申请/专利权人：扬州大学

申请日：2020-08-24

公开（公告）日：2023-10-27

公开（公告）号：CN111965094B

主分类号：G01N15/14

分类号：G01N15/14;G01N21/64

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.10.27#授权;2020.12.08#实质审查的生效;2020.11.20#公开

摘要：一种比较体外诱导的PGC‑like细胞迁移效率的方法，属于生物技术领域。前期通过不同的诱导体系将ESCs或iPS细胞诱导分化形成PGC‑like细胞，将获得的PGC‑like细胞进行PKH26细胞膜表面标记，然后注射至孵化2.5天的受体鸡胚血管，封口后继续孵化至4.5天，分离鸡胚生殖嵴，进行冰冻切片后在荧光显微镜下观察红色荧光，并通过流式细胞术分析PKH26红色荧光的比例，从而比较不同体系诱导形成的PGC‑like细胞的迁移能力。结果发现能够明确对比出体外不同体系诱导的PGC‑like细胞的迁移能力的差异。本发明切实可靠，严谨准确，成效显著，为研究分析体外诱导的PGCs迁移归巢至生殖嵴的能力提供了一种新颖可行且高效的实验方法。

主权项：1.一种比较体外诱导的PGC-like细胞迁移效率的方法，其特征是，包括以下步骤：1PKH26红色荧光细胞膜表面标记；即，前期通过不同的诱导体系将ESCs或iPS细胞诱导分化形成PGC-like细胞，将获得的PGC-like细胞进行PKH26细胞膜表面标记；具体为：将不同体系诱导分化形成的PGC-like细胞收集于15ml离心管中，用不含血清的DMEM清洗；1400转分钟，离心8分钟，弃上层清液；加入1ml的稀释液C，轻轻吹打，制备2×的细胞悬液；将4μl的PKH26加入1ml稀释液C中，充分混匀，配制2×染色液；将染色液和细胞悬液混匀染色5分钟；加入等体积的血清终止染色反应，孵育1分钟；1400转分钟，离心8分钟，加入10ml完全培养基清洗两遍除去多于的染料；1400转分钟，离心8分钟，弃去所有清洗液，培养基成悬细胞，重新接种于培养皿中；2鸡胚血管注射；即，注射至孵化2.5天的受体鸡胚血管，封口后继续孵化至4.5天，分离鸡胚生殖嵴；3冰冻切片；进行冰冻切片后在荧光显微镜下观察红色荧光；具体为：将注射了PKH26红色荧光标记的PGC-like细胞的鸡胚继续孵化至第4.5天，分离鸡胚生殖嵴，将其放入冰冻切片托架上加入包埋剂涂抹均匀，使样品托保持平整；迅速将样品托放入液氮，冷冻固定至无气泡产生，20秒；将冷冻固定好的样品放入冰冻切片机中使温度平衡；安装好刀片，以20μm的厚度进行修片；修到样品处后，以8μm的厚度进行切片，用载玻片附着，显微镜下观察PKH26红色荧光，比较不同诱导体系获得的PGC-like在生产后代过程中的差异；4流式细胞分析PGC-like移植后迁移的数量；通过流式细胞术分析PKH26红色荧光的比例，从而比较不同体系诱导形成的PGC-like细胞的迁移能力；具体为：分别收集不同体系诱导形成的PGC-like，用PHK26红色荧光标记后按相同的数量注射到孵化至2.5天的鸡胚血管内，继续孵化至4.5天时收集生殖嵴分离PGC，并通过PHK26红色荧光进行流式细胞分析，比较不同体系诱导形成的PGC-like在受体鸡胚的迁移效率。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 扬州大学 一种比较体外诱导的PGC-like细胞迁移效率的方法

免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。

阅读全文 双屏查看 官方信息 专利公告 收藏专利 下载PDF 下载WORD