申请/专利权人：中国检验检疫科学研究院

申请日：2022-09-15

公开（公告）日：2024-01-23

公开（公告）号：CN115407010B

主分类号：G01N30/88

分类号：G01N30/88;G01N30/72

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.01.23#授权;2022.12.16#实质审查的生效;2022.11.29#公开

摘要：本发明涉及一种利用广泛靶向代谢组学技术鉴别食用槟榔中活性成分的方法，该方法具体包括：1食用槟榔样品及质控样品的制备；2食用槟榔样品的检测分析；3食用槟榔样品的定性定量分析；4代谢组学数据的处理与分析。本发明的方法系统全面地分析了食用槟榔中的活性成分，极大地丰富了对其活性成分的认识，为槟榔进一步开发和利用提供了参考依据。

主权项：1.一种利用广泛靶向代谢组学技术鉴别食用槟榔中活性成分的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）食用槟榔样品及质控样品的制备：向食用槟榔的粉末中加入溶剂，经涡旋、静置、离心后吸取上清，用微孔滤膜过滤样品，并保存于进样瓶中；所有样品溶液均精确移取100µL充分混合，制成质量控制样本溶液，用于超高效液相色谱和串联质谱（UPLC-QTRAPMSMS）分析；（2）食用槟榔样品的检测分析：采用超高效液相色谱和串联质谱仪，在多反应监测模式下采集质谱数据，在获得不同样本的代谢物质谱数据后，通过MultiQuant软件对不同样品中同一代谢物的质谱峰进行积分和校正，以保证定性和定量的准确性；（3）食用槟榔样品的定性定量分析：将质谱数据与迈维生物技术有限公司自建的数据库MWDB进行比对，鉴定样品中的代谢成分，基于三重四极杆质谱的多反应监测模式进行定量分析；（4）代谢组学数据的处理与分析：按照代谢物类别对检测到的代谢物进行划分，得到食用槟榔中主要类型的代谢物，根据各化合物的色谱峰相对面积判断化合物的相对含量水平；所述步骤（1）中加入溶剂为甲醇，食用槟榔粉末与甲醇的质量体积比为0.5g：12mL，所述甲醇的体积分数为70%；所述步骤（3）中槟榔代谢成分的定性定量分析是通过以下策略完成的：基于迈维生物技术有限公司自建的数据库MWDB，根据保留时间、子母离子对信息和二级质谱信息与采集的质谱数据进行比对，对食用槟榔样品代谢产物进行定性分析；分析时去除了同位素信号，含K+、Na+、NH4+的重复信号，以及本身是其他更大分子量物质的碎片离子的重复信号；基于三重四极杆质谱的多反应监测模式进行定量分析；在MRM模式中，第一重四极杆首先筛选目标物的前体离子，排除其他物质对应的前体离子以消除它们的干扰；前体离子在碰撞室中经碰撞诱导解离成碎片，然后通过第三重四极杆进行碎片离子筛选，使定量更加准确，提高重复性；在获得不同样本的代谢物质谱数据后，通过MultiQuant软件对不同样品中同一代谢物的质谱峰进行校正和整合，以保证定性和定量的准确性；所述步骤（4）中根据各化合物的色谱峰相对面积判断化合物的相对含量水平，选择色谱峰相对面积≥1.00×107的认为其相对含量较高，获得40种主要类型相对含量较高的代谢成分；获得的40种主要类型相对含量较高的代谢成分如下：（1）黄酮类化合物12种：川陈皮素、苜蓿素、桔皮素、3,5,6,7,8,3',4'-七甲氧基黄酮、水仙苷、鼠李素-3-O-芸香糖苷、2'-羟基-5-甲氧基染料木素-O-鼠李糖-葡萄糖、异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷、3,5,7,4'-四羟基-8-甲氧基黄酮-3-O-葡萄糖苷-7-O-鼠李糖苷、牡荆素-2''-O-半乳糖苷、牡荆素葡萄糖苷和棕矢车菊素；（2）酚酸类化合物8种：乙基麦芽酚、邻苯二甲酸二丁酯、邻苯二甲酸二异丁酯、2-羟基肉桂酸、4-硝基苯酚、α-羟基肉桂酸、4-羟基苯甲酸和2,5-二羟基苯甲醛；（3）脂质类化合物15种：棕榈醛、溶血磷脂酰胆碱18:3、溶血磷脂酰胆碱18:3（2n异构）、溶血磷脂酰胆碱18:2、溶血磷脂酰乙醇胺16:0、溶血磷脂酰乙醇胺18:2、溶血磷脂酰乙醇胺18:2（2n异构）、溶血磷脂酰胆碱16:0、硬脂酸、溶血磷脂酰胆碱18:1、溶血磷脂酰乙醇胺18:1、溶血磷脂酰胆碱18:1（2n异构）、溶血磷脂酰胆碱16:1、溶血磷脂酰乙醇胺18:1（2n异构）和溶血磷脂酰胆碱18:2（2n异构）；以及（4）生物碱类化合物5种：N-苯甲酰基-2-氨基乙基-β-D-吡喃葡萄糖苷、葫芦巴碱、N-苯亚甲基异甲胺、阿魏酰腐胺和组氨醇。

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