申请/专利权人：泉脉农业科技有限公司

申请日：2023-02-09

公开（公告）日：2024-01-26

公开（公告）号：CN116098059B

主分类号：C12N5/00

分类号：C12N5/00;A01H4/00

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.01.26#授权;2023.05.30#实质审查的生效;2023.05.12#公开

摘要：本发明公开了一种洋桔梗游离小孢子与花药共培养诱导愈伤的方法，涉及花卉育种技术领域。所述洋桔梗游离小孢子与花药共培养诱导愈伤的方法包括以下步骤：选取不同品种的杂交一代洋桔梗的未开花花蕾，经预培养、离心，得花药营养液和花药提取物，再选取不同品种的杂交一代洋桔梗的单核靠边期花蕾经预培养、消毒、粉碎、离心后，加入含有蔗糖的B5培养液，得小孢子提取物，将小孢子提取物移至表面有花药提取物的K4培养基中，撒入花药营养液，共培养诱导得愈伤组织。通过本发明的方法可以克服不同基因型对洋桔梗单倍体育种的影响，获得单倍体的愈伤组织，提高洋桔梗单倍体的诱导率，进一步解决了我国洋桔梗种子生产问题，具有巨大的潜在商业价值。

主权项：1.一种洋桔梗游离小孢子与花药共培养诱导愈伤的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）选取杂交一代洋桔梗中未开花花蕾，于4℃下预培养24h后剥出花药，经研磨、离心后，将离心后液体灭菌，得花药营养液，将离心后固体干燥、研磨、灭菌，得花药提取物；离心转速为15000-17000rpm，离心时间为8-12min，干燥温度为55℃，干燥时间为24h；（2）选取与步骤（1）相同品种的杂交一代洋桔梗的单核靠边期花蕾，4℃下预培养24h后剥出花药，消毒，将消毒后的花药放入含有蔗糖的B5培养液中粉碎，得混合液，将混合液过滤，滤液一次离心，弃去上清液后，再加入含有蔗糖的B5培养液，二次离心，洗涤二次离心后的固体，得小孢子提取物；消毒处理为：将花药依次用酒精、无菌水、次氯酸钠和无菌水进行冲洗；一次离心和二次离心转速均为1100-1300rpm，离心时间均为10min；（3）将步骤（2）制得的小孢子提取物撒入表面覆有步骤（1）制得的花药提取物的K4培养基中，再加入步骤1制得的花药营养液，于22-25℃下黑暗条件下共培养诱导30-40天即得愈伤组织；K4培养基的组成为：MS培养基、2mgL2，4-D、1mgLKT、1mgL6-BA、0.2mgLNAA、30gL蔗糖和7gL琼脂。

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