申请/专利权人：浙江大学

申请日：2023-10-18

公开（公告）日：2024-01-05

公开（公告）号：CN117343954A

主分类号：C12N15/82

分类号：C12N15/82;C12N15/60;A01H4/00

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.01.23#实质审查的生效;2024.01.05#公开

摘要：本发明公开了一种发根农杆菌介导的桃果实愈伤瞬时遗传转化方法，属于植物分子生物技术和基因工程技术领域。利用该遗传转化方法同源验证了桃氢过氧化物裂解酶PpHPL1基因的功能。该方法主要步骤如下：1果实愈伤组织诱导与继代；2表达载体构建和发根农杆菌转化；3携带目标基因的发根农杆菌侵染愈伤组织；4侵染后愈伤共培养及筛选；5愈伤取样检测。本发明实现了不同品种桃果实愈伤诱导，建立了同源瞬时遗传转化体系，可用于基因功能验证及目标基因筛选，可应用于桃分子育种进程。

主权项：1.一种发根农杆菌介导的桃果实愈伤瞬时遗传转化方法，其特征在于，按照以下关键步骤实现目标基因的瞬时过量表达及功能验证：1果实愈伤组织诱导与继代：先材料选取，无菌化处理，将果肉组织接种于SH诱导培养基，在适宜光照条件下愈伤诱导，产生的愈伤组织转移至SH继代培养基进行继代；2表达载体构建和发根农杆菌转化：使用同源重组法将目标基因构建于含有CaMV35S启动子的pSAK277过量表达载体，或使用Gateway方法，将目标基因片段构建于pHELLSGATE2沉默表达载体，利用化学转化法，将重组载体转入MSU440发根农杆菌感受态细胞；3携带目标基因的发根农杆菌侵染愈伤组织：先进行农杆菌准备，将携带目标基因-pSAK277表达载体或pHELLSGATE2表达载体的发根农杆菌感受态细胞在含有抗生素的LB液体培养基中活化，用SH液体培养基重悬菌液，然后进行愈伤组织侵染，将侵染后的愈伤转移到SH固体培养基上培养；4侵染后愈伤共培养及筛选：侵染后的愈伤组织在24℃黑暗条件下共培养3天，随后转移至含有400mgL头孢噻肟钠和50mgL卡那霉素的SH筛选培养基上暗培养4天；5愈伤取样检测：取筛选后的样品用液氮冷冻取样，样品进行RNA提取，逆转录和实时荧光定量PCR检测，确认基因过量抑制表达效果。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 浙江大学 一种发根农杆菌介导的桃果实愈伤瞬时遗传转化方法

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