申请/专利权人：周口师范学院

申请日：2019-09-19

公开（公告）日：2023-09-29

公开（公告）号：CN114457108B

主分类号：C12N15/82

分类号：C12N15/82;A01H4/00;A01H5/00;A01H6/82

优先权：["20190803 CN 2019107140208"]

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.09.29#授权;2022.05.27#实质审查的生效;2022.05.10#公开

摘要：本发明属于生物技术与组织培养领域，具体涉及酸浆类块根体介导的遗传转化方法。本发明可快速、高效诱导酸浆RTB结构，并且以酸浆叶片为转化外植体通过RTB介导的方法成功转化外源基因。所诱导出的RTB结构可离体成苗，成苗率100％；所建立的RTB介导的酸浆遗传转化体系，稳定、高效。

主权项：1.农杆菌介导的酸浆类块根体遗传转化方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：（1）培养酸浆无菌苗；（2）选取酸浆无菌苗的叶盘为外植体，在转化渗透介质中进行农杆菌侵染，随后在共培养培养基中孵育处理，其中，转化渗透介质包括以下组分：12MS盐、12MS有机、50gL蔗糖，转化渗透介质的pH为5.8；共培养培养基包括以下组分：MS盐、MS有机、40mgL乙酰丁香酮、30gL蔗糖、7.8gL琼脂粉，共培养培养基的pH为5.8；（3）将共培养后的外植体转入含有抗生素的类根体诱导培养基中，进行抗性类根体诱导，类根体诱导培养基包括以下成分：12MS盐、MS有机、5.0mgLNAA、3.6gL结冷胶，类根体诱导培养基的pH为5.8；（4）将抗性类根体转入含有抗生素的RTB诱导培养基中，进行抗性类根体诱导，其中，RTB诱导培养基包括以下成分：MS盐、MS有机、10.0mgLTDZ、3.6gL结冷胶，RTB诱导培养基的pH为5.8；（5）将离体的抗性类块根置于RTB胚体再生培养基中，诱导胚体的萌发，其中，RTB胚体再生培养基包括以下组分：MS盐、MS有机、2.5mgLBAP、7.8gL琼脂粉，RTB胚体再生培养基的pH为5.8；（6）将萌发的抗性类块根体胚体置于生根培养基中生根，形成实生苗，生根培养基包括以下组分：12MS盐、12MS有机、0.05mgLNAA、10gL蔗糖、7.8gL琼脂粉，生根培养基的pH为5.8；（7）炼苗、驯化与移栽。

全文数据：

权利要求：

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