申请/专利权人：深圳市杰安能生物医学仪器有限公司

申请日：2023-10-26

公开（公告）日：2024-01-30

公开（公告）号：CN117466985A

主分类号：C07K14/435

分类号：C07K14/435;C07K1/14

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.02.20#实质审查的生效;2024.01.30#公开

摘要：秀丽隐杆线虫膜蛋白复合体的纯化方法,本发明属于膜蛋白分离纯化技术领域，本发明的提供的一种分离出秀丽隐杆线虫中的膜蛋白复合体的方法，将秀丽隐杆线虫进行均质化处理来制备膜，后通过去垢剂溶解膜萃取膜蛋白，再用beads亲和的方法纯化膜蛋白，为了保证蛋白活性，用竞争性洗脱或是蛋白酶切的方法获得膜蛋白。采用上述方法纯化出的秀丽隐杆线虫体内的膜蛋白，有利于解析膜蛋白的结构与功能。

主权项：1.一种秀丽隐杆线虫膜蛋白复合体的纯化方法，其特征在于，所述的纯化方法包括如下步骤：第一，溶膜处理：用终浓度为1％～3％的DDM于2～8℃对破碎充分分散均匀的虫体进行溶膜萃取3～5h，萃取完毕18000～19500rpm离心，弃去沉淀和上层的脂质，得上清液；第二，标签蛋白与特异性beads结合：将平衡好的Beads加入到上清液中，将上清液转至离心管中，于2～8℃垂直混合仪上过夜结合；第三，洗杂：磁力架吸附或离心弃去上清，保留与目标蛋白结合的Beads，用Beads洗杂缓冲液洗涤beads除去beads上结合的非特异性结合杂蛋白；第四，洗脱：采用竞争肽竞争性洗脱的方法洗脱膜蛋白复合体，若是含有蛋白酶切割位点位于标签和目的蛋白之间，还可用蛋白酶切割的方法使目的蛋白与beads分离。

全文数据：

权利要求：

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