申请/专利权人：健颐生物科技发展(山东)有限公司

申请日：2022-06-02

公开（公告）日：2022-12-27

公开（公告）号：CN114958767B

主分类号：C12N5/10

分类号：C12N5/10;C12N5/077;C12N15/85;C12N15/113;A61K35/30;A61P25/16;A61P25/00

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2022.12.27#授权;2022.09.16#实质审查的生效;2022.08.30#公开

摘要：本发明属于细胞生物学技术领域，具体涉及一种基于hiPSC细胞构建的神经干细胞制剂的制备方法。hNSC的构建，miR‑93基因突变pegRNA构建，miR‑302d基因突变pegRNA构建，基于hiPSC细胞构建的神经干细胞制剂的获得。本发明的hNSC制剂的生产，解决了人神经干细胞在医学应用中来源受伦理学影响、相对获取困难的问题，同时提升了Nurr1蛋白在hNSC中的表达功能且解决了hNSC移植后向多巴胺神经元分化效率低的问题，可以用于帕金森疾病及其他神经系统疾病的防治，并能为类似新型细胞的开发提供参考。

主权项：1.一种基于hiPSC细胞构建的神经干细胞制剂的制备方法，其特征在于包括如下步骤：（1）hNSC的构建采用人成纤维细胞制备成纤维细胞源hiPSC，将hiPSC诱导生成hNSC；（2）miR-93基因突变pegRNA构建设计miR-93基因gRNA和miR-93基因突变模板及反转录引物序列，将miR-93基因gRNA、Scaffold序列和miR-93基因突变模板及反转录引物序列合成miR-93基因突变pegRNA；（3）miR-302d基因突变pegRNA构建设计miR-302d基因gRNA和miR-302d基因突变模板及反转录引物序列，将miR-302d基因gRNA、Scaffold序列和miR-302d基因突变模板及反转录引物序列合成miR-302d基因突变pegRNA；（4）基于hiPSC细胞构建的神经干细胞制剂的获得将PE2系统mRNA、miR-93基因突变pegRNA和miR-302d基因突变pegRNA混合，然后加入到hNSC中进行电转染，收集细胞，分选单克隆细胞，扩大培养，筛选，得到基于hiPSC细胞构建的神经干细胞制剂；步骤（2）中所述的miR-93基因gRNA为SEQIDNO.1所示的序列，Scaffold序列为SEQIDNO.2所示的序列，miR-93基因突变模板及反转录引物序列为SEQIDNO.3所示的序列；步骤（2）中所述的miR-93基因突变pegRNA为SEQIDNO.4所示的序列；步骤（3）中所述的miR-302d基因gRNA为SEQIDNO.5所示的序列，Scaffold序列为SEQIDNO.2所示的序列，miR-302d基因突变模板及反转录引物序列为SEQIDNO.6所示的序列；步骤（3）中所述的miR-302d基因突变pegRNA为SEQIDNO.7所示的序列。

全文数据：

权利要求：

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