申请/专利权人：湖南省植物保护研究所

申请日：2021-10-29

公开（公告）日：2024-02-02

公开（公告）号：CN113913450B

主分类号：C12N15/78

分类号：C12N15/78;C12N15/56;C12N9/42;C12N1/21;A01N63/27;A01P21/00;A01G22/05;A01C21/00;C12R1/38

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.02.02#授权;2022.01.28#实质审查的生效;2022.01.11#公开

摘要：本发明公开了一种运用沼泽红假单胞菌表达壳聚糖酶的方法、壳聚糖酶、重组质粒、重组菌、发酵菌剂及应用，将编码枯草芽孢杆菌的壳聚糖酶基因序列构建重组质粒，重组质粒通过大肠杆菌接触转化至沼泽红假单胞菌菌体内，得到沼泽红假单胞菌重组菌，将沼泽红假单胞菌重组菌发酵培养，获得壳聚糖酶。本发明的运用沼泽红假单胞菌表达壳聚糖酶的方法，通过构建含有壳聚糖酶基因的重组质粒，并在沼泽红假单胞菌中自然表达，不需要壳聚糖诱导，不影响重组菌的生长，表达的胞外壳聚糖酶能够持续水解壳聚糖形成壳寡糖，改善壳聚糖的溶解性，含有壳寡糖的发酵菌剂能够直接使用。

主权项：1.一种包括沼泽红假单胞菌重组菌的发酵菌剂，其特征在于，所述沼泽红假单胞菌重组菌包括重组质粒，所述重组质粒包括编码枯草芽孢杆菌的壳聚糖酶基因和pBBR1MCS-2质粒，所述编码枯草芽孢杆菌的壳聚糖酶基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；所述沼泽红假单胞菌重组菌的制备包括如下步骤：将重组质粒热击转换大肠杆菌WM3064，阳性转化子与沼泽红假单胞菌共培养3～7天，将共培养菌从培养基平板上洗脱，再涂布到含有硫酸卡拉霉素的培养基平板上，筛选沼泽红假单胞菌重组菌；所述发酵菌剂的制备包括如下步骤：沼泽红假单胞菌重组菌在含有50μgmL的硫酸卡拉霉素的液体发酵培养基中，25～30℃，5～25W色温3000～6500K的日光灯，厌氧光照条件下培养至对数生长期，获得培养物，再向培养物添加1～2％的壳聚糖溶液，继续培养5～7天，获得发酵菌剂。

全文数据：

权利要求：

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