申请/专利权人：首都医科大学附属北京友谊医院

申请日：2022-08-15

公开（公告）日：2023-11-14

公开（公告）号：CN115453021B

主分类号：G01N30/06

分类号：G01N30/06;G01N30/72;G01N30/86;G01N33/68

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.11.14#授权;2022.12.27#实质审查的生效;2022.12.09#公开

摘要：本发明公开一种SDS脱细胞溶液及其在脱细胞处理或细胞外基质不可溶组分鉴定中的应用。首先公开了一种SDS脱细胞溶液，由溶剂PBS溶液和溶质0.5MNaCl、1.5％SDS、0.1％TritonX‑100、0.1％Tween20和1mM蛋白酶抑制剂混合物组成。进一步公开了其在脱细胞处理或细胞外基质不可溶组分鉴定中的应用。本发明脱细胞方法在SDS法脱细胞前，增加了冷冻解冻三次循环以及针尖扎眼等步骤，另外利用优化的SDS脱细胞溶液，适用于小鼠整体器官或组织或小块组织的脱细胞，操作简便，且经济成本较低，脱细胞效果显著，最大限度提高了ECM组分的纯度，以后续蛋白质谱鉴定ECM不可溶组分。

主权项：1.一种获得器官、组织或小块组织的ECM骨架的方法，其特征在于，包括如下步骤：将器官或组织或小块组织置于液氮冷冻后解冻；所述液氮冷冻后解冻是液氮处理1～2min后冰上解冻，重复3～5次；于解冻后的器官或组织或小块组织上扎眼；所述扎眼是利用1～2ml注射器针尖于解冻后的器官或组织或小块组织上扎眼；加入组织血细胞去除液去除血细胞；所述加入组织血细胞去除液去除组织血细胞是加入器官或组织或小块组织8～12倍体积的组织血细胞去除液，4℃400～800rpm震荡5～7h，弃去组织血细胞去除液；所述组织血细胞去除液由溶剂和溶质组成，所述溶质由如下浓度的各组分组成：0.5MNaCl、10mMTris-base和1mM蛋白酶抑制剂混合物，所述溶剂为双蒸水，所述组织血细胞去除液的pH＝7.5；加入SDS脱细胞溶液脱细胞；所述加入SDS脱细胞溶液脱细胞是加入器官或组织或小块组织8～12倍体积的SDS脱细胞溶液，25℃，800～1200rpm震荡32～60h，弃去SDS脱细胞溶液，所述SDS脱细胞溶液由溶剂和溶质组成，所述溶质由如下浓度的各组分组成：0.5MNaCl、1.5％SDS、0.1％TritonX-100、0.1％Tween20和1mM蛋白酶抑制剂混合物，所述溶剂为PBS溶液；清洗，得到ECM骨架，即可；所述清洗是加入器官或组织或小块组织8～12倍体积的清洗液，4℃，600～1000rpm震荡0.5-1.5h，重复3～5次；所述清洗液由溶剂和溶质组成，所述溶质为浓度为0.5mM～1.5mM的蛋白酶抑制剂混合物，所述溶剂为PBS溶液。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 首都医科大学附属北京友谊医院 一种SDS脱细胞溶液及其在脱细胞处理或细胞外基质不可溶组分鉴定中的应用

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