申请/专利权人：贵州大学

申请日：2023-05-23

公开（公告）日：2023-07-25

公开（公告）号：CN116472965A

主分类号：A01H4/00

分类号：A01H4/00;A01G22/60;A01G24/15;A01G24/12

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2023.11.28#实质审查的生效;2023.07.25#公开

摘要：本发明提供一种柳叶马鞭草组培快繁体系，涉及植物组织培养领域。该柳叶马鞭草组培快繁体系，具体包括以下步骤，S1.试验材料准备，S2.带腋芽茎段消毒处理，S3.腋芽增殖培养基的确定，S4.植株生根培养基确定，S5.炼苗时间和移栽基质确定，S6.培养条件，S7.数据处理。通过研究表明，不同灭菌时间对带腋芽茎段的污染率、存活率及死亡率具有显著性影响，综合污染率、存活率和死亡率来考虑，由此可得出消毒处理的时间并不是越长越好，时间过长会导致外植体死亡数增加，时间过短则会导致外植体消毒不彻底，不同植物生长调节剂配比对组培苗植株生根具有显著影响，同等浓度下，IBA对柳叶马鞭草促进生根的效果更为明显，IBA组合相对于NAA组合来说增殖效果更好。

主权项：1.一种柳叶马鞭草组培快繁体系，其特征在于，具体包括以下步骤：S1.试验材料准备选用种植于贵州省花溪区农业生物工程研究院的柳叶马鞭草带腋芽茎段，采摘当年新生外植体，用于进行组织培养离体快繁体系的建立；S2.带腋芽茎段消毒处理剪取5—6cm长的柳叶马鞭草中嫩绿的枝条，尽量选择无病虫害，当年新发的健康枝条，剪去叶片，保留腋芽附近的部分叶柄，将柳叶马鞭草腋芽茎段用自来水细流反复冲洗1h以上，置于超净台备用，以75%消毒酒精（15、30、45s）和20%次氯酸钠（6、8、10min）两种消毒试剂设计试验共9个处理组。以75%消毒酒精消毒后，使用无菌水荡涤腋芽茎段3次，再以20%次氯酸钠消毒，消毒后使用无菌吸水纸将茎段吸干，待水分干后，在超净工作台用无菌镊子将带腋芽茎段外植体接种培养基中，每个处理组重复3次，每次接种120个，7d后统计带腋芽茎段的污染率、存活率和死亡率用来确定最适消毒时间；S3.腋芽增殖培养基的确定待萌发培养基中的腋芽萌发到3—4cm左右时，将腋芽切下，基部斜切，接种至添加不同植物生长调节剂配比的腋芽增殖培养基中，腋芽增殖培养基是以MS为基础培养基，添加有不同浓度的6-BA（1.00mgL、1.50mgL）、IBA（0.00、0.10、0.15mgL）、NAA（0.00、0.05、0.10mgL）配比的8个处理组，每个处理组重复3次，每次接种50个，观察记录增殖芽的长势情况并在30d后统计每个腋芽的增殖芽数，最终计算出增殖系数；S4.植株生根培养基确定将长势好、高度5cm左右的柳叶马鞭草无根苗用刀片将下端斜切，接种到不同培养基中，生根培养基是以蛭石或琼脂为基质的MS为基础培养基，再不添加不同浓度的IBA（0.00、0.05、0.10mgL）、NAA（0.00、0.05、0.10mgL）的9个处理组，每个处理组重复3次，每次接种40个，观察记录根的长势，并在15d后统计植株生根数目、生根数和根长，最终计算出生根率、平均生根数和平均根长；S5.炼苗时间和移栽基质确定将待生根培养基中柳叶马鞭草植株的根长和根数适宜时，选择长势基本一致的无菌苗进行后续的炼苗和移栽，炼苗时，将培养瓶里的无菌苗移至温室，设计不同的炼苗时间（2d、4d、6d）和移栽基质（V蛭石：V营养土=1:1、V蛭石：V营养土=1:2）进行试验，共计6个处理组，每个处理组重复3次，每个处理组移栽30棵植株，炼苗过程中打开瓶盖，自然光条件下进行炼苗，炼苗完成后，将带有培养基的植株进行冲洗干净，移栽至先前配置好的移栽基质中，移栽过后第一次浇透水，用塑料薄膜罩住，观察记录植株的生长情况，并在30d后统计其存活数量，最终计算出植株的成活率；S6.培养条件柳叶马鞭草外植体离体培养的整个过程中，以MS为基础培养基，pH值在6.01-6.02，光照强度为3500lx，温度为（25±2℃，光照时间为16hd；S7.数据处理采用数据分析处理软件对实验数据进行统计、方差分析、LSD多重比较分析。

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