒入新的50mL无菌离心管中，用3%的次氯酸钠溶液中浸泡6min，期间不断搅动，之后用无菌水冲洗5次；（5）迅速将上述消毒完成的种子接种于植株培养基中，放入组培室培养，条件为25-27℃、光照时间16hd、光照强度2000Lx；（6）播种5-7天长出子叶，20天抽出同化枝，30-35天长出3-5cm长的同化枝作为下一步扩繁材料；（二）同化枝的增殖：将步骤（一）长出的同化枝切成1-2cm相同长度的同化枝茎段作为外植体插到增殖培养基中进行增殖培养，培养条件为25-27℃、光照时间16hd、光照强度2000Lx，培养30天后长成1-4cm丛生芽，增值倍数达3-5倍；（三）生根培养：将步骤（二）得到的3cm同化枝，沿茎基部切下，接种到生根培养基上，8-10d可在茎基部看到乳白色的根尖；（四）炼苗和移栽：选取步骤（三）中生根20天的同化枝，在自然光照下，打开组培瓶炼苗3-4d，将同化枝从组培瓶中取出，仔细清洗根部后，移栽到基质中，将幼苗移栽进基质后，在移栽盆表面覆盖扎有小洞的保鲜膜，期间每天向膜内喷水，光照强度1000Lx，光照时间为16hd，培养温度为24±2℃，7d后揭开保鲜膜呈半开状态，正常光照下培养且每天向膜内喷水，10d后即可完全撤去保鲜膜，此后恢复正常浇水。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 中国科学院新疆生态与地理研究所 一种基于同化枝诱导的准噶尔无叶豆快速扩繁体系建立的方法

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