申请/专利权人：扬州大学

申请日：2020-12-18

公开（公告）日：2024-01-19

公开（公告）号：CN112553253B

主分类号：C12N15/85

分类号：C12N15/85;C12N15/61;A01K67/033

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.01.19#授权;2021.04.13#实质审查的生效;2021.03.26#公开

摘要：本发明涉及一种fkbp39突变体果蝇模型的构建及鉴定方法，通过显微注射到的方式获得了fkbp39的突变体果蝇品系，并通过与doublebalance果蝇进行杂交与回交得到带有平衡基因且可以稳定遗传的fkbp39突变体果蝇；最后利用PCR和westernblot的方法，鉴定了fkbp39突变体果蝇。本发明利用Crisprcas9和显微注射技术，构建了fkbp39突变体果蝇模型，为FK506免疫抑制来治疗与TOR失调而引起的疾病提供了材料。

主权项：1.fkbp39突变体果蝇模型的构建方法，其特征是，首先构建两对位于fkbp39基因两端的gRNA，再利用基因重组技术将两对gRNA重组进pBFv-U6.2B质粒中，得到目的质粒pBFv-U6.2B-fkbp39-gRNA，最后通过显微注射获得fkbp39突变体果蝇；gRNA的设计：在fkbp39基因前63碱基与距离末端1018碱基处各设计一对gRNA，引物序列如下：fkbp39crisprsite63-F：5’——CTTCGTCGTTCCACATCTCGGGCG——3’fkbp39crisprsite63-R：5’——AAACCGCCCGAGATGTGGAACGAC——3’fkbp39crisprsite1018-F：5’——CTTCGTGGAGTTCGGTCCGATCTT——3’fkbp39crisprsite1018-R：5’——AAACAAGATCGGACCGAACTCCAC——3’；显微注射，将pBFv-U6.2B-fkbp39-gRNA质粒注射入nos-Cas9果蝇胚胎中，将注射得到的果蝇成虫与MKRSTM6B进行单只杂交，然后PCR鉴定子代果蝇，将鉴定有fkbp39突变体果蝇的果蝇管中的所有子代果蝇再次与MKRSTM6B进行单只杂交，最终得到fkbp39突变体果蝇。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 扬州大学 fkbp39突变体果蝇模型的构建及其鉴定方法

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