申请/专利权人：河北工业大学

申请日：2021-10-25

公开（公告）日：2023-10-27

公开（公告）号：CN113749024B

主分类号：A01K61/54

分类号：A01K61/54

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.10.27#授权;2021.12.24#实质审查的生效;2021.12.07#公开

摘要：提供了一种利用海湾扇贝D型幼体进行现场慢性毒性试验的方法，包括：试验材料的前处理、海湾扇贝幼体的选优和喂养、慢性毒性试验及分析计算。其中，分析计算时，首先统计扇贝幼体附着率，而后对附着率与浓度进行方差分析，在确定浓度对附着率有显著影响后，绘制浓度‑效应关系图，确定污染物对海湾扇贝的无效应浓度NOEC与低效应浓度LOEC，最后对试验数据进行可靠性评价，结果为限制可靠及以上时为可用数据。本发明为现场试验方法，充分考虑了自然环境下污染物对水生生物的毒性效应，克服了目前国内贝类慢性试验研究方法单一、未充分考虑自然条件下水生生物对污染物的耐受能力以及试验结果未进行可靠性验证等问题。

主权项：1.一种用海湾扇贝D型幼体进行现场慢性毒理试验方法，包括以下步骤：（1）准备经预处理的海水；（2）准备经预处理的试验容器和试验器具；其中，所述试验容器为深为100-120cm、底面半径在25-35cm的尼龙桶或同体积下同等深度的方形玻璃缸；（3）准备海湾扇贝D型幼体：选取正常发育的海湾扇贝D型幼体，用所述步骤（1）中得到的经预处理的海水驯养，待扇贝D型幼体摄食基本正常后开始慢性毒性试验；所述步骤（3）中，在海湾扇贝受精卵孵化22-26h后使用250-350目筛绢过滤，未孵化的单细胞透明状卵随水体排出，剩余为正常发育的D型幼体，即为所选取的正常发育的海湾扇贝D型幼体；将所选取的正常发育的海湾扇贝D型幼体放入所述经预处理的试验容器中，所述经预处理的试验容器中装有大于200L经预处理的海水，之后加入400-500mL球等边金藻作为饵料，20-26h后使用显微镜观察幼体摄食情况，观察到大多数扇贝幼体摄食正常后开始慢性毒性试验，试验开始3-4天后投喂饵料中加入青岛大扁藻，投喂量为200-300mL，同时适当减少球等边金藻的投喂量；（4）进行慢性毒理试验：（4.1）配制污染物母液：当污染物为溶于海水的污染物时，所述污染物母液包括污染物和经预处理的海水；当污染物为难溶于海水的污染物时，所述污染物母液包括污染物、用于溶解所述污染物的助溶剂和经预处理的海水；（4.2）准备对照组和多个污染物试验组：向多个步骤（2）中得到的经预处理的试验容器中分别注入预设的对照组和污染试验组水样，其余条件保持相同，构成所述对照组和污染物试验组；其中，当污染物为溶于海水的污染物时，所述对照组为空白对照组；当污染物为难溶于海水的污染物时，所述对照组包括空白对照组和助溶剂对照组；其中，所述空白对照组的水样为所述步骤（1）中得到的经预处理的海水；所述助溶剂对照组的水样由所述步骤（4.1）中所使用的助溶剂和所述步骤（1）中得到的经预处理的海水组成；所述多个污染物试验组的水样分别为由所述步骤（4.1）得到的污染物母液和所述步骤（1）得到的经预处理的海水配制得到的具有不同污染物浓度的污染物试验水样；（4.3）向各对照组和污染物试验组中均放入8-10万个步骤（3）得到的海湾扇贝D型幼体，开始慢性毒理试验，试验进行n天后向各对照组和污染物试验组中分别投放多片附着基，其中n为8-12范围内的正整数；所述附着基为用棕绳编织而成的棕帘；每个试验容器中投放2-4片附着基，其中每片附着基带有1000-2000个附着点；（4.4）试验总天数为14-18天，试验结束后，取出附着基，并在每片附着基上随机找4-8片区域，每片区域取12-20个附着点，使用显微镜统计幼体在各附着基上的附着率；其中，所述步骤（4）中，整个试验过程在养殖场育苗室中进行，采用半静态暴露试验，试验期间每天换水量为50-150L；试验海水的温度为23±1℃，光照12-15h、黑暗9-12h，溶解氧维持在饱和值的60%以上；（5）分析计算：统计并计算各污染物试验组与各对照组中扇贝幼体在附着基上的附着率，对污染物浓度与幼体附着率进行方差分析，得出污染物的无效应浓度与低效应浓度；其中，将空白对照组附着率设为100%，无效应浓度定义为幼体附着率大于空白对照组幼体附着率的95%的所有污染物试验组中的最高污染物浓度，低效应浓度定义为幼体附着率大于空白对照组幼体附着率的75%的所有污染物试验组中的最高污染物浓度。

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百度查询： 河北工业大学 一种利用海湾扇贝D型幼体进行现场慢性毒理试验的方法

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