申请/专利权人：中国农业大学

申请日：2023-02-28

公开（公告）日：2023-08-29

公开（公告）号：CN116656615A

主分类号：C12N5/10

分类号：C12N5/10;C12N15/86;C12N15/65;C12N7/01;C12R1/91;C12R1/93

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2023.09.15#实质审查的生效;2023.08.29#公开

摘要：本发明公开了支持非洲猪瘟病毒体外高效增殖的野猪肺细胞系WSL‑R4及其建立方法，属于非洲猪瘟病毒技术领域。本发明采用有限稀释法对野猪肺细胞进行亚克隆，最终获得一株能够支持非洲猪瘟病毒高效复制单细胞克隆株WSL‑R4，该细胞株性能稳定，能够支持非洲猪瘟病毒野毒株及缺失毒株复制，病毒滴度最高可达106TCID50mL，在非洲猪瘟病毒基础研究与疫苗生产中具有很好的应用价值。

主权项：1.支持非洲猪瘟病毒体外高效增殖的野猪肺细胞系WSL-R4的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：1野猪肺细胞的复苏与亚克隆，野猪肺细胞种细胞进行培养和细胞传代，第二代细胞采用有限稀释法进行单细胞克隆，待克隆长成野猪肺细胞簇，得到野猪肺细胞单细胞克隆株；2评估非洲猪瘟病毒对野猪肺细胞单细胞克隆株的易感性，通过重组非洲猪瘟病毒感染，评估不同野猪肺细胞单细胞克隆株的易感性，定向选择非洲猪瘟病毒易感性好的野猪肺细胞单细胞克隆株；3野猪肺细胞的连续亚克隆和定向筛选，将步骤2中筛选得到的非洲猪瘟病毒易感性好的野猪肺细胞单细胞克隆株进行再次亚克隆和定向筛选，通过连续四轮野猪肺细胞单细胞克隆株的亚克隆和定向筛选，选择以重组非洲猪瘟病毒感染后产生绿色荧光蛋白阳性细胞数目多且荧光强度高的单细胞克隆株，获得了非洲猪瘟病毒感染效率高的野猪肺细胞单细胞克隆株WSL-R4。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 中国农业大学 支持非洲猪瘟病毒体外高效增殖的野猪肺细胞系WSL-R4及其建立方法

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