申请/专利权人：山东农业大学

申请日：2020-08-31

公开（公告）日：2023-03-17

公开（公告）号：CN111944843B

主分类号：C12N15/82

分类号：C12N15/82;C12N15/32;A01H4/00;A01H5/00;A01H6/00

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.03.17#授权;2020.12.04#实质审查的生效;2020.11.17#公开

摘要：本发明公开了一种转抗虫基因窄冠黑杨11号的遗传转化方法，属于植物基因工程技术领域。本发明的遗传转化方法包括：外植体选择及预培养、农杆菌侵染、诱导培养形成组培苗等过程，利用本发明的遗传转化方法可在短时间内培育出大量优质的抗蛀干害虫窄冠黑杨11号新品系，不仅可以缩短转化时间，提高遗传转化效率，而且转化体系稳定，不受时间和季节的影响，可以大批量的为华北地区培育生产具有抗蛀干害虫性能的优良黑杨品系。

主权项：1.一种转抗虫基因窄冠黑杨11号的遗传转化方法，其特征在于，包括以下步骤：1选取窄冠黑杨11号无菌苗的叶片，去除叶柄和叶片前端三分之一，保留的部分垂直于主叶脉割3-4刀，得到外植体，将外植体放在预培养基上进行暗培养；2将携带有P2-Bt886Cry3Aa-P1基因的重组质粒转入农杆菌中，获得农杆菌侵染液，所述P2-Bt886Cry3Aa-P1基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；3将步骤1中暗培养后的外植体放入农杆菌侵染液中进行侵染，将侵染好的外植体置于窄冠黑杨11号叶盘分化培养基上，暗培养48h后转移到一号选择培养基上，并移至光下进行培养；4培养至外植体切口处形成的不定芽生长到1-1.5cm，取下不定芽，转移到二号选择培养基上，培养3-4天后，将生长健壮的不定芽接种到窄冠黑杨11号的生根培养基中继续进行培养；5对生根的幼苗进行鉴定，获得转抗虫基因的窄冠黑杨11号阳性苗；步骤1中，选取的无菌苗叶片为从顶芽向下数第3-6片生长健壮，叶型平展的叶片；步骤1中，所述预培养基为添加有蔗糖25-30gL、琼脂5-7gL、6-BA0.2mgL-0.3mgL和NAA0.05mgL-0.1mgL的12MS培养基；步骤1中，暗培养的时间为24h；步骤3中，农杆菌侵染液的OD600在0.3-0.5之间，侵染时间为8-10min；步骤3中，所述窄冠黑杨11号叶盘分化培养基为添加有蔗糖25-30gL、琼脂5-7gL、6-BA0.2mgL-0.3mgL和NAA0.05mgL-0.1mgL的12MS培养基；步骤3中，所述一号选择培养基为添加有蔗糖25-30gL、琼脂5-7gL、6-BA0.2mgL-0.3mgL、NAA0.05mgL-0.1mgL、kan30mgL-50mgL和GA30.05mgL-0.15mgL的12MS培养基；步骤4中，所述二号选择培养基为添加有蔗糖25-30gL、琼脂5-7gL、6-BA0.2mgL-0.3mgL、NAA0.05mgL-0.1mgL、kan30mgL-50mgL、cef300mgL-500mgL、和GA30.05mgL-0.15mgL的12MS培养基；步骤4中，所述生根培养基为添加有25-30gL、琼脂5-7gL、NAA0.1mgL-0.2mgL、IBA0.1mgL-0.2mgL和活性炭0.5mgL-1.0mgL的12MS培养基。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 山东农业大学 一种转抗虫基因窄冠黑杨11号的遗传转化方法

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