申请/专利权人：华中农业大学

申请日：2023-06-16

公开（公告）日：2023-08-29

公开（公告）号：CN116649214A

主分类号：A01H4/00

分类号：A01H4/00

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2023.09.15#实质审查的生效;2023.08.29#公开

摘要：本发明公开了羊踯躅组织培养技术体系的建立方法，包括以下步骤：步骤1：外植体的消毒；步骤2：防褐化剂浓度筛选；步骤3：种子萌发；步骤4：带腋芽茎段培养；步骤5：增殖培养；步骤6：壮芽培养；步骤7：生根培养；步骤8：炼苗移栽；步骤9：愈伤组织诱导。本发明选取了2个羊踯躅优良单株，以叶片、带腋芽茎段、种子为外植体，对羊踯躅外植体的消毒方法、防褐化方法、继代增殖、生根移栽等各方面都进行了细致的探究，提出了新的外植体消毒方法和降低叶片褐化率的方法，建立并优化了羊踯躅的快繁体系，为羊踯躅的快速繁殖和工厂化育苗提供了理论依据。同时成功诱导下胚轴产生愈伤组织，为羊踯躅的再生体系和遗传转化研究提供了参考。

主权项：1.羊踯躅组织培养技术体系的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：外植体的消毒，包括叶片消毒的最佳时间筛选，以R3798叶片为外植体，用75％酒精和3％NaClO为消毒剂对其进行不同时间的消毒处理，筛选最佳消毒时间；叶片消毒前，用洗衣粉水浸泡约30min，并用柔毛刷刷洗，后放在自来水下冲洗1h，再放入超净工作台中；采用双因素三水平完全随机设计，先用75％酒精分别消毒20sec、30sec、40sec消毒完之后用无菌水清洗3次，再用3％NaClO分别消毒6min、8min、4min+4min消毒完之后用无菌水清洗5次，其中4min+4min为“3％NaClO浸泡4min，用无菌水清洗一次后再浸泡4min”，共9个处理组合；消毒结束后，将叶片的边缘部分和主脉切除，使外植体大小为1cm×1cm，接种在WPM+0.8mgLTDZ+0.2mgLNAA的培养基上，每个处理均接种20个叶片，重复3次；步骤2：防褐化剂浓度筛选，以R3798叶片为外植体，添加不同浓度的PVP和VC为防褐化剂，探究PVP和VC对叶片褐化率的影响；步骤3：种子萌发，包括不同基本培养基及生长调节剂对R3798种子、R3805种子萌发的影响；步骤4：带腋芽茎段培养，选取R3805当年生枝条，剪去叶片，保留叶柄，剪成6～7cm长短的茎段，经消毒处理后接种在WPM培养基上，用于后期继代增殖培养；步骤5：增殖培养，选取步骤3中R3798种子萌发后生长良好的芽和步骤4中R3805带腋芽茎段萌发后的芽为材料，进行增殖培养，探究不同基本培养基及生长调节剂对R3798和R3805芽增殖的影响；步骤6：壮芽培养，选取步骤5获得的R3798和R3805长势不佳的芽或芽丛进行壮芽培养，探究不同基本培养基及生长调节剂对R3798和R3805壮芽培养的影响；步骤7：生根培养，选取步骤6获得的R3798和R3805长势良好的芽进行生根培养，探究不同基本培养基和IAA、活性炭对R3798和R3805生根的影响；步骤8：炼苗移栽，挑选步骤7中R3798和R3805茎段粗壮、叶色浓绿、茎和根系较长的小苗，经炼苗处理后进行移栽；步骤9：愈伤组织的诱导，包括TDZ和NAA对R3798叶片、R3798下胚轴诱导愈伤组织的影响。

全文数据：

权利要求：

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