申请/专利权人：广州白云山花城药业有限公司

申请日：2021-01-12

公开（公告）日：2023-11-17

公开（公告）号：CN114764090B

主分类号：G01N30/06

分类号：G01N30/06;G01N30/02;G01N30/86

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.11.17#授权;2022.08.05#实质审查的生效;2022.07.19#公开

摘要：本发明涉及清脑复神液高效液相色谱串联质谱检测方法，采取清脑复神液中10种有效成分葛根素、芍药苷、柚皮苷、橙皮苷、黄芩苷、小檗碱、细叶远志皂苷、黄芩素、大黄素、大黄酚浓度的高效液相色谱串联质谱检测方法。包括以下步骤：1储备液的制备：各有效成分分别溶解于100％甲醇溶液中，制得标准品储备溶液；2待测样品溶液的制备；3将步骤2所得待测样品溶液进行液相色谱分离及质谱分析。本发明的检测方法色谱峰形极佳，每个化合物的通道都只有唯一的目标峰，操作简单、分析快速、特异性高、分离度高。

主权项：1.清脑复神液高效液相色谱串联质谱检测方法，采取清脑复神液中10种有效成分葛根素、芍药苷、柚皮苷、橙皮苷、黄芩苷、小檗碱、细叶远志皂苷、黄芩素、大黄素、大黄酚浓度的高效液相色谱串联质谱检测方法，包括以下步骤：1储备溶液的制备：取标准品葛根素、芍药苷、柚皮苷、橙皮苷、黄芩苷、小檗碱、细叶远志皂苷、黄芩素、大黄素、大黄酚，分别溶解于100％甲醇溶液中，制得标准品储备溶液；将标准品储备溶液混合，得到混合标准品储备溶液；2工作溶液的制备：分别用40±5％乙腈水溶液稀释所述混合标准品储备溶液，制得混合标准曲线样本工作溶液和混合质控样本工作溶液；3待测样品进样溶液的制备：待测样品溶液的制备：取清脑复神液，加入适量的40±5％乙腈水溶液稀释到合适的浓度，涡旋混匀，之后过0.22μm的微孔滤膜，滤液即为待测样品进样溶液；4将步骤3所得待测样品进样溶液进行液相色谱分离；将液相色谱分离后的样品进行质谱分析；5液相色谱条件包括：色谱柱：ACQUITYBEHC18，2.1×50mm,1.7μm,Waters；流速：0.3±0.05mLmin；进样体积：3.00±0.5μL；柱温：40±5℃；自动进样器温度：4±4℃；洗针液：50±5％乙腈水溶液；洗冲速度：30-40μLsec；洗针液体积：400-600μL；液相色谱分离所采用的洗脱方式为：以0.1±0.02％甲酸水溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，进行梯度洗脱，梯度洗脱的过程包括：0.0～0.5分钟，流动相B：40±5％→40±5％；0.5～1.0分钟，流动相B：40±5％→95±5％；1.0～2.0分钟，流动相B：95±5％→95±5％；2.0～2.2分钟，流动相B：95±5％→40±5％；2.2～3.0分钟，流动相B：40±5％→40±5％；6质谱分析条件包括：离子化模式：电喷雾离子源；正负离子同时检测模式；多反应监测；离子源参数：气帘气：20psi；离子源气体1：30psi；离子源气体2：30psi；离子源喷雾电压：正离子模式5500±10V，负离子模式-4500±10V；离子源温度：500±10℃；分辨率Q1Q3：UnitUnit；碰撞气：Medium；暂停时间：20±1msec；质谱采集时间为3.00±0.2min；各成分的四级杆质谱条件为：葛根素：离子模式：ESI+；离子对：417.2→297.1；去簇电压：100.0V；入口电压：10.00V；出口电压：25.00V；碰撞能量：39.00eV；停留时间：50.0msec；芍药苷：离子模式：ESI-；离子对：525.2→449.3；去簇电压：-100.0V；入口电压：-10.00V；出口电压：-16.00V；碰撞能量：-19.00eV；停留时间：50.0msec；柚皮苷：离子模式：ESI-；离子对：579.2→270.9；去簇电压：-100.0V；入口电压：-10.00V；出口电压：-16.00V；碰撞能量：-47.00eV；停留时间：50.0msec；橙皮苷：离子模式：ESI-；离子对：609.2→301.2；去簇电压：-100.0V；入口电压：-10.00V；出口电压：-16.00V；碰撞能量：-32.00eV；停留时间：50.0msec；黄芩苷：离子模式：ESI+；离子对：447.1→271.1；去簇电压：100.0V；入口电压：10.00V；出口电压：25.00V；碰撞能量：35.00eV；停留时间：50.0msec；小檗碱：离子模式：ESI+；离子对：336.1→320.0；去簇电压：100.0V；入口电压：10.00V；出口电压：25.00V；碰撞能量：35.00eV；停留时间：50.0msec；细叶远志皂苷：离子模式：ESI-；离子对：679.4→455.3；去簇电压：-100.0V；入口电压：-10.00V；出口电压：-16.00V；碰撞能量：-44.00eV；停留时间：50.0msec；黄芩素：离子模式：ESI-；离子对：269.1→240.8；去簇电压：-100.0V；入口电压：-10.00V；出口电压：-16.00V；碰撞能量：-31.00eV；停留时间：50.0msec；大黄素：离子模式：ESI-；离子对：269.1→225.0；去簇电压：-100.0V；入口电压：-10.00V；出口电压：-16.00V；碰撞能量：-38.00eV；停留时间：50.0msec；大黄酚：离子模式：ESI-；离子对：253.1→225.1；去簇电压：-100.0V；入口电压：-10.00V；出口电压：-16.00V；碰撞能量：-38.00eV；停留时间：100.0msec。

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