申请/专利权人：苏州左旋星生物科技有限公司

申请日：2023-08-04

公开（公告）日：2023-09-08

公开（公告）号：CN116716328A

主分类号：C12N15/66

分类号：C12N15/66;C12N15/63

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.02.20#授权;2023.09.26#实质审查的生效;2023.09.08#公开

摘要：本发明涉及快速构建多聚腺苷酸polyA质粒的方法及相应质粒。该方法包括构建质粒骨架pLevoB1，合成目的mRNA基因片段并添加酶切位点，将目的mRNA基因片段插入质粒骨架pLevoB1中，即得到多聚腺苷酸polyA质粒成品，用作目标mRNA的模板质粒DNA。本发明能稳定、高效地为目的mRNA基因片段添加多聚腺苷酸polyA序列，且提高了正确克隆比例，所得多聚腺苷酸polyA质粒成品可用作目标mRNA的模板质粒DNA；还能便捷地更换线性化位点或增加多聚腺苷酸polyA序列。

主权项：1.快速构建多聚腺苷酸polyA质粒的方法，其特征是，包括以下步骤：第一步、构建质粒骨架pLevoB1；所述质粒骨架pLevoB1的序列结构从5’端至3’端依次为：第一多克隆位点区域序列-多聚腺苷酸polyA序列-质粒线性化位点及第二多克隆位点区域序列-启动子序列-抗性基因序列-第一过渡连接序列-pUC复制起始位点序列-第二过渡连接序列；所述第一多克隆位点区域序列含有一组酶切位点，用于通过酶切连接或通过GoldenGate克隆法插入目的mRNA基因片段；所述多聚腺苷酸polyA序列由预定数量的腺苷酸构成；所述质粒线性化位点及第二多克隆位点区域序列从5’端至3’端依次含有线性化位点以及至少一个酶切位点，用于将质粒经酶切线性化后作为IVT反应模板、或用于更换线性化位点、或用于增加多聚腺苷酸polyA序列的长度；所述线性化位点与各酶切位点均不相同；第二步、合成目的mRNA基因片段；在目的mRNA基因片段的5’端添加与第一多克隆位点区域序列中一酶切位点相对应的酶切位点，并在目的mRNA基因片段的3’端添加与第一多克隆位点区域序列中另一酶切位点相对应的酶切位点；第三步、通过酶切连接或通过GoldenGate克隆法，将第二步所得目的mRNA基因片段插入质粒骨架pLevoB1的第一多克隆位点区域序列中，即得到多聚腺苷酸polyA质粒成品。

全文数据：

权利要求：

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