申请/专利权人：博晟生医股份有限公司

申请日：2017-12-29

公开（公告）日：2024-04-16

公开（公告）号：CN110382523B

主分类号：C07K14/51

分类号：C07K14/51;A61K38/18

优先权：["20161230 US 62/440,663","20170925 US 62/562,515"]

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.16#授权;2023.04.21#专利申请权的转移;2019.11.19#实质审查的生效;2019.10.25#公开

摘要：本发明提供一种重组多肽、包含该重组多肽的同型二聚体和异型二聚体蛋白、编码该重组多肽的核酸分子，以及包含该核酸分子的载体及宿主细胞。本发明也提供包含该重组多肽的组合物，以及制备、使用该重组多肽的方法。

主权项：1.一种同型二聚体蛋白，其包含二个相同的重组多肽，其中该重组多肽的氨基酸序列由第一肽段、第二肽段、及第三肽段界定，其中：该第一肽段的序列为SEQIDNO:39；该第二肽段的序列为SEQIDNO:49；及该第三肽段的序列为SEQIDNO:61；其中该第一肽段择一融合于该第二肽段的C端或N端，该第三肽段融合于该第二肽段或该第一肽段，该第二肽段包含一个分子内二硫键，且其中该重组多肽具有诱导碱性磷酸酶活性的能力；其中该同型二聚体蛋白包含在该二个重组多肽的该第一肽段之间的分子间二硫键。

全文数据：重组多肽及其组合物及方法技术领域电子送件的序列表参照电子送件的序列表内容Name:3902.001PC01_SeqListing_ST25.txt,Size:134,451bytes；andDateofCreation:December21,2017已整合入本公开的内文中以供参照。现有技术骨是一种高度刚性的组织，构成脊椎骨骼的一部分并具有衍生自其广泛基质结构的独特机械性质。动物终其一生中，骨组织会不断地更新。骨生成及更新的过程由特定的细胞进行。成骨作用osteogenesis，骨生成或骨成长是由成骨细胞osteoblasts，骨生成细胞进行。骨再成型作用Boneremodeling是由称为破骨细胞osteoclasts的骨吸收细胞与骨生成的成骨细胞间相互作用所完成。由于这些过程是由特定的活细胞进行，所以化学例如：药物和或激素、物理及物理化学的变化可影响骨组织的质量、数量及形状。各种生长因子例如：PDGF及细胞激素会参与骨生成的过程。因此，辨识出可在预定位点诱导骨生成的生理可接受的化学介质例如：激素、药物、生长因子及细胞激素是相当有价值的。然而，为了成功地将化学介质作为治疗工具，需克服几个障碍。障碍之一包括开发具有骨诱导osteoinductive活性的重组多肽。例如：重组人类血小板衍生的生长因子-BB中的骨诱导活性尚未得到证实。另一障碍是在化学介质中骨诱导的变异性。例如：去矿物质骨基质demineralizedbonematrix，DBM是一种化学介质，是一种衍生自加工骨的骨诱导同种异体移植物。市场上以DBM为基础的产品越来越多，但是在不同产品及同一产品不同批号之间已发现骨诱导的变异性。因此，需要一种化学介质展现一致的骨诱导活性，例如：重组多肽及相关组合物。发明内容本公开涉及一种重组多肽，其包含：第一域domain，其选自由SEQIDNO:35及SEQIDNO:39所组成的群组；第二域，其选自由SEQIDNO:47及SEQIDNO:49所组成的群组；及第三域，其选自由SEQIDNO:57及SEQIDNO:61所组成的群组；其中该第一域择一融合于该第二域的C端或N端，该第三域融合于该第二域或同时融合该第一域及该第二域，且其中该重组多肽具有诱导碱性磷酸酶活性的能力。在一个实施方案中，其中该第一域相较于该第二域位于接近该重组多肽的C端、该第三域相较于该第二域位于接近该重组多肽的N端、或该第一域相较于该第三域位于接近该重组多肽的N端。在一个实施方案中，该重组多肽的该第二域包含在该第二域的第23个氨基酸和该第二域的第27个氨基酸之间的一个分子内二硫键intramoleculardisulfidebond。在一个实施方案中，该重组多肽的该第三域包含：第氨基酸序列PKACCVPTESEQIDNO:356及第二氨基酸序列GCGCRSEQIDNO:357，且其中该第三域包含在该第一和该第二氨基酸序列之间的二个分子内二硫键。在一个实施方案中，该重组多肽包含在该第氨基酸序列的该第4个氨基酸和该第二氨基酸序列的该第2个氨基酸之间的第一分子内二硫键，以及在该第氨基酸序列的该第5个氨基酸和该第二氨基酸序列的该第4个氨基酸之间的第二分子内二硫键。在一个实施方案中，该重组多肽包含在该第氨基酸序列的该第5个氨基酸和该第二氨基酸序列的该第2个氨基酸之间的第一分子内二硫键，以及在该第氨基酸序列的该第4个氨基酸和该第二氨基酸序列的该第4个氨基酸之间的第二分子内二硫键。在一个实施方案中，该重组多肽选自由SEQIDNO:260、SEQIDNO:268、SEQIDNO:276、SEQIDNO:284、SEQIDNO:292、SEQIDNO:300、SEQIDNO:308、SEQIDNO:316、SEQIDNO:324、SEQIDNO:332、SEQIDNO:340及SEQIDNO:348所组成的群组。本公开涉及一种同型二聚体蛋白，其包含任一如上所述的二个相同的重组多肽，其中该同型二聚体蛋白包含在该二个相同重组多肽的第一域之间的一个分子间二硫键。在一个实施方案中，该同型二聚体蛋白包含在该二个相同重组多肽的其一的该第一域中的第15个氨基酸和另一重组多肽的该第一域中的第15个氨基酸之间的一个分子间二硫键。在一个实施方案中，该同型二聚体蛋白的该二个相同重组多肽的其一或全部的该第二域包含一分子内二硫键。在一个实施方案中，该同型二聚体蛋白的每一该重组多肽的该第三域包含：第氨基酸序列PKACCVPTESEQIDNO:356及第二氨基酸序列GCGCRSEQIDNO:357，且其中该同型二聚体蛋白包含在该二个相同重组多肽的其一的该第三域中的该第氨基酸序列和该另一重组多肽的该第三域中的该第二氨基酸序列之间的二个分子间二硫键。在一个实施方案中，该同型二聚体蛋白包含在该二个相同重组多肽的其一的该第氨基酸序列的该第4个氨基酸和该另一重组多肽的该第二氨基酸序列的该第2个氨基酸之间的第一分子间二硫键，以及在该二个相同重组多肽的其一的该第氨基酸序列的该第5个氨基酸和该另一重组多肽的该第二氨基酸序列的该第4个氨基酸之间的第二分子间二硫键。在一个实施方案中，该同型二聚体蛋白包含在该二个相同重组多肽的其一的该第氨基酸序列的该第5个氨基酸和该另一重组多肽的该第二氨基酸序列的该第2个氨基酸之间的第一分子间二硫键，以及在该二个相同重组多肽的其一的该第氨基酸序列的该第4个氨基酸和该另一重组多肽的该第二氨基酸序列的该第4个氨基酸之间的第二分子间二硫键。在一个实施方案中，该同型二聚体蛋白的每一该重组多肽的该第三域包含：第氨基酸序列PKACCVPTESEQIDNO：356和第二氨基酸序列GCGCRSEQIDNO：357，且该同型二聚体蛋白包含：在该二个相同重组多肽的其一的该第三域中的该第氨基酸序列和该其一重组多肽的该第三域中的该第二氨基酸序列之间的二个分子内二硫键。在一个实施方案中，该同型二聚体蛋白包含：在该其一重组多肽的该第氨基酸序列的该第4个氨基酸和该其一重组多肽的该第二氨基酸序列的该第2个氨基酸之间的第一分子内二硫键，以及在该其一重组多肽的该第氨基酸序列的该第5个氨基酸和该其一重组多肽的该第二氨基酸序列的该第4个氨基酸之间的第二分子内二硫键。在一个实施方案中，该同型二聚体蛋白包含：在该其一重组多肽的该第氨基酸序列的第5个氨基酸和该其一重组多肽的该第二氨基酸序列的该第2个氨基酸之间的第一分子内二硫键，以及在该其一重组多肽的该第氨基酸序列的该第4个氨基酸和该其一重组多肽的该第二氨基酸序列的该第4个氨基酸之间的第二分子内二硫键。本公开涉及一种异型二聚体蛋白，其包含任一如上所述的重组多肽的二个相异的重组多肽，其中该异型二聚体蛋白包含：在该二个相异重组多肽的第一域之间的一个分子间二硫键。在一个实施方案中，该异型二聚体蛋白包含在该二个相异重组多肽的其一的该第一域中的第15个氨基酸和另一重组多肽的该第一域中的第15个氨基酸之间的一个分子间二硫键。在一个实施方案中，该异型二聚体蛋白的该二个相异重组多肽的其一或全部的该第二域包含一分子内二硫键。本公开涉及一种重组多肽，其包含氨基酸序列，该氨基酸序列选自由SEQIDNO:260、SEQIDNO:268、SEQIDNO:276、SEQIDNO:284、SEQIDNO:292、SEQIDNO:300、SEQIDNO:308、SEQIDNO:316、SEQIDNO:324、SEQIDNO:332、SEQIDNO:340及SEQIDNO:348所组成的群组，其中该重组多肽具有诱导碱性磷酸酶活性的能力。本公开涉及一种组合物，其包含任一如上所述的重组多肽、任一如上所述的同型二聚体蛋白或任一如上所述的异型二聚体蛋白。本公开涉及一种持续性释出组合物，其包含磷酸钙载体，该磷酸钙载体选自由磷酸三钙TCP、α-磷酸三钙α-TCP、β-磷酸三钙β-TCP、双相磷酸钙BCP及其混合物所组成的群组；及可生物分解基质，该可生物分解基质选自由聚乳酸PLA、聚羟基乙酸PGA、聚乳酸-羟基乙酸共聚物PLGA、聚乙烯醇PVA及其混合物所组成的群组；及如前所述的同型二聚体蛋白。更进一步地，该持续性释出组合物包含a约2-11％ww的该磷酸钙载体；b约88-97％ww的该可生物分解基质；及c约0.017-0.039％ww的该同型二聚体蛋白。本公开涉及一种需要这种治疗的对象中促进长骨骨折愈合的方法，其包含：制备含有如前所述的同型二聚体蛋白的组合物，该同型二聚体蛋白均匀地容置在一缓释型可生物分解磷酸钙载体内，该可生物分解磷酸钙载体供该同型二聚体蛋白流入该可生物分解磷酸钙载体于该对象体内时不渗漏，从而使该长骨骨折愈合限制于该磷酸钙载体的体积内；且植入该组合物于该长骨骨折发生位置，其中该同型二聚体蛋白的量为约0.03mgg至约3.2mgg的该磷酸钙载体。在一个实施方案中，该促进长骨骨折愈合的方法更进一步包含：随着该磷酸钙载体降解，该所容置的同型二聚体蛋白于该磷酸钙载体位置逐渐暴露，其中该磷酸钙载体具有约0.4至约1.8的钙与磷酸盐比率。本公开涉及一种可生物分解组合物，具有诱导骨生成以在一个位置形成骨质的能力，其包含：如前所述的同型二聚体蛋白；及可生物分解磷酸钙载体，其具有多个孔洞。更进一步地，该同型二聚体蛋白是约0.003-0.32％ww。在一个实施方案中，其中该可生物分解组合物的该可生物分解磷酸钙载体的孔隙率大于70％，且孔径为约300μm至约600μm。在一个实施方案中，该可生物分解磷酸钙载体的孔洞是连通分布于该可生物分解磷酸钙载体；其中该同型二聚体蛋白的有效量为约0.03mgg至约3.2mgg的该可生物分解磷酸钙载体。在一个实施方案中，该可生物分解组合物适用于使一个组织凸出，该组织选自鼻沟、眉间、中面部组织、下颚轮廓线、下巴及脸颊。在一个实施方案中，该位置是选自长骨骨折缺损、二个相邻脊椎骨体的空间、不愈合骨的缺陷、上颚截骨切口、下颚截骨切口、矢状劈开截骨切口、颏整型截骨切口、快速颚扩张截骨切口、以及在二个相邻脊椎骨的二个相邻横突之间纵向延伸的空间。在一个实施方案中，单一剂量的该同型二聚体蛋白为约0.006mg至约15mg。在一个实施方案中，该可生物分解磷酸钙载体供该同型二聚体蛋白流入该可生物分解磷酸钙载体于该对象体内时不渗漏，从而使所形成的骨质限制于该可生物分解磷酸钙载体的体积内。本公开涉及一种用以促进关节固定arthrodesis的方法，其包含将如前所述的该同型二聚体蛋白及可生物分解磷酸钙载体施用在一个畸形或退化的关节。在一个实施方案中，施用该同型二聚体蛋白的步骤是包括每一次治疗将约0.006mg至约10.5mg的该同型二聚体蛋白施用至该畸形或退化的关节。本公开涉及一种促进脊椎融合的方法，该方法的步骤包含：暴露一个上脊椎骨和一个下脊椎骨；在该上脊椎骨和该下脊椎骨之间辨别出一个用以融合的部位；在该上脊椎骨及该下脊椎骨的各个用以融合的该部位上暴露一个骨表面；及于该部位上施用如前所述的该同型二聚体蛋白及可生物分解磷酸钙载体。在一个实施方案中，该可生物分解磷酸钙载体是一种不可压缩递送载具，且其中该不可压缩递送载具是施用于需要骨生长但不自然发生骨生长的二个骨表面之间的该部位。在一个实施方案中，该可生物分解磷酸钙载体包含至少一个用以施用于该部位的植入棒，该植入棒在该上脊椎骨及该下脊椎骨之间纵向延伸。本公开涉及一种脊椎融合装置，其含有如前所述的可生物分解组合物；及一个脊椎融合器，其被配置用以容置该可生物分解磷酸钙载体。本公开涉及一种于有需求的对象的脊椎中产生骨质以融合二个相邻脊椎骨体的方法，其步骤包括：准备用于产生该骨质的组合物；及将该组合物引入该二个相邻脊椎骨体之间的位置。更进一步地，该组合物含有如前所述的同型二聚体蛋白，该同型二聚体蛋白均匀地容置在一缓释型可生物分解载体内，该可生物分解载体供该同型二聚体蛋白流入该可生物分解载体于该对象体内时不渗漏，从而使所形成骨质限制于该缓释型可生物分解载体的体积内。随着该缓释型可生物分解载体降解，所容置的同型二聚体蛋白于该缓释型可生物分解载体位置逐渐暴露，且其中该同型二聚体蛋白的量为该位置约0.2mg部位即每一部位约0.2mg至约10.5mg部位即每一部位约10.5mg。在一个实施方案中，该缓释型可生物分解载体具有多孔结构，且来自该二个相邻脊椎骨的细胞迁移到该多孔结构中以产生该骨质。在一个实施方案中，该缓释型可生物分解载体具有一个初始体积，且随着该缓释型可生物分解载体被再吸收，该骨质取代该缓释型可生物分解载体的该初始体积。本公开涉及一种在有需求的对象中通过后方融合术posteriorfusion或椎间孔融合术transforaminalfusion用以融合相邻脊椎骨体的方法，其步骤包括：准备一个盘空间，用以在该相邻脊椎骨之间的椎间空间中接收一个椎间盘植入物；将含有如前所述的同型二聚体蛋白的一个缓释型载体引入该椎间盘植入物中；并将该椎间盘植入物引入该相邻脊椎骨之间的盘空间中，以在该盘空间中产生骨质。更进一步地，该同型二聚体蛋白的量为约0.2mg部位至约10.5mg部位的该缓释型载体。本公开涉及一种用于填补骨孔隙的可模制组合物，其包含：含有该可模制组合物约90wt％至约99.5wt％的可模制基质；及如前所述的该同型二聚体蛋白。更进一步地，于植入后约1、24、48、72、168、240或约336小时，从该可模制组合物释出少于约25％百分率的该同型二聚体蛋白。本公开涉及一种持续性释出组合物，其包含磷酸钙载体；可生物分解基质；及如前所述的重组蛋白。更进一步地，该磷酸钙载体是约2-11％ww，该可生物分解基质是约88-97％ww，及该重组蛋白是约0.017-0.039％ww。在一个实施方案中，该磷酸钙载体选自由磷酸三钙TCP、α-磷酸三钙α-TCP、β-磷酸三钙β-TCP、双相磷酸钙BCP及其任意组合所组成的群组。在一个实施方案中，该可生物分解基质选自由聚乳酸PLA、聚羟基乙酸PGA、聚乳酸-羟基乙酸共聚物PLGA、聚乙烯醇PVA及其任意组合所组成的群组。本公开涉及一种在一个对象中用以促进长骨骨折愈合的方法，其包含：a制备组合物，其含有如前所述的重组蛋白及可生物分解磷酸钙载体；b使该组合物硬化；及c在一个位置植入该组合物。更进一步地，该位置是所述对象中发生长骨骨折的受伤部位，且该重组蛋白是约0.003-0.32％ww。在一个实施方案中，该方法进一步包含d随着该磷酸钙载体降解，于该位置暴露该组合物。在一个实施方案中，该磷酸钙载体包含约0.4-1.8的钙与磷酸盐比率calcium-to-phosphateratio。本公开涉及一种在一个对象中用以促进关节固定arthrodesis的方法，其步骤包括：将含有如前所述的重组蛋白及可生物分解磷酸钙载体之组合物施用于所述对象中的一个位置。更进一步地，该重组蛋白的量是约0.006至10.5mg，且该位置选自由畸形关节、退化性关节及其组合所组成的群组。本公开涉及一种在一个对象中用以促进脊椎融合的方法，其包含：a暴露所述对象的一个上脊椎骨和一个下脊椎骨；b在该上脊椎骨和该下脊椎骨之间辨别出一个用以融合的部位；c在该上脊椎骨和该下脊椎骨的各个用以融合的部位上暴露一个骨表面；及d于该部位上施用如前所述的重组蛋白及可生物分解磷酸钙载体。在一个实施方案中，该可生物分解磷酸钙载体是一种不可压缩递送载具，其能够施用于需要骨生长但不自然发生骨生长的部位。在一个实施方案中，该可生物分解磷酸钙载体于该用以促进脊椎融合的方法中包含有在该上脊椎骨和该下脊椎骨之间纵向延伸的一植入棒。本公开涉及一种脊椎融合装置，其含有如前所述的可生物分解组合物；及一个脊椎融合器，其被配置用以保留该可生物分解磷酸钙载体。本公开涉及一种在一个对象的脊椎中用以产生骨质以融合二个相邻脊椎骨体的方法，其步骤包括：a准备用于产生该骨质的组合物，该组合物包含有如前所述的重组蛋白及一缓释型可生物分解载体；b使该组合物硬化；c将该组合物引入该二个相邻脊椎骨体之间；及d释出该组合物并暴露该重组蛋白。更进一步地，该重组蛋白的量是约0.2至10.5mg部位。在一个实施方案中，该缓释型可生物分解载体具有能够接收用以产生骨质的细胞的多孔结构。在一个实施方案中，该缓释型可生物分解载体具有一个初始体积，且随着该缓释型可生物分解载体被再吸收，该骨质取代该缓释型可生物分解载体的该初始体积。本公开涉及一种于有需求的对象中用以融合相邻脊椎骨体的方法，其步骤包括：a准备一个盘空间，用以在该相邻脊椎骨之间接收一个椎间盘植入物；b将包含有如前所述的重组蛋白的缓释载体引入该椎间盘植入物中；c将该椎间盘植入物引入该盘空间；及d于该盘空间中产生骨质。更进一步地，该重组蛋白的量是约0.2至10.5mg部位。本公开涉及一种用以植入于骨孔隙中的可模制组合物，其包含：可模制基质及如前所述的重组蛋白。更进一步地，该可模制基质的量是约90至99.5％ww；并且于植入后的预定时间之后，少于25％的该重组蛋白从该可模制组合物释放。在一个实施方案中，该预定时间是约1、24、48、72、168、240或336小时。附图简要说明图1A和1B所示为实验组A-G的雌兔NZW品系尺骨的代表性X光影像。每个实验组中的尺骨包含外科手术创造的20mm大的圆周缺陷即缺损部位。于实验组A-F，将植入物制成于该缺损部位之中。实验组A-E中的每个尺骨接受200mg的β-TCP植入物。实验组A、B、C和D中的该β-TCP是分别作为包含有二个重组多肽的同型二聚体蛋白即SEQIDNO：260，含有分子内二硫键C44-C48的2、6、20和60μg载体。实验组E中的该β-TCP不携带任何重组多肽。实验组F接受髂骨碎片自体植入物。实验组G在该缺损部位未接受任何植入物。对实验组A-G各组于0周即手术后立即摄影，以「0W」表示时，以及在手术后2、4、6及8周即分别以「2W」、「4W」、「6W」及「8W」表示时拍摄X光影像。该尺骨上的植入部位实验组A-F或缺损部位实验组G位于每个影像中白色星号的正上方。图2A及2B所示为实验组A-G的代表性计算机断层扫描CT影像。植入部位实验组A-F或缺损部位实验组G中心处的横断面影像随着时间的变化，所显示为0周即手术后立即摄影，以「0W」表示，以及手术后4周及8周即分别以「4W」和「8W」表示。实验组A-G是如图1所述。图3所示为未经手术改造无缺损的尺骨及实验组A-G即分别以「A」至「G」表示的抗扭强度测试结果图示。显示了牛顿-公尺Newton-meters，以「N-m」表示的最大扭矩。实验组A-G是如图1所述。图4至9所示为实验组1至6的绵羊脊柱的代表性X光影像。实验组1至3是接受3.5g的β-TCP单一植入物，该植入物是分别带有10.5、3.5或1.05mg包含有二个重组多肽的同型二聚体蛋白即SEQIDNO：260，含有分子内二硫键C44-C48、C80-C112及C79-C114。实验组4是接受3.5g的β-TCP单一植入物，该植入物不带有任何同型二聚体蛋白。实验组5是接受骨自体移植的单一植入物。实验组6是接受含有3.15mgrhBMP-2的可吸收胶原蛋白海绵的单一植入物。图4至9的每张图中，从左至右所示分别为实验组1至6的手术后post-operatively、第4周及第12周收获拍摄的放射线图像。于图4至9中，分别将实验组1至6指定为「2179」、「2192」、「2187」、「2160」、「2162」及「2166」。图10a至10y所示为5个实验组即分别为对照组、Hp35组、Hp140组、Hp560组及Hp2240组的雌犬米格鲁犬品系尺骨的代表性X光影像，其是拍摄于手术后1、2、4、8及12周即分别以「1W」、「2W」、「4W」、「8W」及「12W」表示。每一实验组中的尺骨包含外科手术创造的25mm大的圆周缺损即缺损部位。于该5个实验组，将植入物置于该缺损部位之中。用于对照组、Hp35组、Hp140组、Hp560组及Hp2240组该等实验组中的植入物，是800mg的β-TCP，其分别带有0、35、140、560或2240μg包含有二个重组多肽的同型二聚体蛋白即SEQIDNO：260，含有分子内二硫键C44-C48，及分子间二硫键C80-C112及C79-C114。图11所示为椎体融合器的代表性图式。每排左侧的图像所示为该椎体融合器的俯视图，右侧的图像所示为侧视图。放大倍率：顶行＝x0.67；中行＝x2；底行＝x4。椎体融合器尺寸：约8mm×24mm×10mm。图12所示为运动角度范围的代表性图式，分别为：在0周时测量接受150mg的β-TCP植入物的绵羊脊柱即「零时」；在12周时测量接受150mg的β-TCP植入物的绵羊脊柱，该β-TCP分别带有0、0.1、0.5、1.0、2.0或4.0mg包含有二个重组多肽的同型二聚体蛋白即SEQIDNO：260，含有分子内二硫键C44-C48，及分子间二硫键C79-C112及C80-C114；在12周时测量接受骨自体移植的植入物的绵羊脊柱。绵羊是雌性，品系为Ewe。图式显示了每种测试条件和方向的运动范围的平均值和标准偏差。图13A至C所示分别为代表性微电脑断层扫描μCT影像的轴向、冠状及矢状面图像，其是接受带有如图12所述的同型二聚体蛋白的量为0.1mg部位的植入物的绵羊脊柱。其中「V」、「D」、「R」、「L」、「S」及「I」分别表示腹侧、背侧、右侧、左侧、上方及下方。该部位产生了骨骼而充满了椎体融合器内大部分的空间，然而，在两终板接口处出现透明。图14A至C所示分别为代表性微电脑断层扫描μCT影像的轴向、冠状及矢状面图像，其是接受带有如图12所述的同型二聚体蛋白的量为0.5mg部位的植入物的绵羊脊柱。其中「V」、「D」、「R」、「L」、「S」及「I」如图13A至C所述。该部位表现出良好的骨骼质量，但移植物内存在一些透明线。图15A至C所示分别为代表性微电脑断层扫描μCT影像的轴向、冠状及矢状面图像，其是接受带有如图12所述的自体移植物的绵羊脊柱。其中「V」、「D」、「R」、「L」、「S」及「I」如图13A至C所述。该部位在当下时间点骨骼并未完全填满该器。此外，终板内还有一些透明。图16a及16b所示为微粒在14天释放期间的该同型二聚体蛋白释放的相对量图16a及该同型二聚体蛋白释放的累积百分比图16b。图17所示为代表性扫描电子显微镜影像，其是在-20℃、4℃及25℃下储存6个月的聚乳酸-乙醇酸同型二聚体蛋白-磷酸三钙PLGAHp-β-TCP。图18所示为代表性X光影像，其是植入如图17所述的PLGAHp-β-TCP且带有不同剂量的同型二聚体蛋白于0周及4周后的BalbC小鼠胫骨。每张影像中的白色箭头是用以标识该骨缺损。C组：坏死骨对照即没有植入任何支架的骨碎片；PT组：PLGAβ-TCP即无同型二聚体蛋白；POT-02组：PLGA0.2μgHp-β-TCP；POT-08组：PLGA0.8μgHp-β-TCP；POT-1.6组：PLGA1.6μgHp-β-TCP；及POT-3.2组：PLGA3.2μgHp-β-TCP。图19所示为于坏死骨中植入4周后新骨生成面积百分比的代表性图式，其中各组如图18所述。图20A至D所示为本文的实施例制剂的横断面表示图：携带本文的多肽蛋白质的载体如β-TCP颗粒图20A；与携带该本文的多肽蛋白质的载体颗粒混合的凝胶图20B；包含本文的多肽蛋白质的凝胶图20C；及包含本文的多肽蛋白质的凝胶，其是具有均匀分布在该凝胶外层的携带本文的多肽蛋白质的载体颗粒图20D。图21所示为在特定小时的时间区间内所释放的同型二聚体蛋白的累积百分比的图式。具体实施方案本文提供重组多肽、包含该重组多肽的同型二聚体及异型二聚体蛋白、编码该重组多肽的核酸分子及载体，及表达该重组多肽的宿主细胞。本文也提供该重组多肽的组合物及制造、使用该重组多肽的方法。本文引用的所有出版物在此通过引用整体并入，包括但不限于本文引用的所有期刊文章、书籍、手册、专利申请和专利，其程度和范围如同每个单独的出版物被具体地和单独地指出通过引用而并入。[专门用语]除非另有定义，本文中所有技术和科学用语与本发明所属领域中具有通常知识者所理解的含义相同。如在整个本申请中所使用的，以下术语应具有如下意义。除非上下文中另有指定外，本文及申请专利范围所述单数格式的「一」、「一个」、「一种」及「该」包含复数指涉。因此，例如：「一域」是包含一个域或多个域、「该重组多肽」包含一个或多个重组多肽，诸如此类。本文中的用语例如：「一」、「该」、「一或多」、「复数」及「至少为一」可互相代换。除非另有说明，本文所述的「或」表示「和或」之意。相似地，本文所述的「包含」、「包括」、「含有」、「囊括」、「具有」也可互相代换而不受限制。除此之外，本文所述的「和或」、「及或」被用作特指表达两个特定特征或构件的其一或全部。因此，用语「和及或」用于表达语句如「A和或B」是包含「A和B」、「A或B」、「单独A」「单独B」之意。相同的，用语「和或」用于表达语句如「A、B和或C」是包含如后所述的意义：A、B和C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；单独A；单独B；单独C。应当理解，本文用语「包含」无论在描述任何方面的情况下，也提供了以「由…组成」和或「基本上由…组成」所描述的其他类似方面的意义。「氨基酸」是一种具有一个与氢原子连结的中心碳原子α-碳原子、一个羧基该碳原子在本文中称为「羧酸碳原子」、一个氨基该氮原子在本文中称为「氨基氮原子」以及一侧链R基团的结构的分子。当并入肽、多肽或蛋白质时，氨基酸会在脱水反应中失去其氨基酸羧基上的一或多个原子将一个氨基酸与另一个氨基酸连结。因此，当并入蛋白质时，将氨基酸称为「氨基酸残基」。「蛋白质」或「多肽」是指经由肽键连结的二或更多个单独氨基酸的任何聚合物无论是否为天然存在，并且是发生在当与氨基酸或氨基酸残基上的α-碳原子键结的羧基上的羧酸碳原子对于与一个邻近氨基酸上非α-碳原子键结的氨基的氨基氮原子变为共价键。所述的「蛋白质蛋白」是包含「多肽」和「肽」的意义内文用语会互相代换。除此之外，蛋白质包含多个多肽次单元如：DNA聚合酶III、RNA聚合酶II或其他组合物如：RNA分子、也会在端粒酶中发生在本文中也被理解包含进「蛋白质」的意义。相似地，蛋白质和多肽的碎片也在本公开涉及的「蛋白质」范畴。一方面，本公开的多肽包含二或多个亲代肽段的嵌合体。用语「多肽」也涉及和包含该多肽翻译后修饰Post-translationmodification，PTM的产物，包含但不限于二硫键生成、糖基化、胺甲酰化、脂化、乙酰化、磷酸化、酰胺化、已知的保护阻断基团衍生、分解蛋白切割、被非天然氨基酸修饰、或任何其他调控或修饰，例如与标记成分接合。多肽可衍生自天然生物来源或通过基因重组技术产生，其未必是从特定核酸序列翻译。其可经由任何方法包括化学合成的方式生成。「经分离」的多肽或片段、变体或其衍生物是指不在其天然环境中的多肽。不需要特定程度的纯化。例如：经分离多肽可以是简单的从其天生或天然环境移除。为了本公开之用，在宿主细胞中表达的重组产生的多肽及蛋白质被认为是经过分离的，视同天然或重组多肽已经被经由任何适当技术分离、分级、部分或大体上的纯化。本文所述的「域」可被用语「肽段」代换，其是涉及较大的多肽或蛋白质的部分或碎片。域不需具有本身的功能活性，然而在一些例子中，域可具有其自身的生物活性。一个给定蛋白质的特定氨基酸序列即当从氨基末端到羧基末端写入时，该多肽的「一级结构」是由mRNA编码部分的核苷酸序列所确定，其又由遗传信息来指明，通常是基因组DNA包括细胞器DNA，如：粒线体或叶绿体DNA。因此，确定基因的序列有助于预测对应多肽的一级序列，更具体而言是经由该基因或多核苷酸序列的编码预测多肽或蛋白质的作用或活性。本文所述的「N端」是指多肽中相对于该多肽上氨基末端的氨基酸、域或肽段的方位或位置。例如：「A域位于B域和C域的N端」意指A域是位于相较于B域和C域更靠近氨基末端的位置，如此，当B域和C域的位置未特别指定时，该多肽中的域其自氨基末端的排列顺序则可理解为A-B-C或A-C-B。此外，包含零的任何数量氨基酸可存在于一域之间，该域是另一域的N端。相似地，包含零的任何数量氨基酸可存在于该多肽的N端及一域之间，该域是该多肽中其它域的N端。本文所述的「C端」是指多肽中相对于多肽上羧基末端的氨基酸、域或肽段的方位或位置。例如：「A域位于B域和C域的C端」意指A域是位于相较于B域和C域更靠近羧基末端的位置，如此，当B域和C域的位置未特别指定时，该多肽中的域其自氨基末端的排列顺序则可理解为B-C-A或C-B-A。此外，包含零的任何数量氨基酸可存在于一域之间，该域是另一域的C端。相似地，包含零的任何数量氨基酸可存在于该多肽的C端及一域之间，该域是该多肽中其它域的C端。当提及二硫键时，本文所述的「分子内」及「分子间」，其是分别涉及发生在多肽链之内及多肽链之间的二硫键。当涉及二个或更多个域以广义地指形成本文所公开的重组多肽中任何化学或物理偶合coupling该二个或更多个域时，用语「融合」、「操作性连结operablylinked」及「操作性结合operablyassociated」在本文中可互相代换。在一个实施方案中，如本文所公开的重组多肽是包含来自二个或更多个相异多肽的多个域的嵌合体多肽。包含本文所公开的二个或更多个域的重组多肽可以由包含编码每个域的多核苷酸序列的单个编码序列所编码。除非另有说明，编码每个域的多核苷酸序列为「inframe在框架内」，如此包含该多核苷酸序列的单一mRNA的翻译会使单一多肽包含每个域。一般而言，本文所公开的重组多肽中的域会直接彼此融合或被肽连结子peptidelinker所分离。编码肽链接子的各种多核苷酸序列是本领域已知的。本文所述的「同型二聚体蛋白质」、「异型二聚体蛋白质」、及「同型二聚体或异型二聚体蛋白质」是指具有二个相同或相异重组多肽的蛋白。因此，本文所述的该「同型二聚体蛋白质」、「异型二聚体蛋白质」、及「同型二聚体或异型二聚体蛋白质」亦指「同型二聚体重组蛋白质」、「异型二聚体重组蛋白质」、及「同型二聚体或异型二聚体重组蛋白质」。更进一步地，本文所述的「重组蛋白质」是指「同型二聚体蛋白质」、「异型二聚体蛋白质」、或「同型二聚体或异型二聚体蛋白质」。本文所述的「多核苷酸」或「核酸」是指聚合形式的核苷酸。在一些情况下，多核苷酸包含其来源的有机体天然存在的基因组中的一序列，该序列若非是非直接紧邻该编码序列就是直接紧邻在5’终端或3’终端上该编码序列。因此，该用语包含例如：被并入载体中的重组DNA、被并入自主复制的质粒或病毒中的重组DNA、或被并入原核或真核的基因组DNA中的重组DNA，或者是独立于其他序列如同分离分子如cDNA般存在的重组DNA。本文所述的核苷酸可以是核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸或该核苷酸之一的修饰型。本文所述的多核苷酸尤其是指单链及双链DNA、单链及双链区域混合体的DNA、单链及双链RNA以及单链及双链区域混合体的RNA、包含DNA及RNA的杂交分子，其可以是单链，或更典型地是双链或单链及双链区域混合体。用语多核苷酸包含基因组DNA或RNA取决于生物体，即病毒的RNA基因组及被该基因组DNA编码的mRNA，以及cDNA。于某些实施方案中，多核苷酸包含传统磷酸二酯键或非传统键如：酰胺键，在肽核酸peptidenucleicacids，PNA中发现。「经分离」核酸或多核苷酸是指从其天然环境中移出的核酸分子如：DNA或RNA。举例而言，为了本公开的目的，「经分离」认为是核酸分子包含多核苷酸，该多核苷酸编码载体中含有的重组多肽。进一步举例经分离的多核苷酸包括维持在异源宿主细胞中的重组多核苷酸或在溶液中从其他多核苷酸纯化一部分或大部分的重组多核苷酸。经分离的RNA分子包含本公开的多核苷酸的体内invivo或体外invitroRNA转录物。根据本公开的经分离的多核苷酸或核酸进一步包括合成产生的多核苷酸和核酸如：核酸分子。本文所述的「编码区」或「编码序列」是多核苷酸的一部分，其由可翻译成氨基酸的密码子组成。尽管「终止密码子stopcodon」TAG、TGA或TAA一般不会被翻译成氨基酸，其被认为可以是编码区的一部分，但任何毗邻序列如：启动子、核糖体结合位点、转录终止子、内含子等等并非编码区的一部分。编码区的边界通常由位于5’端的起始密码子即编码所得多肽的氨基末端，及位于3’端的翻译终止密码子即编码所得多肽的羧基末端所决定，但本发明不限于此。本文所述的「表达控制区」是指转录控制单元，其可操作地与编码区结合，以引导或控制由编码区编码的产物表达，包括如：启动子、增强子、操纵子、阻遏子、核糖体结合位点、翻译前导序列、内含子、多腺苷酸化识别序列、RNA加工位点、效应子结合位点、茎环结构及转录终止信号。举例而言，若启动子功能的诱导导致包含编码产物的编码区的mRNA转录，且如果启动子和编码区之间的连接性质不会干扰启动子引导由编码区编码的产物其表达的能力或是干扰DNA模板被转录的能力，则编码区和启动子是「可操作地结合」。表达控制区包含位于编码区上游5’非编码序列内部或下游3’非编码序列的核苷酸序列，其会影响相关联编码区的转录、RNA加工、稳定性、或翻译。如果编码区用于真核细胞中的表达，则多腺苷酸化信号及转录终止序列通常位于编码序列3’端。「核苷酸片段」、「寡核苷酸片段」或「多核苷酸片段」是指一较之大多核苷酸分子的一部分。多核苷酸片段不需对应至蛋白质经编码的功能域，然而在某些情况下，该片段将编码蛋白质的功能域。多核苷酸片段的长度可为大约6个或更多的核苷酸例如：6-20、20-50、50-100、100-200、200-300、300-400个或更多核苷酸的长度。本文所述的「载体」是指用以将核苷酸分子克隆和或转移到宿主细胞中的任何媒介物。用语「载体」包括病毒及非病毒载体如：质粒、噬菌体、黏粒、病毒，用以体外、离体或体内将该核酸导入至一细胞中。本文所述的「宿主细胞」及「细胞」用语可相互代换，其是指携带或能够携带核酸分子如：重组核酸分子的任何类型的细胞或细胞群体，如：原代细胞、培养的细胞、或来自细胞系的细胞。宿主细胞可以是原核细胞或是真核细胞，例如：真菌细胞如酵母菌细胞、各种动物细胞如昆虫细胞或哺乳动物细胞。本文所述的「培养Culture、toculture、culturing」是指允许细胞生长、分裂或维持细胞处于存活状态的体外条件下孵育细胞。本文所述的「经培养细胞」是指经体外繁殖的细胞。本文所述的「骨诱导性骨诱导性Osteoinductive」是指可诱导或称诱导骨和或软骨的形成或生长，包括例如：诱导与骨和或软骨生成或生长相关的标记如：诱导碱性磷酸酶活性。本文所述的「酵母双杂交试验」或「酵母双杂交系统」用语可被相互代换，其是指用以检测蛋白质对之间的交互作用的试验或系统。在典型的双杂交筛选试验系统中，转录因子被分裂为两个独立的片段，分别为结合域bindingdomain，BD和活化域activationdomain，AD，片段各别提供于独立的质粒上，且片段各别与感兴趣的蛋白质融合。该酵母双杂交试验系统包含1一个「诱饵」载体，其包括一个诱饵蛋白质及系统中所用该转录因子的结合域；2一个「猎物」载体，其包括一个猎物蛋白质或一个裂物蛋白质文库，被筛选用以与该诱饵蛋白质进行交互作用及该转录因子的活化域；及3一个合适的报导酵母菌株，其含有结合序列用以于系统中所使用的该转录因子的该结合域。当诱饵-猎物发生交互作用时，该转录因子的该活化域驱动一个或更多个报导蛋白质的表达。将该诱饵载体和该猎物载体导入该报导酵母菌株，其中经表达的诱饵蛋白质和经表达的猎物蛋白质可能相互作用。或者，可将各自含有诱饵载体或猎物载体的独立单倍体酵母菌株配对，而所得到的二倍体酵母菌株表达两种蛋白质。相互作用的诱饵及猎物蛋白质对会导致该转录因子的重组和活化，然后与该报导酵母菌株中所提供与其兼容的活化域结合，依次触发该报导基因的表达，其随后可被侦测。[重组多肽及组合物]本文的公开涉及一种重组多肽，其包含任二个或多个选自由SEQIDNO：33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77及355所组成的群组的域，包含但不限于如表3所示二个域的任何组合。在一个实施方案中，该重组多肽包含任三个域，包含但不限于如表3所示三个域的任何组合。如本文所述的重组多肽的任一域可位于相对该重组多肽的氨基末端或羧基末端的任何位置。举例而言，如本文所述的重组多肽的任一域可位于该重组多肽中任一个或多个其他域的N端。相似地，如本文所述的重组多肽的任一域可位于该重组多肽中任一个或多个其他域的C端。本公开一种重组多肽，其包含任二个或多个选自由SEQIDNO：33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77及355所组成的群组的域，其具有相较于在该重组多肽中任何个别域更高地活化素受体IIB蛋白质即ActRIIBecd细胞外域的亲和力。ActRIIB的核酸序列及多肽序列以及天然存在的变异是已知的。举例而言，ActRIIBecd可为如本文所述的SEQIDNO：9，其对应如本文所述的SEQIDNO：8的27-117残基。亲和力可通过如：放射性免疫测定法RIA、表面等离子共振如：BIAcoreTM或本领域已知的任何其他结合分析来测量。在一个些实施方案中，此般重组多肽包含二个域的组合，选自如后的域的组合：SEQIDNO：39及SEQIDNO：49、SEQIDNO：49及SEQIDNO：61、SEQIDNO：61及SEQIDNO：39、SEQIDNO：35及SEQIDNO：47、SEQIDNO：57及SEQIDNO：35、SEQIDNO：57及SEQIDNO：47，其中该二个域中的任一个是位于另一域的N端或C端。在一些实施方案中，此般二个域的组合产生一个包含选自由如后所述序列的群组所组成的重组多肽：SEQIDNO：188、194、200、206、212、218、224、230、236、242、248及254。在一些实施方案中，此般重组多肽包含三个域的组合，该域的组合选自如下：SEQIDNO：39、49及61；SEQIDNO：35、47及57；SEQIDNO：39、47及61；SEQIDNO：35、49及57；SEQIDNO：39、57及47；SEQIDNO：35、61及49，其中任一域是位于另一或另二个域的N端或C端。在一些实施方案中，此般三个域的组合产生一个包含选自如后所述序列的群组所组成的重组多肽：SEQIDNO：260、268、276、284、292、300、308、316、324、332、340及348。本公开一种重组多肽，其包含SEQIDNO：39的第一域、SEQIDNO：49的第二域及SEQIDNO：61的第三域，其中该第一域相较于该第二域位于接近该重组多肽的C端、该第三域相较于该第二域位于接近该重组多肽的N端、或其组合。于某些实施方案中，该重组多肽包含第一域选自由SEQIDNO：35及SEQIDNO：39所组成的群组、第二域选自由SEQIDNO：47及SEQIDNO：49所组成的群组、第三域选自由SEQIDNO：57及SEQIDNO：61所组成的群组，其中该第一域相较于该第二域位于接近该重组多肽的C端、该第三域相较于该第二域位于接近该重组多肽的N端、或当该第一域、第二域及第三域分别为SEQIDNO：39、49及61时其的组合。于某些实施方案中，本文所公开的重组多肽包含一个翻译后修饰post-translationmodification，PTM，包含但不限于二硫键形成、糖基化、胺甲酰化、脂化、乙酰化、磷酸化、酰胺化、通过已知的保护阻断基团衍生化、蛋白裂解切割、通过非天然存在氨基酸修饰，或任何其他操作或修饰，例如：与标记成分接合。于某些实施方案中，重组多肽可包含一个或更多个半胱氨酸，其在生理条件下或任何其他标准条件例如：纯化条件或储存条件下能够参与一个或更多个二硫键的生成。于某些实施方案中，二硫键是在重组多肽中的二个半胱氨酸残基间所形成的分子内二硫键。于某些实施方案中，二硫键是在二聚体中二个重组多肽之间形成的分子间二硫键。在某些实施方案中，分子间二硫键是在如本文所述的二个相同重组多肽之间所形成，其中该二个相同的重组多肽形成一同型二聚体。于某些实施方案中，同型二聚体包括至少一个或多于三个分子间二硫键。于某些实施方案中，分子间二硫键是在如本文所述的二个相异重组多肽之间所形成，其中该二个相异重组多肽形成一异型二聚体。于某些实施方案中，异型二聚体包括至少一个或多于三个分子间二硫键。本公开一种重组多肽，其包含第一域，其选自由SEQIDNO：35及SEQIDNO：39所组成的群组；第二域，其选自由SEQIDNO：47及SEQIDNO：49所组成的群组；以及一第三域，其选自由SEQIDNO：57及SEQIDNO：61所组成的群组；其中该重组多肽包含一个分子内二硫键。于某些实施方案中，该第一域、该第二域、该第三域或其组合包含一个分子内二硫键。于某些实施方案中，一个或更多个分子内二硫键位于单一域之内、一域和另一域之间、具有多于二个半胱氨酸的一个域和一个或多个另一域之间、或其组合。于某些实施方案中，该第一域包含一二硫键。于某些实施方案中，该第二域包含一二硫键。于某些实施方案中，该第三域包含一二硫键。于某些实施方案中，每一个域包含一二硫键。当涉及分子内二硫键时，本文所述的「域包含一二硫键」是指当一个域中存在多于一个半胱氨酸时单一域中二个半胱氨酸之间的二硫键，或是指在两个的其中一域中的半胱氨酸和另一域中的半胱氨酸之间的二硫键。于某些实施方案中，如本文所述的重组多肽的该第二域包含在该第二域的第23个氨基酸和该第二域的第27个氨基酸之间的一个分子内二硫键。于某些实施方案中，于该第一域和该第三域之间、该第三域内、或两者皆是，该重组多肽进一步包含一个或多个附加的分子内二硫键。于某些实施方案中，于该第三域的第9个氨基酸和该第三域的第43氨基酸之间、在该第三域的第8氨基酸和该第三域的第41氨基酸之间、在该第三域的第8氨基酸和该第三域的第43氨基酸之间、或在该第三域的第9氨基酸和该第三域的第41个氨基酸之间，该重组多肽进一步包含一个分子内二硫键。于某些实施方案中，该重组多肽于该第三域的第9氨基酸和该第三域的第43的氨基酸之间进一步包含一个二硫键，以及在该第三域的第8氨基酸和该第三域的第41氨基酸之间包含一个二硫键。于某些实施方案中，该重组多肽在该第三域的第8氨基酸和该第三域的第43的氨基酸之间进一步包含一个二硫键，以及在该第三域的第9氨基酸和该第三域的第41氨基酸之间包含一个二硫键。于某些实施方案中，如本文所述的重组多肽的该第三域包含第氨基酸序列PKACCVPTESEQIDNO：356和第二氨基酸序列GCGCRSEQIDNO：357，其中该第三域在该第氨基酸序列和该第二氨基酸序列之间包含二个分子内二硫键或二个分子间二硫键。于某些实施方案中，该重组多肽在该第氨基酸序列的第4个氨基酸和该第二氨基酸序列的第2个氨基酸之间包含一个第一分子内二硫键或第一分子间二硫键，以及在该第氨基酸序列的第5个氨基酸和该第二氨基酸序列的第4个氨基酸之间包含一个第二分子内二硫键或第二分子间二硫键。于某些实施方案中，该重组多肽在该第氨基酸序列的第5个氨基酸和该第二氨基酸序列的第2个氨基酸之间包含一个第一分子内二硫键或第一分子间二硫键，以及在该第氨基酸序列的第4个氨基酸和该第二氨基酸序列的第4个氨基酸之间包含一个第二分子内二硫键或第二分子间二硫键。于某些实施方案中，该重组多肽在该第二域的第23个氨基酸和该第二域的第27个氨基酸之间进一步包含一个分子内二硫键。本公开涉及一种重组多肽，其包含氨基酸序列，该氨基酸序列选自由SEQIDNO：260、SEQIDNO：268、SEQIDNO：276、SEQIDNO：284、SEQIDNO：292、SEQIDNO：300、SEQIDNO：308、SEQIDNO：316、SEQIDNO：324、SEQIDNO：332、SEQIDNO：340、及SEQIDNO：348所组成的群组，其中该重组多肽包含一个分子内二硫键。于某些实施方案中，该分子内二硫键包含一个或多个二硫键，其包含从重组多肽氨基末端编号的半胱氨酸15、半胱氨酸44、半胱氨酸48、半胱氨酸79、半胱氨酸80、半胱氨酸112、半胱氨酸114、及其组合，该重组多肽选自由SEQIDNO：260、SEQIDNO：292、SEQIDNO：324、及SEQIDNO：332所组成的群组。于某些实施方案中，该分子内二硫键包含从重组多肽氨基末端编号的半胱氨酸44、半胱氨酸48、或两者皆含，该重组多肽选自由SEQIDNO：260、SEQIDNO：292、SEQIDNO：324、及SEQIDNO：332所组成的群组。于某些实施方案中，选自由SEQIDNO：260、SEQIDNO：292、SEQIDNO：324、及SEQIDNO：332所组成的群组的重组多肽，其从该重组多肽的氨基末端编号的半胱氨酸44和半胱氨酸48之间包含一分子内二硫键。于某些实施方案中，于半胱氨酸79和半胱氨酸112之间、半胱氨酸80和半胱氨酸114之间、半胱氨酸80和半胱氨酸112之间、或半胱氨酸79和半胱氨酸114之间，该重组多肽进一步包含一分子内二硫键或一分子间即，于二聚体中二硫键。于某些实施方案中，该重组多肽于半胱氨酸79和半胱氨酸112之间进一步包含一分子内二硫键或一分子间二硫键，以及于半胱氨酸80和半胱氨酸114之间进一步包含一分子内二硫键或一分子间二硫键。于某些实施方案中，该重组多肽于半胱氨酸80和半胱氨酸112之间进一步包含一分子内二硫键或一分子间二硫键，以及于半胱氨酸79和半胱氨酸114之间进一步包含一分子内二硫键或一分子间二硫键。本公开涉及一种同型二聚体蛋白，其包含如本文所述的二个相同的重组多肽。本公开涉及一种异型二聚体蛋白，其包含如本文所述的二个相异的重组多肽。于某些实施方案中，于该二个重组多肽的第一域之间、该二个重组多肽的第二域之间、该二个重组多肽的第三域之间、该二个重组多肽的该第一域和该第二域之间、该二个重组多肽的该第一域和该第三域之间、该二个重组多肽的该第二域和该第三域之间、或其组合，如本文所述之同型二聚体蛋白或异型二聚体蛋白包含一个或多个分子间二硫键。于某些实施方案中，于该二个的其一重组多肽的该第一域的第15个氨基酸和该另一重组多肽的该第一域的第15个氨基酸之间，如本文所述的同型二聚体蛋白或异型二聚体蛋白包含一分子间二硫键。于某些实施方案中，于该二个的其一重组多肽的该第三域的第9个氨基酸和该另一重组多肽的该第三域的第43个氨基酸之间、在该二个的其一重组多肽的该第三域的第8个氨基酸和该另一重组多肽的该第三域的第41个氨基酸之间、在该二个的其一重组多肽的该第三域的第8个氨基酸和该另一重组多肽的该第三域的第43个氨基酸之间、或在该二个的其一重组多肽的该第三域的第9个氨基酸和该另一重组多肽的该第三域的第41个氨基酸之间，该同型二聚体蛋白或该异型二聚体蛋白进一步包含一分子间二硫键。于某些实施方案中，该同型二聚体蛋白或该异型二聚体蛋白进一步于该二个的其一重组多肽的该第三域的第9个氨基酸和该另一重组多肽的该第三域的第43个氨基酸之间包含一二硫键，以及于该二个的其一重组多肽的该第三域的第8个氨基酸和该另一重组多肽的该第三域的第41个氨基酸之间包含一二硫键。于某些实施方案中，该同型二聚体蛋白或该异型二聚体蛋白进一步于该二个的其一重组多肽的该第三域的第8个氨基酸和该另一重组多肽的该第三域的第43个氨基酸之间包含一二硫键，以及于该二个的其一重组多肽的该第三域的第9个氨基酸和该另一重组多肽的该第三域的第41个氨基酸之间包含一二硫键。于某些实施方案中，于该二个的其一重组多肽的该第三域的第9个氨基酸和该另一重组多肽的该第三域的第43个氨基酸之间、于该二个的其一重组多肽的该第三域的第8个氨基酸和该另一重组多肽的该第三域的第41个氨基酸之间、在该二个的其一重组多肽的该第三域的第8个氨基酸和该另一重组多肽的该第三域的第43个氨基酸之间、或在该二个的其一重组多肽的该第三域的第9个氨基酸和该另一重组多肽的该第三域的第41个氨基酸之间，该同型二聚体蛋白或该异型二聚体蛋白包含一分子间二硫键。于某些实施方案中，该同型二聚体蛋白或该异型二聚体蛋白于该二个的其一重组多肽的该第三域的第9个氨基酸和该另一重组多肽的该第三域的第43个氨基酸之间包含一二硫键，以及在该二个的其一重组多肽的该第三域的第8个氨基酸和该另一重组多肽的该第三域的第41个氨基酸之间包含一二硫键。于某些实施方案中，该同型二聚体蛋白或该异型二聚体蛋白于该二个的其一重组多肽的该第三域的第8个氨基酸和该另一重组多肽的该第三域的第43个氨基酸之间包含一二硫键，以及在该二个的其一重组多肽的该第三域的第9个氨基酸和该另一重组多肽的该第三域的第41个氨基酸之间包含一二硫键。于某些实施方案中，如本文所述的同型二聚体蛋白或异型二聚体蛋白的每一该重组多肽的该第三域包含第氨基酸序列PKACCVPTESEQIDNO：356及第二氨基酸序列GCGCRSEQIDNO：357，其中该同型二聚体蛋白或该异型二聚体蛋白于该二个的其一重组多肽的该第三域中的该第氨基酸序列和该另一重组多肽的该第三域中的该第二氨基酸序列之间包含二个分子间二硫键。于某些实施方案中，该同型二聚体蛋白或该异型二聚体蛋白于该二个的其一重组多肽的该第氨基酸序列的第4个氨基酸和该另一重组多肽的该第二氨基酸序列的第2个氨基酸之间包含第一分子间二硫键，以及于该二个的其一重组多肽的该第氨基酸序列的第5个氨基酸和该另一重组多肽的该第二氨基酸序列的第4个氨基酸之间包含第二分子间二硫键。于某些实施方案中，该同型二聚体蛋白或该异型二聚体蛋白于该二个的其一重组多肽的该第氨基酸序列的第5个氨基酸和该另一重组多肽的该第二氨基酸序列的第2个氨基酸之间包含第一分子间二硫键，以及于该二个的其一重组多肽的该第氨基酸序列的第4个氨基酸和该另一重组多肽的该第二氨基酸序列的第4个氨基酸之间包含第二分子间二硫键。于某些实施方案中，如本文所述的同型二聚体蛋白或异型二聚体蛋白的该单一或全部二个重组多肽包含如本文所述的任一个或多个该分子内二硫键。于某些实施方案中，如本文所述的同型二聚体蛋白或异型二聚体蛋白的该单一或全部二个重组多肽的该第二域包含一分子内二硫键。于某些实施方案中，如本文所述的同型二聚体蛋白或异型二聚体蛋白的该单一或全部二个重组多肽于该第二域的第23个氨基酸和该第二域的第27个氨基酸包含一分子内二硫键。于某些实施方案中，如本文所述的同型二聚体蛋白或异型二聚体蛋白的该单一或全部二个重组多肽包含一分子内二硫键，位于从该重组多肽的氨基末端编号的SEQIDNO：260、SEQIDNO：292、SEQIDNO：324、或SEQIDNO：332的任一个的半胱氨酸44和半胱氨酸48之间、SEQIDNO：284、SEQIDNO：308、SEQIDNO：340、或SEQIDNO：348的任一个的半胱氨酸88和半胱氨酸92之间、SEQIDNO：268、或SEQIDNO：300的任一个的半胱氨酸23和半胱氨酸27之间、或SEQIDNO：276、或SEQIDNO：316的任一个的半胱氨酸67和半胱氨酸71之间。于某些实施方案中，如本文所述的同型二聚体蛋白包含二个重组多肽，其中每一个多肽包含相同序列，其中该序列选自由SEQIDNO：260、SEQIDNO：268、SEQIDNO：276、SEQIDNO：284、SEQIDNO：292、SEQIDNO：300、SEQIDNO：308、SEQIDNO：316、SEQIDNO：324、SEQIDNO：332、SEQIDNO：340、及SEQIDNO：348所组成的群组。在一个些实施方案中，该重组多肽包含如本文所述的相同分子内二硫键。在一些实施方案中，该重组多肽包含如本文所述的相异分子内二硫键。于某些实施方案中，如本文所述的异型二聚体蛋白包含二个相异重组多肽，其中每一个多肽包含相异序列，该序列选自由SEQIDNO：260、SEQIDNO：268、SEQIDNO：276、SEQIDNO：284、SEQIDNO：292、SEQIDNO：300、SEQIDNO：308、SEQIDNO：316、SEQIDNO：324、SEQIDNO：332、SEQIDNO：340、及SEQIDNO：348所组成的群组。于某些实施方案中，该异型二聚体蛋白中的该二个的其一重组多肽包含序列SEQIDNO：260，而该另一重组多肽包含一序列其选自由SEQIDNO：268、SEQIDNO：276、SEQIDNO：284、SEQIDNO：292、SEQIDNO：300、SEQIDNO：308、SEQIDNO：316、SEQIDNO：324、SEQIDNO：332、SEQIDNO：340、及SEQIDNO：348所组成的群组。在一些实施方案中，该重组多肽包含如本文所述的相同分子内二硫键。在一些实施方案中，该重组多肽包含如本文所述的相异分子内二硫键。于某些实施方案中，如本文所述的重组多肽、同型二聚体蛋白或异型二聚体蛋白在如表4或5中所列的半胱氨酸对之间包含该一个或多个该二硫键。于某些实施方案中，如本文所述的重组多肽、同型二聚体蛋白或异型二聚体蛋白包含骨诱导活性。骨诱导活性可以常规实务上用于测量此类活性的任何条件状况下量测即「骨诱导条件」。例如：C2C12细胞是来自营养不良小鼠肌肉的鼠类的肌纤维母细胞品系。将C2C12细胞暴露于具有骨诱导活性的多肽可将C2C12细胞从肌肉转移到骨的分化，例如：通过诱导骨相关蛋白如碱性磷酸酶的表达为特征的成骨细胞形成。碱性磷酸酶是一种广泛接受的骨标记，且检测碱性磷酸酶活性的测定被接受可用以表达骨诱导活性。参见如：Peel等人2003年公开于J.CraniofacialSurg.14：284-291、Hu等人2004年公开于GrowthFactors22：29033及Kim等人2004年公开于J.Biol.Chem.279：50773-50780的研究。于某些实施方案中，如本文所述的重组多肽、同型二聚体蛋白或异型二聚体蛋白具有诱导碱性磷酸酶活性的能力。于某些实施方案中，骨诱导活性可利用医学影像技术或骨样本的组织学检验来进行检测，或是任何其他用以检测骨生成或成长的常规检验方法。于某些实施方案中，上述检测包括放射摄影影像，例如：X光影像。于某些实施方案中，上述检测包括计算机断层摄影CT扫描。在一些实施方案中，上述检测包括分子影像或核影像即，正电子发射断层摄影术PET。于某些实施方案中，上述检测包括组织学检验。于某些实施方案中，上述检测包括苏木素-伊红HE染色法。于某些实施方案中，如本文所述的重组多肽、同型二聚体蛋白或异型二聚体蛋白可包含但不限于片段、变体或其衍生物分子。当涉及多肽时，用语「片段」、「变体」、「衍生物」和「类似物」包含保留参考多肽的至少一些性质或生物活性的任何多肽。多肽片段可包含分解蛋白片段、缺失片段、及当植入动物中时更容易到达作用位点的片段。多肽片段可包含变体区域，包括如上所述的片段，以及由于氨基酸取代、缺失或插入而具有经改变氨基酸序列的多肽。可以使用本领域已知的诱变技术产生非天然存在的变体。本公开的多肽片段可包含保守或非保守的氨基酸取代、缺失或添加。变体多肽在本文中也可称为「多肽类似物」。本公开的多肽片段也可包括衍生分子。本文所用多肽或多肽片段的「衍生物」是指一主体多肽，其具有一个或多个由官能侧基团的反应以化学性衍生的残基。「衍生物」也包括含有20个标准氨基酸的一种或多种天然存在氨基酸衍生物的多肽。例如：4-羟脯氨酸可被取代以作为脯氨酸；5-羟赖氨酸可被取代以作为赖氨酸；3-甲基组氨酸可被取代以作为组氨酸；高丝氨酸可被取代以作为丝氨酸；及鸟氨酸可被取代以作为赖氨酸。于某些实施方案中，如本文所述的重组多肽、同型二聚体蛋白或异型二聚体蛋白其包含一标记。于某些实施方案中，该标记是一种可催化基质化合物或组合物的化学改变的酶标记、放射性标记、荧光团、发色团、成像剂、或包括金属离子的金属。于某些实施方案中，本文所述的重组多肽包括一个或多个保守的氨基酸取代。「保守的氨基酸取代」是一种具有相似侧链的相异氨基酸残基的氨基酸取代。本领域已定义具有相似氨基酸侧链的氨基酸残基家族，包括碱性侧链如：赖氨酸、精氨酸、组氨酸、酸性侧链如：天冬氨酸、谷氨酸、不带电极性侧链如：甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、非极性侧链如：丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、β-支链侧链如：苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、及芳香族侧链如：酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸。因此，若多肽中的氨基酸被来自同一侧链家族的另一氨基酸替换，则认为该取代是保守的。在另一个实施方案中，氨基酸链可被以差异在于顺序和或侧链家族成员的组成的结构相似的链进行保守的替换。于某些实施方案中，本公开的重组多肽通过如本文所述的核酸分子或载体所编码，或是通过如本文所述的宿主细胞所表达。[核酸分子、载体及宿主细胞]本公开涉及一种经分离的核酸分子，其包含一编码如本文所述的任一重组多肽的多核苷酸序列。于某些实施方案中，该经分离的核酸分子包含任二个或多个编码如本文所述的域的多核苷酸序列。于某些实施方案中，该经分离的核酸分子包含任二个或多个多核苷酸序列，该多核苷酸序列选自由SEQIDNO：32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、及78所组成的群组，其编码如本文所述的域分别对应SEQIDNO：33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、及355。于某些实施方案中，该经分离核酸分子包含二个或三个多核苷酸序列的任何组合，多核苷酸序列编码本文表3中所示的二个或三个域的对应组合。于某些实施方案中，该经分离的核苷酸分子包含一多核苷酸序列，该多核苷酸序列选自由SEQIDNO：115、157、187、193、199、205、211、217、223、229、235、241、247、253、259、267、275、283、291、299、307、315、323、331、339、及347所组成的群组，其编码如本文所述的重组多肽分别对应SEQIDNO：116、158、188、194、200、206、212、218、224、230、236、242、248、254、260、268、276、284、292、300、308、316、324、332、340、及348。于某些实施方案中，多核苷酸序列经密码子优化codon-optimized。本公开涉及一种重组核酸分子，其包含表达控制区可操作的连结至如本文所述的经分离的核酸分子。于某些实施方案中，该表达控制区是启动子、增强子、操纵子、阻遏子、核糖体结合位点、翻译前导序列、内含子、多腺苷酸化识别序列、RNA加工位点、效应子结合位点、茎环结构、转录终止信号、或其组合。于某些实施方案中，该表达控制区是一个启动子。表达控制区可以是转录控制区和或翻译控制区。本发明所属技术领域已知各种转录控制区。转录控制区包括但不限于在脊椎动物细胞中起作用的转录控制区，例如但不限于：来自巨细胞病毒的启动子及增强子片段立即早期启动子，与内含子-Aintron-A接合、猴病毒40早期启动子、及逆转录病毒如劳斯肉瘤病毒。其他转录控制区包括那些衍生自脊椎动物基因如：肌动蛋白、热休克蛋白、牛生长激素及兔β-球蛋白，以及在真核细胞中能控制基因表达的其他序列。另外，适合的转录控制区包括组织特异性启动子和增强子，以及淋巴介质诱导型lymphokine-inducible启动子如：干扰素或介白素可诱导的启动子。类似地，本发明所属技术领域已知各种翻译控制控制单元。翻译控制单元包括但不限于：核糖体结合位点、翻译起始与终止密码子，以及衍生自微小核糖核酸病毒的单元特别是内部核糖体进入位点internalribosomeentrysite，IRES，亦称为CITE序列。于某些实施方案中，该重组核酸分子是一种重组载体。载体可以是将核酸克隆和或转移至宿主细胞内的任何媒介。本领域已知和已使用大量载体，包括例如：质粒、噬菌体、黏粒、染色体、病毒、经修饰的真核病毒、经修饰的细菌病毒。将多核苷酸插入至合适的载体可以通过将适当的多核苷酸片段连接至具有互补的粘末端的所选载体中来完成。可以将载体设计成编码选择性标记或报告基因，该选择性标记或报告基因提供用来选择或辨识已并入该载体的细胞。选择性标记或报告基因的表达允许宿主细胞辨识和或选择，该宿主细胞是并入且表达该载体上所含的其他编码区。本领域已知及已使用的选择性标记基因包括例如：对于氨苄青霉素、链霉素、庆大霉素、卡那霉素、潮霉素、新霉素、嘌霉素、双丙胺磷除草剂bialaphosherbicide、磺酰胺、及其类似物提供抗性的基因，以及使用作为表型标记的基因，即花青素调节基因、异戊烯基转移酶基因、及其类似物。本领域已知及已使用的报告基因包括例如：荧光素酶Luc、绿色荧光蛋白GFP、氯霉素乙酰基移转酶CAT、β-半乳糖苷酶LacZ、β-葡萄糖醛酸酶Gus、及其类似物。选择性标记也可当作报告基因。用语「质粒」是指通常带有基因的染色体外单元，该基因并非细胞中心代谢的一部分，且通常是环状双链DNA分子形式。此般单元可以是衍生自任何来源的自主复制序列ARS、基因组整合序列、噬菌体或核苷酸序列、线性、环状或超螺旋的单链或双链DNA或RNA，其中许多核苷酸序列已被连接或重组成一独特构造，该独特构造能够将所选基因产物的启动子片段和DNA序列连同适当3’端未翻译序列一起导入细胞中。可以使用的真核病毒载体包括但不限于：腺病毒载体、逆转录病毒载体、腺相关病毒载体及痘病毒，如牛痘病毒载体、杆状病毒载体或疱疹病毒载体。非病毒载体包括质粒、脂质体、带电荷脂质细胞转染剂、DNA-蛋白质复合物及生物聚合物。哺乳动物表达载体可包含非转录单元如：复制起源、连结至待表达基因的合适启动子和增强子、及其他5’端或3’端毗邻非转录序列及5’端或3’端非翻译序列，如必需的核糖体结合位点、多腺苷酸化位点、剪接供给者与接受者位点及转录终止序列。该重组载体可以是一种「重组表达载体」，其是指任何核酸构造，该核酸构造含有用以转录和翻译已插入的编码序列的必需单元，或是在RNA病毒载体的情况下，当导入至适当宿主细胞时用以复制和翻译的必需单元。本公开涉及一种制备重组载体的方法，其包含将如本文所述的经分离的核酸分子插入至一个载体内。本公开涉及一种经分离的宿主细胞，其包含如本文所述的经分离的核酸分子或重组核酸分子。于某些实施方案中，该经分离的宿主细胞包含如本文所述的重组载体。核酸分子可以通过本领域已知的方法导入至宿主细胞中，例如：转染、电穿孔、显微注射、转导、细胞融合、DEAE葡聚糖、磷酸钙沉淀、脂转染溶酶体融合、基因枪的使用、或DNA载体转运蛋白。本公开涉及一种制备重组宿主细胞的方法，其包含将如本文所述的经分离的核酸分子或重组核酸分子导入至一个宿主细胞内。于某些实施方案中，该方法包含将如本文所述的重组载体导入至一个宿主细胞内。如本文所述的宿主细胞可表达任何如本文所述的经分离的核酸分子或重组核酸分子。关于在宿主细胞中核酸分子的表达所使用的术语「表达表现」是指通过基因引起生物化学的过程，例如：RNA或多肽。该过程包括细胞内所具有该基因的功能出现的任何具体呈现，包括但不限于：瞬态表达或稳定表达。其包括但不限于将该基因转录成信使RNAmRNA以及将该mRNA翻译成多肽。宿主细胞包括但不限于原核生物或真核生物。适当宿主细胞的代表性实例包括：细菌细胞、真菌细胞如酵母菌、昆虫细胞及经分离的动物细胞。细菌细胞可包括但不限于革兰氏阴性或革兰氏阳性细菌，例如：大肠杆菌Escherichiacoli。或者，也可使用乳酸杆菌Lactobacillus属物种或芽孢杆菌Bacillus属物种作为宿主细胞。真核细胞可以包括但不限于已建立的哺乳动物来源细胞品系。合适的哺乳动物细胞品系包括例如：COS-7、L、C127、3T3、中国仓鼠卵巢CHO、HeLa及BHK细胞品系。该宿主细胞可以在适合用以活化启动子、选择转化体或扩增如本文所述的核酸分子的经适当修饰的常规营养培养基中进行培养。该培养的条件如温度、pH等等，可以是当使用选择用以表达的宿主细胞时已知使用或经常规修饰的任何条件，并且对于本发明所属技术领域中具有普通知识者是显而易见的。本公开涉及一种制造重组多肽的方法，其包含：培养如本文所述的经分离的宿主细胞，以及从该宿主细胞分离该重组多肽。从经培养的宿主细胞分离多肽的技术，可以是当从该选择用以表达的宿主细胞分离多肽时已知使用或经常规修饰的任何技术，并且对于本发明所属技术领域中具有普通知识者是显而易见地。[组合物及装置]本公开涉及一种组合物，其包含如本文所述的重组多肽、同型二聚体蛋白、或异型二聚体蛋白。于某些实施方案中，该组合物进一步包含生理可接受载体、赋形剂、或稳定剂。参见如1990年美国宾州伊士顿的麦克出版社MackPublishingCo.,Easton,PA出版的雷明顿药物科学Remington'sPharmaceuticalSciences。可接受载体、赋形剂、或稳定剂可包含对受试者无毒的物质。于某些实施方案中，该组合物或该组合物中一个或多个成分是无菌的。无菌成分可使用如过滤如通过无菌过滤膜或放射线照射如通过γ-射线照射来制备。于某些实施方案中，如本文所述的组合物进一步包含同种异体移植物或自体移植物的骨或骨碎片。于某些实施方案中，如本文所述的组合物进一步包含骨移植替代物。于某些实施方案中，该骨移植替代物是一种生物陶瓷bioceramic材料。用语「生物陶瓷材料」及「生物陶瓷」于本文中可相互代换。于某些实施方案中，该生物陶瓷在体内是可生物相容的且是可再吸收的。于某些实施方案中，该生物陶瓷是任何以磷酸钙盐类为基础的生物陶瓷。于某些实施方案中，该生物陶瓷选自由磷酸三钙TCP、α-磷酸三钙α-TCP、β-磷酸三钙β-TCP、双相磷酸钙BCT、氢氧磷灰石、硫酸钙及碳酸钙所组成的群组。于某些实施方案中，该生物陶瓷是β-磷酸三钙β-TCP。于某些实施方案中，该骨移植替代物是一种生物活性玻璃bioactiveglass。于某些实施方案中，该生物活性玻璃包含二氧化硅SiO2、氧化钠Na2O、氧化钙CaO、或氧化铂Pt2O5。本公开涉及一种可生物分解组合物，其包含：如本文所述的同型二聚体蛋白，具有诱导骨生成以在一个位置形成骨质的能力；及带有孔洞之可生物分解磷酸钙载体如β-TCP，孔洞是连通分布于该可生物分解磷酸钙载体；其中该同型二聚体蛋白的有效量为约0.03mgg至约3.2mgg的该可生物分解磷酸钙载体，且该可生物分解磷酸钙载体的孔隙率是大于70％，且孔径为约300μm至约600μm。于某些实施方案中，该可生物分解组合物适用于使一个组织凸出，该组织选自鼻沟、眉间、中面部组织、下颚轮廓线、下巴、脸颊、及其组合所组成的群组。于某些实施方案中，该位置置选自由长骨骨折缺损、二个相邻脊椎骨体的空间、不愈合骨的缺陷、上颚截骨切口、下颚截骨切口、矢状劈开截骨切口、颏整型截骨切口、快速颚扩张截骨切口、在二个相邻脊椎骨的二个相邻横突之间纵向延伸的空间、及其组合所组成的群组。于某些实施方案中，单一剂量的该同型二聚体蛋白为约0.006mg至15mg。于某些实施方案中，该可生物分解的磷酸钙载体供该同型二聚体蛋白流入该可生物分解的磷酸钙载体于该对象体内时不渗漏，从而使所形成的骨质限制于该可生物分解的磷酸钙载体的体积内。本公开涉及一种持续性释出组合物，其包含磷酸钙载体、可生物分解基质、及一如本文所述的同型二聚体蛋白。于某些实施方案中，该磷酸钙载体选自由：磷酸三钙TCP、α-磷酸三钙α-TCP、β-磷酸三钙β-TCP、双相磷酸钙BCP及其组合所组成的群组。于某些实施方案中，该可生物分解基质选自由：聚乳酸PLA、聚羟基乙酸PGA、聚乳酸-羟基乙酸共聚物PLGA、聚乙烯醇PVA、及其组合所组成的群组。于某些实施方案中，该持续性释出组合物包含：a约2-11％ww的该磷酸钙载体；b约88-97％ww的该可生物分解基质；及c约0.017-0.039％ww的该同型二聚体蛋白。本公开涉及一种用于填补骨孔隙的可模制组合物，其包含：含有该可模制组合物约90wt％至约99.5wt％的可模制基质；及如本文所述之一同型二聚体蛋白，其中，于植入后约1、24、48、72、168、240或约336小时，从该可模制组合物释出少于约25％百分率的该同型二聚体蛋白。本公开涉及一种脊椎融合装置，其包含一如本文所述的可生物分解组合物；及一个脊椎融合器如护架peekcage，其被配置用以保留该可生物分解磷酸钙载体。方法：本公开涉及一种需要这种治疗的对象中促进长骨骨折愈合的方法，其包含：制备含有如本文所述的同型二聚体蛋白的组合物，该同型二聚体蛋白均匀地容置在一缓释型可生物分解磷酸钙载体内如β-TCP，该可生物分解磷酸钙载体供该同型二聚体蛋白流入该可生物分解磷酸钙载体于该对象体内时不渗漏，从而使该长骨骨折愈合限制于该磷酸钙载体的体积内；且植入该组合物于该长骨骨折发生位置，其中该同型二聚体蛋白的量为约0.03mgg至约3.2mgg的该磷酸钙载体。于某些实施方案中，该促进长骨骨折愈合的方法更进一步包含：随着该磷酸钙载体降解，所容置的同型二聚体蛋白于该磷酸钙载体位置逐渐暴露，其中该磷酸钙载体具有约0.4至约1.8的钙与磷酸盐比率。本公开涉及一种促进脊椎融合的方法，其包含：暴露一个上脊椎骨和一个下脊椎骨；在该上脊椎骨和该下脊椎骨之间辨别出一个用以融合的部位；在该上脊椎骨及该下脊椎骨的各个用以融合的该部位上暴露一个骨表面；及于该部位上施用如本文所述之一同型二聚体蛋白及可生物分解磷酸钙载体如β-TCP。于某些实施方案中，该可生物分解磷酸钙载体是一种不可压缩递送载具，且其中该不可压缩递送载具是施用于需要骨生长但不自然发生骨生长的二个骨表面之间的该部位。于某些实施方案中，该可生物分解磷酸钙载体包含至少一个用以施用于该部位的植入棒，该植入棒在该上脊椎骨及该下脊椎骨之间纵向延伸。于某些实施方案中，该部位选自由二个相邻脊椎骨体的空间、以及在二个相邻脊椎骨的二个相邻横突之间纵向延伸的空间。本公开涉及一种用以促进关节固定arthrodesis的方法，其包含将如前所述之一同型二聚体蛋白及可生物分解磷酸钙载体施用在一个畸形或退化的关节。于某些实施方案中，施用该同型二聚体蛋白是包括将从约0.006mg至约10.5mg的该同型二聚体蛋白施用至该畸形或退化的关节。本公开涉及一种于有需求的对象的脊椎中产生骨质以融合二个相邻脊椎骨体的方法，其步骤包括：准备用于产生该骨质的组合物，该组合物含有一如本文所述的同型二聚体蛋白，该同型二聚体蛋白均匀地容置在一缓释型可生物分解载体内，该可生物分解载体供该同型二聚体蛋白流入该可生物分解载体于该对象体内时不渗漏，从而使所形成骨质限制于该缓释型可生物分解载体的体积内；及将该组合物引入该二个相邻脊椎骨体之间的位置，且其中随着该缓释型可生物分解载体降解，所容置的同型二聚体蛋白于该缓释型可生物分解载体位置逐渐暴露，更且其中该同型二聚体蛋白的量为该位置的约0.2mg部位即每一部位约0.2mg至约10.5mg部位即每一部位约10.5mg。于某些实施方案中，该缓释型可生物分解载体具有多孔结构，其中来自该二个相邻脊椎骨的细胞迁移到该多孔结构中以产生该骨质。于某些实施方案中，该缓释型可生物分解载体具有一个初始体积，且随着该缓释型可生物分解载体被再吸收，该骨质取代该缓释型可生物分解载体的该初始体积。本公开涉及一种在有需求的对象中通过后方融合术posteriorfusion或椎间孔融合术transforaminalfusion用以融合相邻脊椎骨体的方法，其步骤包括：准备一个盘空间，用以在该相邻脊椎骨之间的椎间空间中接收一个椎间盘植入物；将一缓释型载体引入该椎间盘植入物中，其中如本文所述的同型二聚体蛋白的量为从约0.2mg部位至约10.5mg部位的该缓释型载体；并将该椎间盘植入物引入该相邻脊椎骨之间的盘空间中，以在该盘空间中产生骨质。以下实施例是用以说明而非限制本发明。[实施例][实施例1]-质粒构建为了构建质粒pQE-80L-Kana，利用BspHIBioLab公司从pET-24a+Novagen公司切割卡那霉素抗性基因，以产生875-bp卡那霉素抗性基因+3886到+4760片段SEQIDNO：1。用BspHI切割pQE-80L凯杰公司载体以去除氨苄青霉素抗性基因+3587到+4699片段SEQIDNO：2，然后将该卡那霉素抗性基因片段连接到该pQE-80L载体中以生成4513-bp质粒pQE-80L-Kana。SEQIDNO：3。[实施例2]-酵母双杂合two-hybrid筛选A.诱饵质粒构建使用市售系统媒合双杂合系统2；美国加州帕洛阿尔托的CLONTECH公司进行酵母双杂合筛选。为构建诱饵质粒，pCRIIActRIIB作为模板进行聚合酶链式反应polymerasechainreaction，PCR1994年Hilden等人公开于Blood838:2163-70的研究以生产IIB型活化素受体ActRIIB蛋白的细胞外域+103到+375bpSEQIDNO：4的编码区。设计用于扩增ActRIIB该细胞外域ActRIIBecd的引物XmaI：5'-CCCGGGACGGGAGTGCATCTACAACG-3'SEQIDNO：5；SalI：5'-GTCGACTTATGGCAAATGAGTGAAGCGTTC-3'SEQIDNO：6使其在5’末端分别包含一个XmaI和SalI限制位点。使用模板DNA10ng、每个引物0.2μM、每个dNTP0.2mM、1XPCR缓冲液10mM三羟甲基氨基甲烷Tris-HCl、pH8.3、50mM氯化钾KCl及1.5mM氯化镁MgCl2以及pfuDNA聚合酶劲因科技有限公司1.25U，在总体积50μl下进行PCR。进行PCR30次循环：在95℃下变性30秒，接着在45℃下退火1分钟，在68℃下延伸5分钟。以XmaI-SalI切割该PCR产物，然后在框架内亚克隆subcloned到在pAS2-1载体CLONTECH公司GenBank登入号：U30497中GAL4的DNA-结合域中相同的限制位点，以产生质粒pAS-ActRIIBecd。已知ActRIIB的核酸序列和多肽序列以及天然存在的变体。例如野生型ActRIIB核酸序列为SEQIDNO：7。对应的多肽序列为SEQIDNO：8。ActRIIB的细胞外域ActRIIBecd为SEQIDNO：9，其对应SEQIDNO：8的残基21-117，且由核酸序列SEQIDNO：4编码。B.pACT2MC3T3cDNA文库构建为了构建pACT2MC3T3cDNA文库，由TuQ.等人2003年公开于JBoneMinerRes.1810:1825-33所公开大约7×106克隆的小鼠MC3T3-E1成骨细胞cDNA文库，并进行一些修饰以容许cDNA文库插入小于1.5kb，该文库构建到pACT2载体CLONTECH公司GenBank登入号：U29899中，其中在S1核酸酶处理后英杰生命科技公司cDNA合成系统CAT.编号18267-013，在pACT2载体中克隆该双链cDNA，其经SmaI切割以表达具有GAL4活化域的融合蛋白。接着根据制造商美国加州帕洛阿尔托的CLONTECH公司的方案，以「HIS3Jump-Start」程序筛选pACT2MC3T3cDNA文库。在另一个实施方案中，该pACT2cDNA文库是由市售产品获得。C.酵母菌株选择首先以诱饵质粒转化酿酒酵母SaccharomycescerevisiaeY190细胞美国加州帕洛阿尔托的CLONTECH公司，MATa、ura3-52、his3-D200、lys2-801、ade2-101、trp1-901、leu2-3、112、gal4D、gal80D、URA3::GAL1UAS-GAL1TATA-lacZ、cyhr2、LYS2::GALUAS-HIS3TATA-HIS3，并在不含色氨酸的合成葡萄糖培养基SD-Trp上进行筛选。随后以pACT2MC3T3cDNA文库转化在该SD-Trp培养基上生长的转化体，并在不含色氨酸和亮氨酸的培养基SD-Trp-Leu上进行筛选。于不含色氨酸、亮氨酸及组氨酸SD-Trp-Leu-His并具有30mM的3-氨基-1,2,4-三唑3-amino-1,2,4-triazole的培养基上美国密苏里州圣路易，西格玛奥瑞奇公司收集并再培养该诱饵与文库共转化后的克隆，以抑制Y190细胞的渗漏生长。进一步测定在此步骤中所选的克隆其β-半乳糖苷酶活性。经过30℃培养3天后，将培养皿拍照摄影。至少进行了三次独立实验，并有相似结果。从个别阳性克隆纯化该pACT2文库质粒，并在大肠杆菌Escherichiacoli.中进行扩增。用珀金埃尔默ABI自动DNA测序仪测序插入阳性克隆中的该cDNA，如表1所示引物5'-AATACCACTACAATGGAT-3'SEQIDNO：10。表1[实施例3]-易误Error-prone随机诱变PCRA.从质粒设计引物的诱变将来自实施例2的阳性克隆的DNA序列诱导突变。在一个实施方案中，经测序的阳性克隆被亚克隆到pQE-80L-Kana中，接着进行随机诱变PCR。用于扩增阳性克隆DNA序列如表1所示的引物，经设计在其5’末端包含一个MseI或BamHI限制位点。该PCR条件如实施例2所述。该PCR产物以MseI-BamHI进行切割，接着在框架内亚克隆到该pQE-80L-Kana载体中的相同限制位点。在Leung等人1989年公开于Technique,1,11-15公开的易错PCR基础下，经些微修饰，将随机诱变导入至该亚克隆的pQE-80L-Kana质粒内。使用线性化pQE-80L-Kana经XhoI切割作为模板DNA。用于使诱变PCR扩增的引物MseI：5'-GAATTCATTAAAGAGGAGAAATTAASEQIDNO：29；BamHI：5'-CCGGGGTACCGAGCTCGCATGCGGATCCTTASEQIDNO：30，经设计在其5’末端分别包含一个MseI或BamHI限制位点。使用模板DNA10ng、每个引物40pM、每个dNTP0.2mM、1XPCR缓冲液10mMTris-HCl、pH8.3、50mMKCl及1.5mMMgCl2、氯化锰MnCl20.2-0.3mM、二甲亚砜1％及TaqDNA聚合酶1.25U美国加州卡尔斯巴德的英杰公司，在总体积50μl下进行诱变PCR。诱变PCR进行30次循环：在94℃下变性30秒，接着在55℃下退火2分钟，在72℃下延伸3分钟。用MseI和BamHI切割该PCR产物。这个片段与经MseI和BamHI切割的pQE-80L-Kana的4.5-kb片段连接。以所得的pQE-80L-Kana衍生物转化大肠杆菌BL21Novagen公司。菌落在LTB-琼脂培养基LB补充有1％vv甘油三丁酸酯、0.1％vv吐温乳化剂-80、100mgL的卡那霉素、0.01μM的异丙基β-D-硫代吡喃半乳糖苷及1.5％琼脂的培养皿中于37℃环境下生长。B.表1引物的诱变在另一个实施方案中，基于先前Lenug所公开的易错PCR并经一些修改，将随机诱变导入至来自该阳性克隆的该pACT2文库质粒中。使用该线性化pACT2经XbaI切割作为模板DNA。使用具有如表1所示MseI和BamHI限制位点的合成寡核苷酸作为诱变PCR扩增反应的引物。使用模板DNA10ng、每个引物40pM、每个dNTP0.2mM、1XPCR缓冲液10mMTris-HCl、pH8.3、50mMKCl及1.5mMMgCl2、MnCl20.2-0.3mM、二甲亚砜1％及TaqDNA聚合酶1.25U美国加州卡尔斯巴德，英杰公司，在总体积50μl下进行诱变PCR。诱变PCR进行30次循环：在94℃下变性30秒，接着在55℃下退火1.5分钟，在72℃下延伸4分钟。用MseI和BamHI切割该PCR产物。将此片段与经MseI和BamHI切割的pQE-80L-Kana的4.5-kb片段连接。以所得的pQE-80L-Kana衍生物转化大肠杆菌BL21Novagen公司。菌落在LTB-琼脂培养基LB补充有1％vv甘油三丁酸酯、0.1％vv吐温乳化剂-80、100mgL的卡那霉素、0.01μM的异丙基β-D-硫代吡喃半乳糖苷及1.5％琼脂的培养皿中于37℃环境下生长。[实施例4]-ActRIIBecd相关多肽的表达使用如实施例3所述经稳定转化的大肠杆菌细胞，以表达来自实施例2的该诱变DNA的与ActRIIBecd交互作用的多肽即「域」。A.转化体发酵在一个实施方案中，将具有pQE-80L-Kana衍生物的大肠杆菌BL21转化体在含有卡那霉素25-32μgmL的65mL培养基10gLBBL植物蛋白胨、5gLBacto酵母提取物、10gLNaCl于500mL锥形瓶中，在30℃至37℃下，以180±20rpm搅拌，进行过夜培养约10小时。将前述过夜培养物37-420mL加至3.7-42L的TB培养基BBL植物蛋白胨18g、Bacto酵母提取物36g、磷酸二氢钾KH2PO418.81g、甘油6mL，于1L水中中，该培养基于5-50L发酵罐中含有23.8-38.5μgmL的卡那霉素及1-3mmolL的异丙基β-D-硫代吡喃半乳糖苷IPTG，并且将温度控制在37℃至42℃范围内，以260-450rpm搅拌该培养基10-24小时。在GSA旋转器索福公司中，经8,000rpm离心10分钟后，在冰水浴中收集该细胞。在另一个实施方案中，将1L的LB液体培养基具有100mgL卡那霉素与新鲜长成的菌落具有pQE-80L-Kana衍生物的大肠杆菌BL21转化体或10mL的新鲜长成的培养物接菌，并在37℃下孵育直到OD600达0.4-0.8。通过加入40或400μM的IPTG在37℃下经3至5小时，以诱导该多肽表达。经离心后约8,000rpm，于4℃下收集细胞。B.回收与纯化来自大肠杆菌的多肽如先前实施例4A所述，发酵大肠杆菌BL21pQE-80L-Kana衍生物细胞。在一个实施方案中，在4℃下将来自那些衍生物的多肽进行细胞破碎和回收。将约18g的湿细胞悬浮于60mL的0.1M的TRISHCl、10mMEDTA乙二胺四乙酸、1mMPMSF苯基甲烷磺酰氟、pH8.3破碎缓冲液之中。根据制造商的说明书，细胞通过法式细胞破碎器Frenchpress，SLM仪器公司2次，并用破碎缓冲液将体积调整至200mL。将悬浮液在15,000g下离心20分钟。将所获得的沉淀物悬浮于含有1M氯化钠NaCl的100mL破碎缓冲液中，并如上所述离心10分钟。将沉淀物悬浮于含有1％TritonX-100Pierce公司的100mL破碎缓冲液中，并再次如上所述离心10分钟。然后将冲洗下来的沉淀物悬浮于50mL的TrisHCl、1mMEDTA、1mMPMSF、1％DTT二硫苏糖醇中，并在特氟隆Teflon组织研磨机中均质化。所得的悬浮液中含有不可溶型态的粗多肽crudepolypeptide。将根据前述实施方案所获得的10mL多肽悬浮液以10％乙酸酸化至pH2.5，并使用Eppendorf离心机在室温下离心10分钟。上清液在10％乙酸流速1.4mLmin下，使用SephacrylS-100型柱子法玛西亚公司，2.6×78cm进行层析。合并在适当时间区间洗脱的含多肽的层析馏分。使用此材料用于重折叠以得到生物活性多肽或是用于进一步纯化。将来自前述实施方案的5mg多肽溶解于140mL的50mM的TrisHCl、pH8.0、1M的NaCl、5mM的EDTA、2mM的还原型谷胱甘肽、1mM的氧化型谷胱甘肽和33mM的Chaps生化试剂Calbiochem公司中。在4℃下经72小时后，将上述溶液的酸碱值以盐酸HCl调整至pH2.5，并将前述混合物在Amicon超滤杯stirredcell中以YM10薄膜美国麻州丹佛斯，Amicon公司进行超滤10倍浓缩。将前述经浓缩的溶液以10mM的HCl稀释至原始体积，并再经同样方法浓缩至最终体积为10mL。所形成的沉淀物以5000g离心30分钟移除。在非还原状态下，利用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳法SDS-PAGE判断含有二硫键的多肽的前述上清液。使用表面等离子体共振式生物分子传感器BIAcoreTM量测前述制剂的生物活性实施例5。将来自前述实施方案中的该浓缩溶液以1mLmin流速施加到MonoSHR55型柱子法玛西亚公司，该柱子经85％缓冲液A20mM乙酸钠、30％异丙醇，pH4.0及15％缓冲液B含有1M氯化钠的缓冲液A的混合物平衡。然后以相同流速冲洗该柱子，保持上述缓冲液混合物的组成恒定直到280nm吸光度读值达基线水平，接着在平衡状态下开始注射线性梯度超过20分钟，最后以50％缓冲液A50％缓冲液B的混合物结束。生物活性多肽在梯度开始后约9分钟被洗脱，并将其收集。利用生物活性测定及非还原条件下的SDS-PAGE判断。在另一个实施方案中，该多肽经由实施例4所收集细胞的包涵体制备。在室温下隔夜提取50mM的乙酸钠、pH5、8M的尿素、14mM的2-巯基乙醇，并对水彻底透析后，该多肽重折叠、浓缩，并通过SephacrylS-100HR型柱子法玛西亚公司以1％的乙酸或5mM的HCL在流速1.8mLmin下浓化。最后以蛋白质层析仪FPLC，FractogelEMDSO3-650、50mM的乙酸钠、pH5、30％的2-丙醇纯化并以从0至1.5M的NaCl梯度洗脱。合并在适当时间区间洗脱的含多肽馏分。对水彻底透析后，该多肽经冷冻干燥后储存于-20℃。以SDS-PAGE分析该多肽的纯度，接着以考马斯亮蓝R染色。在另一个实施方案中，将衍生自例如上述实施例4A的每1克的细胞颗粒再悬浮于10-20mL的10mM的TRISHCl、150mM的NaCl、1mM的EDTA、5mM的DTT、pH8.0破碎缓冲液中，并以声波处理使细胞破裂，该声波处理是使用具有1号增幅器EnhanceBooster#1探针的MisonixS4000仪器在30A仪器刻度上使用5分钟。可选择性地通过离心18,000×g经20分钟或15,000×g经30分钟澄清前述细胞裂解混合物，并将沉淀物以含有1vv％TritonX-100的10-20mL破碎缓冲液冲洗数次，并如上述离心10分钟。将细胞裂解物以含有6M尿素的100-200mL破碎缓冲液溶解，并如上述离心10分钟，保留含有该多肽的上清液以进一步纯化。将前述上清液溶解于重折叠缓冲液100mL的TrisHClpH8.0、500mM的精氨酸-HCl、5mM的EDTA、25mM的Chaps、2mM的氧化型谷胱甘肽和1mM的还原型谷胱甘肽中。在室温经4-7天后，该多肽以FPLCFractogelEMDSO3-650、20mM乙酸钠、pH4-5、30％2-丙醇和25mMChaps纯化并以从0至3M的NaCl梯度洗脱。合并在适当时间区间洗脱的含多肽馏分。以SDS-PAGE分析该多肽的纯度，接着以考马斯亮蓝R染色。于某些实施方案中，本公开的异型二聚体可以通过如先前在实施例3所述在瞬态表达系统中共表达co-expression来制备，且可以从该培养基分离出该异型二聚体以实施例5的测定进行筛选。[实施例5]-体外BIAcoreTM测定生物传感器实验。在一个实施方案中，在BIAcoreTMT100T200型仪器PharmaciaBiosensorAB公司的多信道模式串流路径涉及细胞流动室1+2+3+4下进行实验。流速为10μlmin，温度为25℃，并以2.5点秒记录数据。利用氨基偶联法将所有四个片段的传感器芯片CM5涂覆链霉亲和素streptavidin，西格玛公司至密度2000pgmm22000共振单位。将ActRIIBecd10mg和胺-PEG3-生物素amine-PEG3-Biotin，10mg，美国伊利诺伊州罗克福德，Pierce公司溶于200μl的水中，并加入10mg的氰基硼氢化钠NaCNBH3以制备生物素化的ActRIIBecd。将反应混合物于70℃下加热24小时，之后再进一步加入10mg的NaCNBH3，接着将该反应物于70℃下再加热24小时。冷却至室温后，该混合物以旋转柱子3,000截留分子量MWCO脱盐。收集生物素化的ActRIIBecd，经冷冻干燥后用于链霉亲和素SA芯片制备。然后将氨基生物素化的ActRIIBecd在流速为5μLmin下独立地固定在细胞流动室2-4上10分钟，并在10mM乙酸钠中浓度为20μM，pH4.0，密度为50-250共振单位RU。将储存的该多肽溶解于甘氨酸缓冲液2.5g的甘氨酸、0.5g的蔗糖、370mg的L-谷氨酸盐、10mg的氯化钠和10mg的吐温乳化剂-80，于100mL水中，pH4.5中以制备10mgmL溶液，接着用先前的甘氨酸缓冲液稀释以制备成各种浓度的分析物。在分析物如先前所述的ActRIIBecd相关多肽即，域流动期间记录感应图谱，首先通过细胞流动室1对照，接着通过细胞流动室2生物素化的ActRIIBecd。将细胞流动室2获得的感应图谱减去细胞流动室1获得的感应图谱。通过仪器提供的程序PharmaciaBiosensorAB公司，1995年软件手册，BIA评估2.1，评估在1、11、3.33、10、30和90nM分析物上获得的感应图谱的平衡结合、结合速率和解离速率。分析物和牛血清白蛋白BSA，阴性对照列于表2中。使用如前所述的珀金埃尔默ABI自动DNA测序仪进行与分析物相关克隆中该pQE-80L-Kana衍生物的测序引物5'-CTCGAGAAATCATAAAAAATTTATTTG-3'SEQIDNO：31，该pQE-80L-Kana衍生物具有相较于白蛋白更高的亲和力常数。表2NB：结合Binding低于侦测极限KD1mM[实施例6]-重组多肽的制造为了确定是否可以增强亲和力常数，使用Atanassov等人2009年公开于PlantMethods5:14所公开的PCR融合PCR-Fusion方法经一些修改，将表2中的各别域彼此融合以制造重组多肽。使用PhusionDNA聚合酶芬兰，Finnzymes公司和标准热循环仪进行PCR融合。以BPClonaseII和LRClonaseII酶混合物英杰公司进行通路重组反应Gatewayrecombinationreactions。感受态大肠杆菌DH5α细胞是根据Nojima等人公开内容1990年公开于Gene961：23-28制备。使用公司的SpinMiniprep试剂盒和公司的凝胶提取和PCR纯化试剂盒德国，凯杰公司纯化质粒DNA和PCR片段。所得重组多肽的DNA模板、PCR引物和DNA多肽序列如表3所示。PCR融合涉及来自质粒模板的二个或三个平行PCR扩增。在来自平行反应的凝胶经纯化PCR片段上，进行通过单个重叠延伸扩增片段的PCR融合。根据PhusionDNA聚合酶指引NewEnglandBiolabs公司：PhusionTM高保真度HFDNA聚合酶手册在本稿中对于所有PCR扩增用于反应混合及条件的循环参数皆相同。质粒模板的退火温度为55℃。对于融合二个PCR片段，使用30μl重叠延伸反应，其包含：16μl的该二个PCR片段混合物通常每个8μl，约200-800ng，DNA、6μl的5×PhusionHF缓冲液、3μl的2mMdNTP混合物、0.3μl的PhusionTMDNA聚合酶2Uμl。在重叠延伸混合物中不加入引物。当融合三个DNA片段时，使用18μl该PCR混合物通常每个6μl。一般而言，使用等体积的经纯化PCR片段不会检查精确的DNA浓度。若该经扩增PCR片段的摩尔比看起来明显不同例如：在琼脂糖电泳后估计DNA带强度超过5-7倍，来自纯化过的PCR片段体积则应对应调整。上述反应混合物在98℃孵育30秒、60℃孵育1分钟、72℃孵育7分钟。使用PCR纯化试剂盒纯化该重叠延伸反应后所获得的DNA。如前所述，PCR产物经切割并结合于pQE-80L-Kana载体中用以蛋白质多肽表达。利用先前讨论过的BIAcoreTMT100T200型GEHealthcare公司监测经纯化的蛋白质多肽对于ActRIIBecd的亲和力，并使用实施例5中BIA评估软件版本4.1GEHealthcare公司进行数据分析。表3NB：结合Binding低于侦测极限KD1mM数据显示，与来自每一单个克隆的个别多肽相比，来自如后述的二个克隆组合所形成的重组多肽，其亲和力常数KD较低：克隆编号10可操作地连接克隆编号15SEQIDNO：188、克隆编号15可操作地连接克隆编号10SEQIDNO：194、克隆编号15可操作地连接克隆编号21SEQIDNO：200、克隆编号21可操作地连接克隆编号15SEQIDNO：206、克隆编号21可操作地连接克隆编号10SEQIDNO：212、克隆编号10可操作地连接克隆编号21SEQIDNO：218、克隆编号8可操作地连接克隆编号14SEQIDNO：224、克隆编号14可操作性地连接克隆编号8SEQIDNO：230、克隆编号19可操作地连接克隆编号8SEQIDNO：236、克隆编号8可操作地连接克隆编号19SEQIDNO：242、克隆编号19可操作性地连接克隆编号14连接SEQIDNO：248及克隆编号14可操作地连接克隆编号19SEQIDNO：254。换言之，来自所述组合所形成的该重组多肽相对于来自克隆编号8SEQIDNO：35、克隆编号10SEQIDNO：39、克隆编号14SEQIDNO：47、克隆编号15SEQIDNO：49、克隆编号19SEQIDNO：57及克隆编号21SEQIDNO：61的每个克隆的各别多肽，具有对ActRIIBecd更高的亲和力。除此之外，来自三个克隆的组合而制成重组多肽，该克隆是使用：克隆编号8SEQIDNO：35、克隆编号10SEQIDNO：39、克隆编号14SEQIDNO：47、克隆编号15SEQIDNO：49、克隆编号19SEQIDNO：57及克隆编号21SEQIDNO：61。令人意外的，与来自各别克隆的多肽或来自二个克隆组合的多肽相比，来自如后述的三个克隆组合所形成的重组多肽的KD较低，该克隆为：克隆编号10可操作地连接克隆编号15及21SEQIDNO：260、克隆编号15可操作地连接克隆编号10及21SEQIDNO：268、克隆编号21可操作地连接克隆编号15及10SEQIDNO：276、克隆编号21可操作地连接克隆编号10及15SEQIDNO：284、克隆编号8可操作地连接克隆编号14及19SEQIDNO：292、克隆编号14可操作地连接克隆编号8及19SEQIDNO：300、克隆编号19可操作地连接克隆编号8及14SEQIDNO：308、克隆编号19可操作地连接克隆编号14及8SEQIDNO：316、克隆编号10可操作地连接克隆编号14及21SEQIDNO：324、克隆编号8可操作地连接克隆编号15及19SEQIDNO：332、克隆编号10可操作地连接克隆编号19及14SEQIDNO：340及克隆编号8可操作地连接克隆编号21及15SEQIDNO：348。[实施例7]-翻译后修饰研究关于翻译后修饰PTM对于该重组多肽KD值的影响。PTM的一个实施例是二硫键连接。表4所示为二硫键位置和结合亲和力之间关系的数据，结果显示PTM会影响该重组多肽对ActRIIBecd的结合亲和力。该PTM测定是根据以下实验进行。A.酶切割和二甲基标记如实施例4和6制备多肽。标准蛋白购自西格玛公司美国密苏里州圣路易斯。可选择性地使用pH6含有5mM的N-乙基顺丁烯二酰亚胺NEM，西格玛公司的100mM乙酸钠美国纽泽西州非力普堡，J.T.Baker公司在室温下阻断游离半胱氨酸30分钟。酶切割直接于乙酸钠中在37℃下以1：50胰蛋白酶美国威斯康星州麦迪逊，劲因公司进行。在二甲基标记之前，将蛋白质切割物使用100mM的乙酸钠pH5进行三倍稀释。于某些实施方案中，如实施例4和6制备的重组多肽以50mM三乙基碳酸氢铵Triethylammoniumbicarbonate，TEABC，T7408，西格玛奥瑞奇公司缓冲液pH7稀释，并分装于二个试管用以不同酶切割。首先，加入NEMN-乙基顺丁烯二酰亚胺，E3876，西格玛奥瑞奇公司至最终浓度5mM以阻断游离半胱氨酸。烷基化反应在室温下进行30分钟。经NEM烷基化后，该两个试管的其一于37℃下加入胰蛋白酶V5111，劲因公司1：6518小时，随后在37℃下以Glu-CP8100S，NewEnglandBioLabs公司1：50进行隔夜切割。另一试管则于37℃下加入Glu-C1：5018小时，随后在37℃下以胰凝乳蛋白酶1：50进行隔夜切割。为进行二甲基标记，于50μL的蛋白质切割物中加入2.5μL的4％wv甲醛-H2J.T.Baker公司或2.5μL的4％wv甲醛-D2奥瑞奇公司，接着加入2.5μL的600mM氰基硼氢化钠西格玛公司，上述反应在pH5-6进行30分钟。B.质谱分析使用配有CapLC系统美国麻州密尔福，沃特斯公司的ESIQ-TOF利用毛细柱子台湾，志圣工业股份有限公司，内径75μm、长度10cm进行测量扫描MS，mz400-1600；MSMS，mz50-2000。将该经烷基化及二甲基化标记的蛋白质切割物进行液相层析串联式质谱LC-MSMS分析，其在含有0.1％甲酸的乙腈线性梯度5％至50％中45分钟。于某些实施方案中，上述经切割及标记的蛋白质切割物以高分辨质谱Q-ExactivePlusMS连接快速液相层析Ultimate3000RSLC系统进行分析。使用C18柱子AcclaimPepMapRSLC,75μmx150mm,2μm,进行液相层析LC分离，其使用的梯度如下：移动相A：0.1％甲酸移动相B：95％乙腈0.1％甲酸以mz300-2000范围进行全MS扫描，并将MS扫描中10个最强的离子用于串联式质谱MSMS光谱碎片分析。C.资料分析使用MassLynx4.0从原始数据产生峰值列表减去30％，32SavitzkyGolay平滑法，中央三通道80％质心。可以用相对高地减法以消除背景噪声。真正的a1离子通常显示为主波峰，以使其可保留于峰值列表中。D.反相层析在具有二元泵的安捷伦1100型高效液相层析系统Agilent1100HPLC装备有UV检测器和自动进样器。将蛋白质注入75℃操作下的Zorbax300SBC8柱子150±2.1mm，5μm，。流速为0.5mlmin。移动相A为含有0.1％三氟乙酸的水。移动相B为70％异丙醇、20％乙腈、以及0.1％三氟乙酸水溶液。样品在10％B的负载条件下注入，并在2分钟内增加至19％B。在两分钟时开始1.1％Bmin的线性洗脱梯度，并在24分钟时结束。然后使用95％B冲洗该柱子5分钟。将该柱子于负载条件下5分钟以重新平衡。此方法能够部分分离区别二硫键异构物。表4a分子内二硫键连接。b分子间二硫键连结以二聚化。如表4所示，不同半胱氨酸位置间的二硫键会影响亲和力常数KD的值。除此之外，数据也显示，二聚体中两个重组多肽间的二硫键会显著降低KD值。换言之，二聚化作用可能有助于重组多肽的二聚体和该ActRIIBecd间体外的分子交互作用。观察到一些重组多肽自发性形成如表4所示的二聚体蛋白。所有该二聚体蛋白可经由如实施例4B所述的凝胶过滤将其从重组多肽中分离纯化。于此实施方案中，该二聚体蛋白是同型二聚体蛋白，因为其单体相同。于其它实施方案中，若如实施例4中所述的经稳定转化的大肠杆菌细胞由选自SEQIDNo：260、268、276、284、292、300、308、316、324、332、340和348所组成的群组的两个相异重组多肽共表达，则该二聚体蛋白可以是异型二聚体蛋白。[实施例8]-碱性磷酸酶生物活性测定使用已公开的C2C12细胞中碱性磷酸酶诱导检验法，研究该重组多肽与细胞受体结合以及诱导信号传导途径的能力。参见如：Peel等人2003年公开于JCraniofacialSurg.14:284-291及Hu等人2004年公开于GrowthFactors22:29033的研究。在汇合之前将C2C12细胞美国弗吉尼亚州马纳萨斯，ATCC登录号CRL-1772传代，并再悬浮于补充有10％经热灭活的胎牛血清的DMEM中1×105细胞mL。将96孔组织培养板康宁公司，Cat#3595的每孔植入100μL细胞悬浮液。加入连续稀释标准品及测试样本的等分试样，并将培养物保持于37℃和5％的CO2环境中。测试样本包括经限制的培养基、经纯化的重组多肽以及作为阳性对照的市售经纯化的重组人类BMP-2「rhBMP-2」美国明尼亚波利斯，R&DSystems公司。rhBMP-2已显示在骨及软骨发展上扮演重要角色，例如：MundyGR等人2004年公开于GrowthFactors.224：233–41的研究。阴性对照培养物培养基不加入样本或rhBMP-2经培养2至7天。培养基每两日更换一次。收获培养物时以生理盐水漂洗0.90％的NaCl，pH7.4，并将漂洗后的盐水丢弃。在培养物中加入50μL提取溶液TakaraBio公司，catalogue#MK301，然后在室温下超声波处理10分钟。溶菌液的碱性磷酸酶ALP的检测，是通过如Peel等人2003年公开于JCraniofacialSurg.14:284-291所公开监测碱性缓冲液美国密苏里州圣路易，西格玛奥瑞奇公司，catalogP5899中硝基酚磷酸酯的水解作用，或是根据制造商的说明书使用TRACP&ALP检测试剂盒TakaraBio公司，catalogue#MK301。通过记录405nm吸光度测定ALP活性。经重复样本的平均ALP活性计算活性评分。使用4参数曲线拟合法4-parametercurvefit对连续稀释样本及其相对活性评分作图以计算各个重组多肽的EC50浓度。数据显示如表5。在一些实施方案中，使用考马斯亮蓝布拉德福蛋白质检测法CoomasieBradfordProteinAssay，Pierce生物科技股份有限公司，catalogue#23200将每个孔中细胞蛋白质含量的该ALP活性进行标准化。通过将每个孔的该ALP活性除以每个孔的蛋白质含量以计算每个样本该经标准化的ALP活性。在另一个实施方案中。进行由Katagiri,T.等人1990年公开于Biochem.Biophys.Res.Cornrnun.172,295-299所公开的碱性磷酸酶检测。将来自C3H10T12品系的小鼠纤维母细胞培养于加上10％胎生小牛血清的BME-Earle培养基，将1mL的1x105细胞mL等分试样置于24孔培养板中，维持37℃和10％CO2环境下24小时。移除上清液后，加入带有各种浓度样本的1mL新鲜培养基。在进一步培养4天后，将细胞溶解于0.2mL缓冲液0.1M的甘油、pH9.6、1％的NP-40、1mM的MgCl2、1mM的ZnCl2中，碱性磷酸酶活性在50μL等分试样溶胞液中测定，该溶胞液是经过使用pH9.6缓冲液作为基质，以0.3mM对硝基酚磷酸酯150μL处理。在37℃下培养20分钟后记录405nm的吸光度。该活性是与每个样本中的蛋白质含量BCA蛋白质检测法，Pierce化学公司有关。表5NA：尚未分析。a分子内二硫键连接。b分子间二硫键连结以二聚化。如表5所示，具有某些二硫键的大多数重组多肽，其EC50值较rhBMP-2的EC50值为低。换言之，具有某些二硫键的大多数重组多肽能够诱导骨或软骨生成或成骨作用相关的信号传导路径。[实施例9]-体内骨诱导活性在兔子的尺骨轴缺损中，对于同型二聚体蛋白的骨诱导活性进行评估，前述同型二聚体蛋白的骨诱导活性包括依据实施例6所制造的二个重组多肽即SEQIDNO：260，包括分子内二硫键C44-C48及作为载体材料的多孔β-磷酸三钙β-TCP。该磷酸钙载体具有约0.4至约1.65的钙与磷酸盐比率。在40只雌兔NZW品系，日本SLC股份有限公司上，以外科手术暴露左和右的尺骨轴制造圆周20mm大的缺损。简言之，使用氯胺酮盐酸盐商品名Ketalar，第一三共股份有限公司及甲苯噻嗪xylazine，商品名Selactar2％注射液，拜耳医药有限公司以3：1的组合进行复合麻醉。在长时间的手术中使用相同溶液作为额外麻醉。手术前，将氟霉宁Flumarin学名flomoxefsodium，塩野义制药股份有限公司作为抗生素皮下给药。前臂一般区域的毛使用电动剃刀将其刮除，并使用希必定酒精Hibitane，葡萄糖酸氯己定-乙醇溶液，大日本住友制药股份有限公司进行消毒。在尺骨的每个肢的后内侧部位制造一纵向切口。将肌肉组织抬起以暴露该尺骨。使用手术刀从该暴露尺骨的手部关节25mm处制造一标记。使用15mm直径的钻头在该标记处纵向及垂直钻孔，密切注意不造成该骨断裂。使用骨剪将该骨分割。在距离近端方向20mm处也制造一标记，并以相似方式分割。当分割时，该尺骨覆盖骨膜，接着将该骨膜移除，并用盐水彻底清洁该骨碎片。如下表6所示，根据实验组A-G的其一，对每个尺骨植入或不植入植入物。实验组A-D的尺骨植入由β-TCP携带特定剂量同型二聚体蛋白的单一植入物。实验组E的尺骨植入仅β-TCP的单一植入物，没有任何同型二聚体蛋白。实验组F的尺骨植入骨自体移植的单一植入物。实验组G的尺骨则没有植入物。之后，迅速缝合肌肉及真皮组织。表6实验组A-E中所使用的β-TCP为1-3mm的颗粒型式，其孔隙率为75％，孔径为50-350μm日本，SuperporeTM公司，pentax陶瓷人工骨系列，「HOYA」人工骨替代物。于某些实施方案中，实验组A-E中所使用的β-TCP为1-3mm的颗粒型式，其孔隙率为70％或以上，孔径为300-600μm台湾微创医疗器材公司，「台微医」康骨益人工骨替代物。实验组A-D中包含重组多肽即SEQIDNO：260的同型二聚体蛋白是在每只动物植入前立即使用0.5mM盐酸以注射剂大冢制药公司进行标准溶液稀释从冷冻批次准备。对于单侧植入设定流体体积为180μl，并在已灭菌培养皿中200mg的β-TCP颗粒上均匀滴加。当流体完全滴落，以刮勺轻轻搅拌该β-TCP颗粒，在室温下静置超过15分钟，接着进行植入。关于实验组F，自体移植骨是利用骨剪从左翼或右翼的胯骨获得。将骨加工成碎片，且植入的骨量与实验组A-E的量相同。X光评估拍摄侧面及前面的X光影像即，放射线照片，分别为植入后立即拍摄以及每两周拍摄一次直至植入后8周。使用该放射线照片评估植入部位的状况及骨生成的程度。每一实验组代表性实施例的X光影像如图1A实验组A-D及图1B实验组E-G所示。在2周时，在所有实验组别中可以清楚地看到受植床其移植材料的颗粒和边界的对比。在4周时，在该同型二聚体蛋白组即实验组A-D中的TCP颗粒变的不明显，显示出该颗粒的吸收及骨生成的进度。在具有高剂量同型二聚体蛋白的实验组C和实验组D的部分样本中，该植入部位和该受植床之间的边界变的不明显。在6周时，实验组B中该植入部位和该受植床之间的边界变的不明显。在实验组C和实验组D的某些样本中观察到该受植床的连续性及骨皮质生成的改善。在8周时，实验组A和实验组B中该受植床的边界变得更加不明显。实验组C中该受植床的连续性及骨皮质生成改善。实验组D中观察到该尺骨缺损区的重建，如6周的影像所示。在单独使用TCP的实验组E中，随着时间可观察到该受植床有骨生成。然而，即使在8周时剩余的TCP颗粒仍清晰可见，显示该植入部位上骨生成不足并且该受植床中的连续性差。因此，实验组E中缺损的修复在8周时仍然不完整。在具有自体移植的实验组F中，随着时间可观察到骨生成的进度，且在8周时跟该受植床已达融合。然而，生成并不均匀。在仅具有缺损而没有移植物的实验组G中，在8周时于桡骨上可观察到些微骨生成，而没有任何其他该缺损的修复。计算机断层ComputerizedTomography，CT扫描在移植后当下、移植后4周及8周时使用CT扫描，以1mm间隔进行轴定向GE横河医疗系统有限公司。主要扫描该植入部位的影像。在图2A实验组A-D和图2B实验组E-G中的代表性实施例显示该植入部位中心随着时间推移的横截面影像变化。在具有同型二聚体蛋白的实验组A至D中，在移植后立刻观察到的颗粒在4周的横截面影像中部分降解，显示骨生成发生。在60μg剂量的实验组D中，进一步观察到骨生成的进度，并且在一些样本中观察到骨髓腔生成。8周时，在6μg以上剂量组别的影像中观察到骨髓腔和骨皮质生成的进度。在仅有TCP的实验组E中，即使在8周时仍有颗粒团聚体。在有自体移植的实验组F中，8周时观察到骨髓腔生成，如再成型过程中。在仅有缺损的实验组G中，仅观察到些微的骨生成。抗扭强度测试该移植材料从植入后8周安乐死的兔子中取出，从每一实验组的尺骨样本分离出的桡骨上进行抗扭强度测试。使用858MiniBionixII工具MTS系统公司进行测试。该测试在50mm长的区域进行，即在该尺骨轴中心的20mm长的重建区域及在该重建区域的近侧和远侧15mm长的区域。每侧的边缘用牙科树脂固定。将树脂部分夹在量测设备中。以30°min的旋转速度将左侧尺骨以逆时钟方向旋转，右侧尺骨以顺时钟方向旋转，以确定失败时的最大扭矩。并检查和比较分别获得的健康兔子尺骨。健康兔子尺骨是从日本白兔获得，与实验组A至E中使用的类型不同。然而，日本白兔在安乐死时的年龄和性别与实验组A至E相同，即26周龄的雌兔。图3所示为该抗扭强度测试下每一实验组所获得的最大扭矩。在具有同型二聚体蛋白的实验组A至D中，最大扭矩和剂量的相依性高。与单独使用TCP的实验组E相比，在具有同型二聚体蛋白剂量2μg及超过2μg的的实验组A至D中观察到显著高的值。与仅有缺损的实验组G相比，在具有同型二聚体蛋白剂量6μg及超过6μg的实验组B至D中观察到显著高的值。在完整无缺损尺骨、自体移植或同型二聚体蛋白的实验组别间未观察到显著差异。由于在实验组E和实验组G中骨生成不足，当分离桡骨时，难以确保在一些样本中的支承。故，在测试中仅使用实验组E的2个样本和实验组G的4个样本，而实验组A至实验组D和实验组F则各使用6个样本。下表7所示为使用相同动物模型的本发明与Kokubo等人2003年公开于Biomaterials24:1643–1651，2003对于CHO衍生BMP-2的评估研究间测试条件和结果的比较。与Kokubo等人的报告相比，本发明在更为困难的条件下进行，例如：较大的骨缺损、较小剂量的活性剂，以及在抗扭强度测试之前较短的植入期间。然而，本发明显示尺骨成功修复，且本发明中的最大扭矩非常相似。表7*PGS：涂布PLGA的明胶海绵^h.p.：同型二聚体蛋白组织学评估在8周和4周的实验组别中对所有动物制备标本。将尸体剖检时获得的组织保存于4％多聚甲醛溶液中并以10％的EDTA脱钙。接着将该组织以石蜡包埋。在平行于桡骨长轴的平面上制作薄片样本，以苏木素和伊红HE染色，并进行组织学评估。以确定骨生成和对该受植床的融合条件。在具有同型二聚体蛋白的实验组A至D中，在4周时骨生成进展成横纹型。在高剂量同型二聚体蛋白的样本中观察到主动性地骨生成。在60μg剂量的实验组D中观察到显著大量的新生骨和血管新生。在低剂量的实验组A和实验组B的一些样本中观察到残余材料，在实验组C和实验组D中则几乎没有观察到残余材料。在实验组A和实验组B中，一些样本的该受植床边界附近观察到软骨生成。在所有样本中，该受植床直接与该横纹型的新生骨连接。在8周时，2μg剂量的实验组A仍可观察到横纹及残余材料。在受植床边界附近也可观察到软骨。即使再成型不足，仍可观察到骨生成的进展。在一些样本中观察到桡骨中骨皮质的生成。剂量超过6μg的实验组B至实验组D，通过再成型形成骨皮质及骨髓。在更高剂量的实验组别中进步更为显著。在植入部位上的连续性也增加。在单独使用TCP的实验组E中，在桡骨中观察到移植材料上有骨生成，但即使在8周时残余材料仍清晰可见，显示在轴上骨生成不足且连续性差。在具有自体移植物的实验组F中，4周时可见移植骨碎片上良好的骨生成，且新生骨与受植床接触。在受植床边界附近观察到软骨生成。8周时可观察到新生骨再成型及骨皮质生成的进展，但是仍可观察到残余的移植骨碎片。在仅有缺损的实验组G中，仅在桡骨中观察到骨生成，且该缺损尚未完成修复。于实施方案中，提供了需要这种治疗的对象中促进长骨骨折愈合的方法。该方法包含制备含有该同型二聚体蛋白的组合物，该同型二聚体蛋白均匀地容置在一缓释型可生物分解磷酸钙载体如β-TCP内，该可生物分解磷酸钙载体供该同型二聚体蛋白流入该可生物分解磷酸钙载体于该对象体内时不渗漏，从而使该长骨骨折愈合限制于该磷酸钙载体的体积内，且植入该组合物于该长骨骨折发生位置，其中该同型二聚体蛋白的量为该磷酸钙载体的约0.03mgg至约3.2mgg。[实施例10]-绵羊后外侧融合的体内研究在绵羊的后外侧融合模型中，对于同型二聚体蛋白的骨诱导活性进行评估，前述同型二聚体蛋白的骨诱导活性包括依据实施例6所制造之一重组多肽Rcp即SEQIDNO：260，包括分子内二硫键C44-C48、C80-C112及C79-C114及作为载体材料的多孔β-磷酸三钙β-TCP。该磷酸钙载体具有约1.2至约1.8的钙与磷酸盐比率。绵羊后外侧融合模型以Zoletil8-12mgkg，肌肉注射IM及异氟烷2％和氧气每分钟2公升放气，使绵羊镇静。插入气管内导管，并使动物通气，使用异氟烷2至3％和氧气每分钟2至4公升维持麻醉。给予抗生素1gm静脉注射IV；苯唑西林Benacillin5ml肌肉注射IM。在手术前注射卡洛芬Carprofen，一种非类固醇抗发炎药NSAID，4ml肌肉注射IM和丁基原啡因Burprenorphine，商品名0.324mg皮下注射SC。依据需求，在手术前及手术过程中以4至10mlkgh静脉内给予晶体溶液哈特曼氏Hartmann液。在第3腰椎至第4腰椎高度处L3-L4，创造一平行于腰椎横突的15-cm大的中线切口。钝性腹膜后剥离使腰椎前外侧部分暴露。此举可不受膈肌干扰。将软组织收起。使用气动切削钻头产品名MidasRex剥离所有动物于该高度间的横突侧向15mm及相邻脊椎体。将移植物材料置于该横突的剥离面和根据实验组1至6中的其一的该脊椎体脊椎旁床之间，实验组1至6如下表8所示。实验组1至3植入由β-TCP携带特定剂量同型二聚体蛋白的单一植入物。实验组4植入仅β-TCP的单一植入物，没有任何同型二聚体蛋白。实验组6植入具有特定剂量rhBMP-2的可吸收胶原蛋白海绵absorbablecollagensponge，ACS的单一植入物，此为公认的骨诱导因子作为阳性对照组。实验组5植入骨自体移植的单一植入物。自体移植物是采集自自体移植实验组动物中的髂骨崤。使用骨钳将该骨粉碎颗粒化，并将5.0g的自体移植骨用于融合的每一侧。该切口以2-0可吸收缝线缝合，而皮肤以3-0缝线缝合。表8^h.p.:同型二聚体蛋白。及分别为商售骨移植物及骨填补材。实验组1至4中所使用的β-TCP是2-4mm颗粒的型式，其具有70％的孔隙率及50-350μm的孔径日本，SuperporeTM公司，pentax陶瓷人工骨系列，「HOYA」人工骨替代物。于某些实施方案中，实验组1至4中所使用的β-TCP为2-8mm的颗粒型式，其孔隙率为65％或以上，孔径为250-730μm台湾微创医疗器材公司，「台微医」康骨益人工骨替代物。于实验组1中，通过将2ml注射用水加入至具有10mg同型二聚体蛋白的每一个小瓶中，以制备包含Rcp即SEQIDNO：260的同型二聚体蛋白储备溶液H。该储备溶液H与体积比为3：1的注射用水混合，形成同型二聚体蛋白高剂量溶液HomodimericProteinHighDoseSolution，于2.8ml溶液中含有10.5mg同型二聚体蛋白。2.8ml同型二聚体蛋白高剂量溶液是通过均匀滴入至3.5gβ-TCP颗粒来递送。于实验组2中，通过将4ml注射用水加入至具有10mg同型二聚体蛋白的每一个小瓶中，以制备同型二聚体蛋白储备溶液ML2.5mgml。该储备溶液ML与体积比为1：1的注射用水混合，形成同型二聚体蛋白中剂量溶液homodimericproteinMiddleDoseSolution，于2.8ml溶液中含有3.5mg同型二聚体蛋白。2.8ml同型二聚体蛋白中剂量溶液是通过均匀滴入至3.5gβ-TCP颗粒来递送。于实验组3中，通过将4ml注射用水加入至具有10mg同型二聚体蛋白的每一个小瓶中，以制备同型二聚体蛋白储备溶液ML2.5mgml。该储备溶液ML与体积比为17：3的注射用水混合，形成同型二聚体蛋白低剂量溶液homodimericproteinLowDoseSolution，于2.8ml溶液中含有1.05mg同型二聚体蛋白。2.8ml同型二聚体蛋白低剂量溶液是通过均匀滴入至3.5gβ-TCP颗粒来递送。实验组6是以和作为移植材料进行商售产品的比较，两者皆是由美敦力Medtronic公司分销。是由以CHO表达系统所制备的rh-BMP-2以及可吸收胶原海绵「ACS」所组成。是颗粒状磷酸钙骨替代物，其是由85％的β-TCP及15％的羟磷石灰Hydroxyapatite所组成。将及结合应用于后外侧腰椎融合已显示具有疗效，其是由E.Dawson等人以证据强度2的临床研究报导骨关节外科手术期刊JBoneJointSurgAm.2009；91:1604-13。用于实验组6的移植材料是由每一部位3.15mg的rh-BMP-2、4cc的ACS、及5cc的所组成，移植材料的制备步骤是依照E.Dawson的报告。手术记录中记录和的批号。在手术后的首7日，每日监测该动物，并在每只动物的手术后监测表上记录观察结果。于4周时拍摄所有动物前后方向的放射线摄影。以Zoletil8-12mgkg，肌肉注射及异氟烷2％和氧气每分钟2公升放气，使动物镇静。该放射线摄影是用于比较术后X光是否有新骨出现以及TCP材料的吸收。于手术后12周，以致死心脏注射Lethobarb牺牲所有动物。为监测骨形成的时间，如下表9所示，于三个不同的时间点静脉内注射三种不同的荧光染料。表9：荧光染料使用的日期和剂量**使用前通过0.22μm过滤器全部过滤X光评估收获腰椎L1-L6，并用数字相机拍摄照片。使用机器将收获的脊椎造影设定24kV，45秒。拍摄后前侧posterior-anterior，PA的数字放射线摄影，由三位不知情的盲试观察员在右侧和左侧对新骨形成和融合进行分级。使用定性分级系统以评估该放射线摄影表10。融合的评估是基于从一横突至次节的骨的连续性0＝不连续，1-为连续。基于表10中概述的百分比对融合块每侧上横突间的骨量进行分级。基于与具有相同材料量的0时0time放射线摄影进行比较，以记录TCP再吸收的量。表10：放射线摄影分级参数所有动物的后前侧放射线摄影于术后、4周、及12周拍摄。每一实验组的代表性X光如图4至9所示。实验组1、2、3、4、5、及6的术后X光显示颗粒明显。于第4周的时间点，实验组1及实验组2有些可见的颗粒，可以注意到其存在。实验组3及实验组4的颗粒较多，实验组6清楚的显示剩余的粒子或颗粒。于第12周时，实验组1、实验组2、及实验组3已无法从骨中分辨出粒子或颗粒。实验组4显示少量的骨形成，且没有清晰可见的颗粒。实验组6于12周时颗粒仍然明显。3位盲试观察员进行放射线摄影评估。分级是由融合的二项式评估及融合块内存在骨量的5及评估所组成。结果如表11所示。首先计算每只动物的各级平均值，接着计算各实验组的平均值及标准偏差。表11：显示平均值和标准偏差的分级汇总结果[实施例11]-犬只节段性尺骨缺陷的体内研究在犬只节段性尺骨缺陷模型中，对于同型二聚体蛋白Hp的骨诱导活性进行评估，前述同型二聚体蛋白的骨诱导活性包括依据实施例6所制造的一重组多肽即SEQIDNO：260，包括分子内二硫键C44-C48及分子间C80-C112及C79-C114二硫键及作为载体材料的多孔β-磷酸三钙β-TCP。该磷酸钙载体如：β-TCP具有约0.7至约1.5的钙与磷酸盐比率，且β-TCP孔隙率是大于70％、孔径为约300-600μm。实验设计本研究的方案是经日本兽医与生命科学大学动物实验委员会批准。根据国家卫生研究院关于实验动物护理及使用的指导原则进行动物实验。于8犬只的15只前肢上创造2.5-cm临界尺寸的节段性尺骨缺陷。在所有案例中，手术切除的尺骨直径为7-8mm，截骨尺骨的体积是接近0.96-1.26cm3。于每个缺陷部位，植入带有同型二聚体蛋白的700mg人工骨β-TCP。同型二聚体蛋白的量0、35、140、560、或2240μg在5个实验组分别为对照组、Hp35组、Hp140组、Hp560组、及Hp2240组中各有不同。每一实验组是由3只前肢所组成。手术后每周进行一次放射线摄影检查，每4周进行一次计算机断层摄影CT检查。在另一个实施方案中，于每个缺陷部位，植入带有同型二聚体蛋白的800mg人工骨β-TCP。同型二聚体蛋白的量160、480、640、或1600μg在4个实验组分别为Hp160组、Hp480组、Hp640组、及Hp1600组中各有不同。每一实验组是由3只前肢所组成。手术后每周进行一次放射线摄影检查，每4周进行一次计算机断层摄影CT检查。制备植入材料植入材料是由同型二聚体蛋白及β-TCP日本，东京，HOYA公司所组成。冻干的同型二聚体蛋白粉于使用前在无菌蒸馏水日本，东京，大冢制药有限公司中还原。于植入前，将700mg的β-TCP约1.89ml在室温下以0.63ml蒸馏水浸泡15分钟，而前述蒸馏水是含有前述四种剂量同型二聚体蛋白的其中一种剂量的同型二聚体蛋白。作为对照组，是将700mg的β-TCP浸泡于0.63ml不含同型二聚体蛋白的蒸馏水中。β-TCP颗粒个体直径是2-4mm，且具有相互连接的多孔结构孔径50-300μm，孔隙率75％。此般颗粒尺寸对于操作和紧密植入而言是最为便利的。植入体积、β-TCP颗粒尺寸、及同型二聚体溶液体积是基于实验前进行的先期研究结果所作的选择。即使已确定β-TCP颗粒的最大植入体积是800mg，但由于个体间的差异性，本研究使用700mg的β-TCP。此外，先期研究的数据指出，1.0g的β-TCP颗粒可以吸收多达1.0ml的蒸馏水。为避免残液的累积，每1.0g的β-TCP颗粒使用0.9ml的同型二聚体蛋白溶液；因此，700mg的β-TCP颗粒是以0.63ml含有同型二聚体蛋白的蒸馏水处理。动物模型本研究中使用的所有8只犬均是体重为9.5-11.3公斤的健康雌性1岁的米格鲁犬beagle。经由静脉注射异丙酚7mgkg麻醉犬只；插管后，以含有异氟烷1.5-2％的氧气维持麻醉。于犬只全身麻醉的情况下，其前肢皆准备好并在无菌环境中覆布。纵向切开外侧皮肤，并分开外侧趾伸肌和尺骨外侧肌之间的软组织，以暴露尺骨和骨间韧带。使用摆式锯在骨间韧带远程创造2.5-cm节段性骨与骨膜缺陷。完全移除骨缺陷周围的骨膜，接着将β-TCP颗粒紧密植入。该缺陷的纵向长度约为垂直长度的3倍，并表现为无法自发性愈合的临界尺寸缺陷。在该β-TCP颗粒植入后，使用3-0可吸收单丝缝线缝合肌肉。使用3-0尼龙单丝缝线封闭皮肤。术前及术后皮下施予丁基原啡因0.02mgkg以维持手术全期的镇痛，其是手术后施予3日，每日施予两次。手术后7日，口服投予氨苄青霉素ampicillin25mgkg每日两次。X光及CT检查于手术前、手术后立即、及手术后12周内一周一次拍摄该犬前肢的侧视X光。将一铝板25mmx74mm与前肢一同暴露，以标准化每个X光影像中的放大比率及对比度差异。于中间区域测量再生骨的宽度。为量测再生骨的横截面积及矿物质密度，犬只是维持全身麻醉的情况下，于手术后立即、及手术后4、8、12周拍摄CT影像日本，栃木，东芝医疗系统ToshibaMedicalSystems公司，Asteion型。使用多平面重建Multiplanarreconstruction，MPR模式检查。于缺陷中重建25个1-mm厚的切片并正确对准，且第13个切片被定义为用以量测的中央切片目标。窗宽windowwidth及窗阶windowlevel设定为1500及300HUHounsfieldunits。通过手动围绕该再生骨的轮廓以量测其横截面积。使用定量计算机断层扫描QCT量测横向平面中的骨矿物质密度。QCT是采用容积法，其是估计每立方公分骨组织中羟磷石灰的毫克数。切片厚度保持在1mm，且校正假体calibrationphantom与前肢一起进行扫描。于再生骨及校准假体日本，京都，京都科学KyotoKagaku有限公司，B-MAS200型的中央，测定感兴趣的特定区域regionofinterest，ROI，直径＝5.5mm中的CT数值平均HU，接着计算平均骨矿物质密度。结果以平均值标准偏差表示。使用双向重复测量ANOVA研究不同的同型二聚体蛋白剂量的处理效果；以Tukey–Kramer的事后比较检定posthoctests分析平均值间的差异。显著性定义为P5倍正常上限；最近5年具有恶性肿瘤、对于任何恶性肿瘤进行放射治疗、或化学疗法的病史；自体免疫疾病例如全身性红斑狼疮SystemicLupusErythematosus或皮肌炎dermatomyositis；先前暴露于rhBMP-2；对蛋白质药物过敏，例如：单克隆抗体、γ球蛋白、及磷酸三钙；植入手术的28天内用任何研究性疗法进行治疗；治疗使用强的松prednisone7天或更长时间6个月内累积剂量150mg或其他具有等效剂量的类固醇、降血钙素calcitonin，6个月内。治疗使用二磷酸酯类12个月内使用30天或更长时间、治疗剂量的氟化物12个月内使用30天；哺乳期的女性受试者；及基于医生的判断，不适合参与本研究的任何病症。疗效评估初级终点：初级研究的疗效终点是在确定伤口闭合后30周内接受次级介入的受试者的比例。次级终点：确定伤口闭合后的术后第6周、第12周、第18周、第24周、第42周、和第52周接受次级介入的受试者比例；从确定伤口闭合到次级介入的时间；确定伤口闭合后的术后第6周、第12周、第18周、第24周、第30周、第42周、和第52周临床骨折愈合的比率；从确定伤口闭合至临床骨折愈合的时间；确定伤口闭合后的术后第6周、第12周、第18周、第24周、第30周、第42周、和第52周放射线摄影愈合的比率；从确定伤口闭合至放射线摄影愈合的时间；用语「次级介入」是指与进行或任何发生可能刺激骨折愈合的事件的任何程序有关，其包括但不限于：骨移植、交换钉、板固定、钉动力化、超声波、电刺激、或磁场刺激或其他可能促进愈合的事。用语「临床骨折愈合」是指从骨折部位的人工触诊没有压痛出现。在一些实施方案中，用语「临床骨折愈合」是指在完全负重的骨折部位无疼痛或轻微疼痛疼痛评分0-3，使用视觉仿真量表记录疼痛评分。用语「放射线摄影骨折愈合」是指考虑到前后位片和侧位片的放射线摄影，研究者和或个别的放射科医师鉴定到皮质层桥接及或骨折部位处4个皮质的3个皮质上的骨折线消失的情形。方法评估安全评估方法不良反应Adverseeffect，AE：类型、严重程度、管理和结果。系统性AE：不论因果关系如何，在治疗后发生或恶化的任何系统征兆、症状、疾病、实验室测试结果、放射线摄影发现、或生理学观察。局部AE：包括炎症、感染任何疑似或确诊为伴有软组织或骨的浅层或深层感染、伴随或不伴随细菌学确认、硬件故障、疼痛新增或提高、外周水肿、异位骨化软组织钙化、及与伤口愈合有关的并发症。疗效评估方法初级疗效结果和次级疗效结果基于全分析集FullAnalysisSet，FAS群体和符合方案集PerProtocol，PP群体进行分析。初级分析将于FAS群体中进行。初级疗效终点是在确定伤口闭合后30周内接受次级介入的受试者的比例。使用Cochran-Armitage趋势测试对FAS群体进行初级分析，以指出随着同型二聚体蛋白剂量增加的反应率的线性趋势。对初级疗效终点以PP群体进行支持性分析。此外，次级疗效终点分析或总结如下：确定伤口闭合后30周内放射线摄影骨折愈合的受试者比例及临床骨折愈合的受试者比例，将使用Cochran-Armitage趋势测试个别进行比较，以指出随着同型二聚体蛋白剂量增加的反应率的线性趋势。从确定伤口闭合到次级介入的时间评估、从确定伤口闭合到临床骨折愈合的时间评估、以及从确定伤口闭合到放射线摄影骨折愈合的时间评估，将通过使用描述性统计学平均值mean、标准偏差SD按照组别个别概述。在确定伤口闭合后的术后第6周、第12周、第18周、第24周、第42周、和第52周内，接受次级介入的受试者的比例、临床骨折愈合的受试者比例、和放射线摄影骨折愈合的受试者比例将通过使用描述性统计学n、％按照组别个别概述。如果适用，每组95％置信区间CI将基于Clopper-Pearson置信区间估计法计算单一二项式比例。研究设计2一项随机、评估者-盲试、对照的研究，调查三个剂量等级同型二聚体蛋白Hp的安全性和疗效，该同型二聚体蛋白是包括根据实施例6即，SEQIDNO：260所制造的重组多肽β-TCP结合器cage及后侧辅助固定，于患有单节段L1至S1之间退化性椎间盘疾病degenerativediskdisease，DDD使用后侧开放法以腰椎椎体间融合的病患之中。将24名受试者随机分配1：1：1：1至4组1个对照组及3个不同剂量组，用于治疗每组的临床试验研究用装置如下：对照组6名受试者：标准护理后侧开放法以伴随器使用的腰椎椎体间融合术加上自体骨移植植入有或无β-TCP；1mgHp部位6名受试者：每个部位site以标准护理加1mg同型二聚体蛋白；2mgHp部位6名受试者：每个部位以标准护理加2mg同型二聚体蛋白；及3mgHp部位6名受试者：每个部位以标准护理加3mg同型二聚体蛋白。同型二聚体蛋白将以5.5mgHp瓶的冻干粉末与水一起供应于注射。还原后，该同型二聚体蛋白将与β-TCP混合，最终浓度为1mgHp部位、2mgHp部位、或3mgHp部位。然后将特定量的混合物施加到器中，特定量是取决于所使用器的大小。在三种不同浓度的储备溶液中还原同型二聚体蛋白用于获得预期浓度的确切体积将在表18中说明，且在聚醚醚酮PEEK器Wiltrom股份有限公司xxx系列中各储备溶液中每0.24ml需要与β-TCP块0.3g混合。应用于DDD部位的同型二聚体蛋白最终浓度为：1.0mgHp部位、2.0mgHp部位、3.0mgHp部位。同型二聚体蛋白的储备溶液：5.5mg1.32ml＝4.2mgml；同型二聚体蛋白mg部位最终浓度为：4.2mgml×0.24ml＝1.0mg。表18自体移植物的来源可以是后上髂脊posteriorsuperioriliacspine，PSIS或从后椎板切除术获得的骨碎片。如果自体移植物量不足，自体移植物可与β-TCP混合。根据研究者的判断，可以在所有组别中使用单侧或双侧后外侧融合可以是单侧或双侧局部移植和后部辅助固定措施。手术前连续3天静脉注射万古霉素每6小时500mg。在24周的主要研究期间，将追踪受试者的疗效及安全性，且在指标手术后延长安全性追踪至24个月。在一些实施方案中，临床研究者和独立评估者将通过评估试验期间的放射线摄影结果来评估功效。纳入标准：若受试者适用以下「所有」的纳入标准，则纳入该名受试者：受试者≥20岁；在L1至S1间有单节段DDD显示出椎间盘源性背部疼痛、神经根压迫继发神经根病变或不伴神经根压迫的神经根病变表现、表现为腿部或臀部放射状疼痛病史、感觉异常、麻木、或无力、或有神经源性跛行病史；有放射学证据显示腰椎退化性疾病，如：椎间盘高度降低；髓鞘核突出；黄韧带、纤维环纤维化、或小关节囊肥大或增厚；小关节肥大、小关节间隙变窄、或小关节周围骨赘形成；三叶草椎管形状trefoilcanalshape；或侧面次关节狭窄；或椎体终板骨赘形成；并至少有下列之一：上方颅骨脊椎体在相较于下方尾骨脊椎体之前或后方的矢状面平移滑动大于4mm或角度大于10°、或上方颅骨脊椎体在相较于下方尾骨脊椎体的侧向的冠状面平移滑动大于4mm、或者腰椎管和或椎间孔狭窄狭窄症stenosis；对非手术性治疗无反应至少6个月；手术前72小时内非生育潜力的女性或在妊娠试验中具有阴性结果的女性、或男性；具有生育潜力的女性受试者即没有经过手术绝育或未经绝经后至少1年的女性和具有生育潜力的男性受试者的伴侣必须同意在整个研究期间使用医学上可接受的避孕方法。医学上可接受的避孕方法包括荷尔蒙贴布、植入或注射宫内节育器、或双重屏障法带有泡沫或阴道杀精子栓的保险套、带有杀精子的膈膜。完全禁欲可被认为是一种可接受的避孕方法。在研究之前口服避孕药是一种可接受的避孕方法，但在研究期间需要另一种替代方法；若为女性，受试者是非哺乳期；愿意在参与任何研究相关程序之前提供签名知情同意书ICF，并在试验期限中遵守研究要求。排除标准：若受试者适用以下「任何」的排除标准，则排除该名受试者：大于等级1的脊髓滑脱症1Meyerding的分类；所涉及的节段有脊椎仪器植入或椎体间融合术病史、或于计划插入椎弓螺钉的节段有脊椎体骨折；确定的骨质软化症osteomalacia；过去5年有活性恶性肿瘤或前恶性肿瘤病史除原发性皮肤基底细胞癌和宫颈原位癌外；活性局部或全身性感染；总体肥胖，定义为BMI≥30；发烧38℃；精神上失能。若为可疑，则取得精神科咨询；Waddell非器质性体征≥3；酒精或药物滥用，定义为目前正在接受酒精及或药物滥用的治疗。酒精滥用是一种饮酒模式，会对健康、人际关系、或工作能力造成伤害；自身免疫性疾病例如：全身性红斑狼疮SLE或皮肌炎；对蛋白质药物过敏单克隆抗体或γ球蛋白；先前暴露于rhBMP-2；影响骨生成的内分泌或代谢疾病例如：甲状腺或副甲状腺低下或亢进、肾性骨病变renalosteodystrophy、艾登二氏症综合征Ehlers-Danlossyndrome、或成骨不全症；治疗使用强的松prednisone7天或更长时间6个月内累积剂量150mg或其他具有等效剂量的类固醇、降血钙素calcitonin，6个月内。治疗使用二磷酸酯类12个月内使用30天或更长时间、治疗剂量的氟化物12个月内使用30天、及在植入指定治疗之前30天内使用抗肿瘤、免疫刺激、或免疫抑制剂；植入手术的28天内用任何研究性疗法进行治疗；脊柱侧弯大于30度；受试者具有显著中枢神经系统CNS、心血管、肺、肝、肾、代谢、胃肠、泌尿、内分泌、或血液疾病的病史或临床表现；具有会妨碍本研究中治疗的安全性和疗效的准确临床评估的医学疾病或症状，例如：运动无力、感觉丧失、或会抑制正常步行或其他日常生活活动的痛苦状况；具有肾功能及或肝功能异常，并具有肌酸酐或ALT或AST值5倍正常上限；具有对PEEK过敏或不耐症的纪录；对万古霉素过敏allergy或过敏症hypersensitivity的病史；根据医生的判断，任何不适合受试者参加研究的情况。计划研究时间：筛选期：14天。确保受试者已经签署了ICF并评估该受试者是否符合研究条件。所述评估包括体格检查、生命征象、心电图、血液或尿液妊娠试验、实验室检验、术前临床和放射性评估。应收集人口统计学、病史、伴随用药和不良事件等资料。治疗期：1天。检查受试者是否符合研究条件，取得基线样本数据并管理研究结果。所述评估包括体格检查、生命征象和放射检查。应收集手术信息、伴随用药和不良事件等数据。追踪期：在24周的主要研究期间追踪受试者，且在植入后延长安全性追踪至24个月。在治疗后第6周、第12周、第18周、第24周、第12个月、第18个月、第24个月进行评估。所述评估包括伴随治疗、体格检查、实验室评估、生命征象和放射线摄影检查前视后视及侧视、屈曲延伸片。在第24周和第24个月进行高分辨率薄层CT扫描1mm切片，轴向矢状和冠状重塑指标为1mm。疗效评估初级终点：初级研究的疗效终点是术后第24周具有融合成功的受试者比例。次级终点：在术后第12个月、第18个月、及第24个月具有融合成功的受试者比例。从基线到放射线摄影融合的时间。在术后第24周、第12个月、第18个月、及第24个月内进行额外手术介入的受试者比例；记录手术时间从皮肤切口到伤口闭合、失血手术过程中和住院时间。在术后第24周、第12个月、第18个月、及第24个月Oswestry功能障碍指数OswestryDisabilityIndex，ODI的成功率；ODI问卷用于评估患者背部功能。ODI得分介于0-100之间。最好的分数是0没有失能，最差的分数是100最大失能。ODI成功率报告为受试者其ODI得分的百分比达到：术前得分-术后得分≥15。在术后第24周、第12个月、第18个月、及第24个月，视觉模拟量表VisualAnalogousScale，VAS的成功率得到改善。背部疼痛成功率报告为受试者其背部疼痛改善的百分比达到：术前得分-术后得分0。腿部疼痛成功率报告为受试者腿部疼痛改善的百分比达到：术前得分-术后得分0。疗效分析初级疗效结果和次级疗效结果将基于全分析集FullAnalysisSet，FAS群体和符合方案集PerProtocol，PP群体进行分析。初级分析将于FAS群体中进行。初级研究的疗效终点是术后第24周具有融合成功的受试者比例。使用Cochran-Armitage趋势测试对FAS群体进行初级分析，以指出随着同型二聚体蛋白剂量增加的反应率的线性趋势。对初级疗效终点以PP群体进行支持性分析。此外，次级疗效终点分析或总结如下：在术后第12个月、第18个月、及第24个月具有融合成功的受试者比例，以及在术后第24周、第12个月、第18个月、及第24个月内进行额外手术介入的受试者比例，将使用Cochran-Armitage趋势测试个别进行比较，以指出随着同型二聚体蛋白剂量增加的反应率的线性趋势。从基线到放射线摄影融合的时间评估，将通过使用描述性统计学平均值mean、标准偏差SD按照组别概述。手术时间从皮肤切口到伤口闭合、失血手术过程中和住院时间的时间评估，将通过使用描述性统计学平均值mean、标准偏差SD按照组别个别概述。术后第24周、第12个月、第18个月、及第24个月的ODI成功率及术后第24周、第12个月、第18个月、及第24个月的VAS成功率将通过使用描述性统计学n、％按照组别个别概述。如果适用，每组95％置信区间CI将基于Clopper-Pearson置信区间估计法计算单一二项式比例。本发明不限于本文所述的具体实施例的范围。实际上，除了所描述的内容之外，对于本发明所属技术领域的技术人员根据先前描述及附图中显而易见的各种修饰。此般修饰意同落入所附申请专利范围的范畴中。其它实施方案在所附的权利要求书范围内。序列表博晟生医股份有限公司（BioGendTherapeuticsCo.,Ltd.）奧斯堤欧制药股份有限公司（OsteopharmaInc.）孙大伟（Sun,Da-Wei）重组多肽及其组合物及方法3902.001PC01US62440,6632016-12-30US62562,5152017-09-25357SIPOSequenceListing1.01875DNA人工序列artificialsequence卡那霉素抗性基因+3886to+4760片段1catgaacaataaaactgtctgcttacataaacagtaatacaaggggtgttatgagccata60ttcaacgggaaacgtcttgctctaggccgcgattaaattccaacatggatgctgatttat120atgggtataaatgggctcgcgataatgtcgggcaatcaggtgcgacaatctatcgattgt180atgggaagcccgatgcgccagagttgtttctgaaacatggcaaaggtagcgttgccaatg240atgttacagatgagatggtcagactaaactggctgacggaatttatgcctcttccgacca300tcaagcattttatccgtactcctgatgatgcatggttactcaccactgcgatccccggga360aaacagcattccaggtattagaagaatatcctgattcaggtgaaaatattgttgatgcgc420tggcagtgttcctgcgccggttgcattcgattcctgtttgtaattgtccttttaacagcg480atcgcgtatttcgtctcgctcaggcgcaatcacgaatgaataacggtttggttgatgcga540gtgattttgatgacgagcgtaatggctggcctgttgaacaagtctggaaagaaatgcata600aacttttgccattctcaccggattcagtcgtcactcatggtgatttctcacttgataacc660ttatttttgacgaggggaaattaataggttgtattgatgttggacgagtcggaatcgcag720accgataccaggatcttgccatcctatggaactgcctcggtgagttttctccttcattac780agaaacggctttttcaaaaatatggtattgataatcctgatatgaataaattgcagtttc840atttgatgctcgatgagtttttctaagaattaatt87521113DNA人工序列artificialsequence氨苄青霉素抗性基因+3587to+4699片段2catgagattatcaaaaaggatcttcacctagatccttttaaattaaaaatgaagttttaa60atcaatctaaagtatatatgagtaaacttggtctgacagttaccaatgcttaatcagtga120ggcacctatctcagcgatctgtctatttcgttcatccatagttgcctgactccccgtcgt180gtagataactacgatacgggagggcttaccatctggccccagtgctgcaatgataccgcg240agacccacgctcaccggctccagatttatcagcaataaaccagccagccggaagggccga300gcgcagaagtggtcctgcaactttatccgcctccatccagtctattaattgttgccggga360agctagagtaagtagttcgccagttaatagtttgcgcaacgttgttgccattgctacagg420catcgtggtgtcacgctcgtcgtttggtatggcttcattcagctccggttcccaacgatc480aaggcgagttacatgatcccccatgttgtgcaaaaaagcggttagctccttcggtcctcc540gatcgttgtcagaagtaagttggccgcagtgttatcactcatggttatggcagcactgca600taattctcttactgtcatgccatccgtaagatgcttttctgtgactggtgagtactcaac660caagtcattctgagaatagtgtatgcggcgaccgagttgctcttgcccggcgtcaatacg720ggataataccgcgccacatagcagaactttaaaagtgctcatcattggaaaacgttcttc780ggggcgaaaactctcaaggatcttaccgctgttgagatccagttcgatgtaacccactcg840tgcacccaactgatcttcagcatcttttactttcaccagcgtttctgggtgagcaaaaac900aggaaggcaaaatgccgcaaaaaagggaataagggcgacacggaaatgttgaatactcat960actcttcctttttcaatattattgaagcatttatcagggttattgtctcatgagcggata1020catatttgaatgtatttagaaaaataaacaaataggggttccgcgcacatttccccgaaa1080agtgccacctgacgtctaagaaaccattattat111334513DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana3ctcgagaaatcataaaaaatttatttgctttgtgagcggataacaattataatagattca60attgtgagcggataacaatttcacacagaattcattaaagaggagaaattaactatgaga120ggatcgcatcaccatcaccatcacggatccgcatgcgagctcggtaccccgggtcgacct180gcagccaagcttaattagctgagcttggactcctgttgatagatccagtaatgacctcag240aactccatctggatttgttcagaacgctcggttgccgccgggcgttttttattggtgaga300atccaagctagcttggcgagattttcaggagctaaggaagctaaaatggagaaaaaaatc360actggatataccaccgttgatatatcccaatggcatcgtaaagaacattttgaggcattt420cagtcagttgctcaatgtacctataaccagaccgttcagctggatattacggccttttta480aagaccgtaaagaaaaataagcacaagttttatccggcctttattcacattcttgcccgc540ctgatgaatgctcatccggaatttcgtatggcaatgaaagacggtgagctggtgatatgg600gatagtgttcacccttgttacaccgttttccatgagcaaactgaaacgttttcatcgctc660tggagtgaataccacgacgatttccggcagtttctacacatatattcgcaagatgtggcg720tgttacggtgaaaacctggcctatttccctaaagggtttattgagaatatgtttttcgtc780tcagccaatccctgggtgagtttcaccagttttgatttaaacgtggccaatatggacaac840ttcttcgcccccgttttcaccatgggcaaatattatacgcaaggcgacaaggtgctgatg900ccgctggcgattcaggttcatcatgccgtttgtgatggcttccatgtcggcagaatgctt960aatgaattacaacagtactgcgatgagtggcagggcggggcgtaatttttttaaggcagt1020tattggtgcccttaaacgcctggggtaatgactctctagcttgaggcatcaaataaaacg1080aaaggctcagtcgaaagactgggcctttcgttttatctgttgtttgtcggtgaacgctct1140cctgagtaggacaaatccgccctctagattacgtgcagtcgatgataagctgtcaaacat1200gagaattgtgcctaatgagtgagctaacttacattaattgcgttgcgctcactgcccgct1260ttccagtcgggaaacctgtcgtgccagctgcattaatgaatcggccaacgcgcggggaga1320ggcggtttgcgtattgggcgccagggtggtttttcttttcaccagtgagacgggcaacag1380ctgattgcccttcaccgcctggccctgagagagttgcagcaagcggtccacgctggtttg1440ccccagcaggcgaaaatcctgtttgatggtggttaacggcgggatataacatgagctgtc1500ttcggtatcgtcgtatcccactaccgagatatccgcaccaacgcgcagcccggactcggt1560aatggcgcgcattgcgcccagcgccatctgatcgttggcaaccagcatcgcagtgggaac1620gatgccctcattcagcatttgcatggtttgttgaaaaccggacatggcactccagtcgcc1680ttcccgttccgctatcggctgaatttgattgcgagtgagatatttatgccagccagccag1740acgcagacgcgccgagacagaacttaatgggcccgctaacagcgcgatttgctggtgacc1800caatgcgaccagatgctccacgcccagtcgcgtaccgtcttcatgggagaaaataatact1860gttgatgggtgtctggtcagagacatcaagaaataacgccggaacattagtgcaggcagc1920ttccacagcaatggcatcctggtcatccagcggatagttaatgatcagcccactgacgcg1980ttgcgcgagaagattgtgcaccgccgctttacaggcttcgacgccgcttcgttctaccat2040cgacaccaccacgctggcacccagttgatcggcgcgagatttaatcgccgcgacaatttg2100cgacggcgcgtgcagggccagactggaggtggcaacgccaatcagcaacgactgtttgcc2160cgccagttgttgtgccacgcggttgggaatgtaattcagctccgccatcgccgcttccac2220tttttcccgcgttttcgcagaaacgtggctggcctggttcaccacgcgggaaacggtctg2280ataagagacaccggcatactctgcgacatcgtataacgttactggtttcacattcaccac2340cctgaattgactctcttccgggcgctatcatgccataccgcgaaaggttttgcaccattc2400gatggtgtcggaatttcgggcagcgttgggtcctggccacgggtgcgcatgatctagagc2460tgcctcgcgcgtttcggtgatgacggtgaaaacctctgacacatgcagctcccggagacg2520gtcacagcttgtctgtaagcggatgccgggagcagacaagcccgtcagggcgcgtcagcg2580ggtgttggcgggtgtcggggcgcagccatgacccagtcacgtagcgatagcggagtgtat2640actggcttaactatgcggcatcagagcagattgtactgagagtgcaccatatgcggtgtg2700aaataccgcacagatgcgtaaggagaaaataccgcatcaggcgctcttccgcttcctcgc2760tcactgactcgctgcgctcggtcgttcggctgcggcgagcggtatcagctcactcaaagg2820cggtaatacggttatccacagaatcaggggataacgcaggaaagaacatgtgagcaaaag2880gccagcaaaaggccaggaaccgtaaaaaggccgcgttgctggcgtttttccataggctcc2940gcccccctgacgagcatcacaaaaatcgacgctcaagtcagaggtggcgaaacccgacag3000gactataaagataccaggcgtttccccctggaagctccctcgtgcgctctcctgttccga3060ccctgccgcttaccggatacctgtccgcctttctcccttcgggaagcgtggcgctttctc3120atagctcacgctgtaggtatctcagttcggtgtaggtcgttcgctccaagctgggctgtg3180tgcacgaaccccccgttcagcccgaccgctgcgccttatccggtaactatcgtcttgagt3240ccaacccggtaagacacgacttatcgccactggcagcagccactggtaacaggattagca3300gagcgaggtatgtaggcggtgctacagagttcttgaagtggtggcctaactacggctaca3360ctagaaggacagtatttggtatctgcgctctgctgaagccagttaccttcggaaaaagag3420ttggtagctcttgatccggcaaacaaaccaccgctggtagcggtggtttttttgtttgca3480agcagcagattacgcgcagaaaaaaaggatctcaagaagatcctttgatcttttctacgg3540ggtctgacgctcagtggaacgaaaactcacgttaagggattttggtcatgaattaattct3600tagaaaaactcatcgagcatcaaatgaaactgcaatttattcatatcaggattatcaata3660ccatatttttgaaaaagccgtttctgtaatgaaggagaaaactcaccgaggcagttccat3720aggatggcaagatcctggtatcggtctgcgattccgactcgtccaacatcaatacaacct3780attaatttcccctcgtcaaaaataaggttatcaagtgagaaatcaccatgagtgacgact3840gaatccggtgagaatggcaaaagtttatgcatttctttccagacttgttcaacaggccag3900ccattacgctcgtcatcaaaatcactcgcatcaaccaaaccgttattcattcgtgattgc3960gcctgagcgagacgaaatacgcgatcgctgttaaaaggacaattacaaacaggaatcgaa4020tgcaaccggcgcaggaacactgccagcgcatcaacaatattttcacctgaatcaggatat4080tcttctaatacctggaatgctgttttcccggggatcgcagtggtgagtaaccatgcatca4140tcaggagtacggataaaatgcttgatggtcggaagaggcataaattccgtcagccagttt4200agtctgaccatctcatctgtaacatcattggcaacgctacctttgccatgtttcagaaac4260aactctggcgcatcgggcttcccatacaatcgatagattgtcgcacctgattgcccgaca4320ttatcgcgagcccatttatacccatataaatcagcatccatgttggaatttaatcgcggc4380ctagagcaagacgtttcccgttgaatatggctcataacaccccttgtattactgtttatg4440taagcagacagttttattgttcatgacattaacctataaaaataggcgtatcacgaggcc4500ctttcgtcttcac45134273DNA智人Homosapiens4cgggagtgcatctactacaacgccaactgggagctggagcgcaccaaccagagcggcctg60gagcgctgcgaaggcgagcaggacaagcggctgcactgctacgcctcctggcgcaacagc120tctggcaccatcgagctcgtgaagaagggctgctggctagatgacttcaactgctacgat180aggcaggagtgtgtggccactgaggagaacccccaggtgtacttctgctgctgtgaaggc240aacttctgcaacgaacgcttcactcatttgcca273526DNA人工序列artificialsequence引物5cccgggacgggagtgcatctacaacg26630DNA人工序列artificialsequence引物6gtcgacttatggcaaatgagtgaagcgttc3071539DNA智人Homosapiens7atgacggcgccctgggtggccctcgccctcctctggggatcgctgtgcgccggctctggg60cgtggggaggctgagacacgggagtgcatctactacaacgccaactgggagctggagcgc120accaaccagagcggcctggagcgctgcgaaggcgagcaggacaagcggctgcactgctac180gcctcctggcgcaacagctctggcaccatcgagctcgtgaagaagggctgctggctagat240gacttcaactgctacgataggcaggagtgtgtggccactgaggagaacccccaggtgtac300ttctgctgctgtgaaggcaacttctgcaacgaacgcttcactcatttgccagaggctggg360ggcccggaagtcacgtacgagccacccccgacagcccccaccctgctcacggtgctggcc420tactcactgctgcccatcgggggcctttccctcatcgtcctgctggccttttggatgtac480cggcatcgcaagcccccctacggtcatgtggacatccatgaggaccctgggcctccacca540ccatcccctctggtgggcctgaagccactgcagctgctggagatcaaggctcgggggcgc600tttggctgtgtctggaaggcccagctcatgaatgactttgtagctgtcaagatcttccca660ctccaggacaagcagtcgtggcagagtgaacgggagatcttcagcacacctggcatgaag720cacgagaacctgctacagttcattgctgccgagaagcgaggctccaacctcgaagtagag780ctgtggctcatcacggccttccatgacaagggctccctcacggattacctcaaggggaac840atcatcacatggaacgaactgtgtcatgtagcagagacgatgtcacgaggcctctcatac900ctgcatgaggatgtgccctggtgccgtggcgagggccacaagccgtctattgcccacagg960gactttaaaagtaagaatgtattgctgaagagcgacctcacagccgtgctggctgacttt1020ggcttggctgttcgatttgagccagggaaacctccaggggacacccacggacaggtaggc1080acgagacggtacatggctcctgaggtgctcgagggagccatcaacttccagagagatgcc1140ttcctgcgcattgacatgtatgccatggggttggtgctgtgggagcttgtgtctcgctgc1200aaggctgcagacggacccgtggatgagtacatgctgccctttgaggaagagattggccag1260cacccttcgttggaggagctgcaggaggtggtggtgcacaagaagatgaggcccaccatt1320aaagatcactggttgaaacacccgggcctggcccagctttgtgtgaccatcgaggagtgc1380tgggaccatgatgcagaggctcgcttgtccgcgggctgtgtggaggagcgggtgtccctg1440attcggaggtcggtcaacggcactacctcggactgtctcgtttccctggtgacctctgtc1500accaatgtggacctgccccctaaagagtcaagcatctaa15398512PRT智人Homosapiens8MetThrAlaProTrpValAlaLeuAlaLeuLeuTrpGlySerLeuCys151015AlaGlySerGlyArgGlyGluAlaGluThrArgGluCysIleTyrTyr202530AsnAlaAsnTrpGluLeuGluArgThrAsnGlnSerGlyLeuGluArg354045CysGluGlyGluGlnAspLysArgLeuHisCysTyrAlaSerTrpArg505560AsnSerSerGlyThrIleGluLeuValLysLysGlyCysTrpLeuAsp65707580AspPheAsnCysTyrAspArgGlnGluCysValAlaThrGluGluAsn859095ProGlnValTyrPheCysCysCysGluGlyAsnPheCysAsnGluArg100105110PheThrHisLeuProGluAlaGlyGlyProGluValThrTyrGluPro115120125ProProThrAlaProThrLeuLeuThrValLeuAlaTyrSerLeuLeu130135140ProIleGlyGlyLeuSerLeuIleValLeuLeuAlaPheTrpMetTyr145150155160ArgHisArgLysProProTyrGlyHisValAspIleHisGluAspPro165170175GlyProProProProSerProLeuValGlyLeuLysProLeuGlnLeu180185190LeuGluIleLysAlaArgGlyArgPheGlyCysValTrpLysAlaGln195200205LeuMetAsnAspPheValAlaValLysIlePheProLeuGlnAspLys210215220GlnSerTrpGlnSerGluArgGluIlePheSerThrProGlyMetLys225230235240HisGluAsnLeuLeuGlnPheIleAlaAlaGluLysArgGlySerAsn245250255LeuGluValGluLeuTrpLeuIleThrAlaPheHisAspLysGlySer260265270LeuThrAspTyrLeuLysGlyAsnIleIleThrTrpAsnGluLeuCys275280285HisValAlaGluThrMetSerArgGlyLeuSerTyrLeuHisGluAsp290295300ValProTrpCysArgGlyGluGlyHisLysProSerIleAlaHisArg305310315320AspPheLysSerLysAsnValLeuLeuLysSerAspLeuThrAlaVal325330335LeuAlaAspPheGlyLeuAlaValArgPheGluProGlyLysProPro340345350GlyAspThrHisGlyGlnValGlyThrArgArgTyrMetAlaProGlu355360365ValLeuGluGlyAlaIleAsnPheGlnArgAspAlaPheLeuArgIle370375380AspMetTyrAlaMetGlyLeuValLeuTrpGluLeuValSerArgCys385390395400LysAlaAlaAspGlyProValAspGluTyrMetLeuProPheGluGlu405410415GluIleGlyGlnHisProSerLeuGluGluLeuGlnGluValValVal420425430HisLysLysMetArgProThrIleLysAspHisTrpLeuLysHisPro435440445GlyLeuAlaGlnLeuCysValThrIleGluGluCysTrpAspHisAsp450455460AlaGluAlaArgLeuSerAlaGlyCysValGluGluArgValSerLeu465470475480IleArgArgSerValAsnGlyThrThrSerAspCysLeuValSerLeu485490495ValThrSerValThrAsnValAspLeuProProLysGluSerSerIle500505510991PRT智人Homosapiens9ArgGluCysIleTyrTyrAsnAlaAsnTrpGluLeuGluArgThrAsn151015GlnSerGlyLeuGluArgCysGluGlyGluGlnAspLysArgLeuHis202530CysTyrAlaSerTrpArgAsnSerSerGlyThrIleGluLeuValLys354045LysGlyCysTrpLeuAspAspPheAsnCysTyrAspArgGlnGluCys505560ValAlaThrGluGluAsnProGlnValTyrPheCysCysCysGluGly65707580AsnPheCysAsnGluArgPheThrHisLeuPro85901018DNA人工序列artificialsequence引物10aataccactacaatggat181163DNA人工序列artificialsequencepACT2文库质粒插入11ggccaagccaaacgcaaagggtataaacgccttaagtccaaatgtaacatacaccctttg60tac631224DNA人工序列artificialsequence引物12ttaaccatgggccaagccaaacgc241329DNA人工序列artificialsequence引物13ggatccttagtacaaagggtgtatgttac2914150DNA人工序列artificialsequencepACT2文库质粒插入14gtgagcttcaaagacattgggtggaatgaccatgctagcagccagccggggtatcacgcc60cgtccctgccacggacaatgccagaatattctggctgatcatctgaacgaagattgtcat120gccattgttcagctgaagccccgctctgtt1501525DNA人工序列artificialsequence引物15ttaaccatggtgagcttcaaagaca251629DNA人工序列artificialsequence引物16ggatccttaaacagagcggggcttcagct2917132DNA人工序列artificialsequencepACT2文库质粒插入17atcgttgtggataataaggcatgctgtgtcccgacagaactcagtcttccccatccgctg60taccttgacgagaataaaaagcctgtatataagaactatcaggacgcgcttctgcatagt120tgtgggtgtcgc1321827DNA人工序列artificialsequence引物18ttaaccatgatcgttgtggataataag271929DNA人工序列artificialsequence引物19ggatccttagcgacacccacaactatgca292090DNA人工序列artificialsequencepACT2文库质粒插入20acgtatccagcctctccgaagccgatgaggtggtcaatgcggagctgcgcgtgctgcgcc60ggaggtctccggaaccagacagggacagtg902127DNA人工序列artificialsequence引物21ttaaccatgacgtatccagcctctccg272229DNA人工序列artificialsequence引物22ggatccttacactgtccctgtctggttcc2923120DNA人工序列artificialsequencepACT2文库质粒插入23gagcccctgggcggcgcgcgctgggaagcgttcgacgtgacggacgcggtgcagagccac60cgccgctggccgcgagcctcccgcaagtgctgcctggtgctgcgcgcggtgacggcctcg1202426DNA人工序列artificialsequence引物24ttaaccatggagcccctgggcggcgc262529DNA人工序列artificialsequence引物25ggatccttacgaggccgtcaccgcgcgca2926174DNA人工序列artificialsequencepACT2文库质粒插入26actgcgctggctgggactcggggagcgcagggaagcggtggtggcggcggtggcggtggc60ggcggcggcggcggcggcggcggcggcggcggcggcgcaggcaggggccacgggcgcaga120ggccggagccgctgcagtcgcaagtcactgcacgtggactttaaggagctgggc1742726DNA人工序列artificialsequence引物27ttaaccatgactgcgctggctgggac262829DNA人工序列artificialsequence引物28ggatccttagcccagctccttaaagtcca292925DNA人工序列artificialsequence引物29gaattcattaaagaggagaaattaa253031DNA人工序列artificialsequence引物30ccggggtaccgagctcgcatgcggatcctta313127DNA人工序列artificialsequence引物31ctcgagaaatcataaaaaatttatttg273263DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物32gctcaagccaaacacaaagggtataaacgccttaagtccaattgtaaaaggcaccctttg60tac633321PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物33AlaGlnAlaLysHisLysGlyTyrLysArgLeuLysSerAsnCysLys151015ArgHisProLeuTyr203463DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物34ggccaagccaaacgcaaagggtataaacgccttaagtccagctgtaagagacaccctttg60tac633521PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物35GlyGlnAlaLysArgLysGlyTyrLysArgLeuLysSerSerCysLys151015ArgHisProLeuTyr203663DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物36gcccaagccaaacataaagggtataaacgccttaagtccagctgtaagagacaccctttg60tac633721PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物37AlaGlnAlaLysHisLysGlyTyrLysArgLeuLysSerSerCysLys151015ArgHisProLeuTyr203863DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物38gctcaagccaaacacaaacagcggaaacgccttaagtccagctgtaagagacaccctttg60tac633921PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物39AlaGlnAlaLysHisLysGlnArgLysArgLeuLysSerSerCysLys151015ArgHisProLeuTyr204063DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物40gctcaagccaaacacaaaggtcggaaacgccttaagtccagctgtaagagacaccctttg60tac634121PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物41AlaGlnAlaLysHisLysGlyArgLysArgLeuLysSerSerCysLys151015ArgHisProLeuTyr204263DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物42gctcaagccaaacacaaacagtacaaacgccttaagtccagctgtaagagacaccctttg60tac634321PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物43AlaGlnAlaLysHisLysGlnTyrLysArgLeuLysSerSerCysLys151015ArgHisProLeuTyr2044150DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物44gtggatttcaaggacgttgggtggaatgaccatgctgtggcaccgccggggtatcacgcc60ttctattgccacggagaatgcccgcatccactggctgatcatctgaactcagataaccat120gccattgttcagaccaaggttaattctgtt1504550PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物45ValAspPheLysAspValGlyTrpAsnAspHisAlaValAlaProPro151015GlyTyrHisAlaPheTyrCysHisGlyGluCysProHisProLeuAla202530AspHisLeuAsnSerAspAsnHisAlaIleValGlnThrLysValAsn354045SerVal5046150DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物46gtggatttcaaggacgttgggtggaatgaccatgctgtggcaccgccggggtatcacgcc60ttctattgccacggagaatgcccgttcccactggctgatcatctgaactcagataaccat120gccattgttcagaccaaggttaattctgtt1504750PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物47ValAspPheLysAspValGlyTrpAsnAspHisAlaValAlaProPro151015GlyTyrHisAlaPheTyrCysHisGlyGluCysProPheProLeuAla202530AspHisLeuAsnSerAspAsnHisAlaIleValGlnThrLysValAsn354045SerVal5048150DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物48gtggacttcagtgacgtggggtggaatgactggattgtggctcccccggggtatcacgcc60ttttactgccacggagaatgcccttttcctctggctgatcatctgaactccactaatcat120gccattgttcagacgttggtcaactctgtt1504950PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物49ValAspPheSerAspValGlyTrpAsnAspTrpIleValAlaProPro151015GlyTyrHisAlaPheTyrCysHisGlyGluCysProPheProLeuAla202530AspHisLeuAsnSerThrAsnHisAlaIleValGlnThrLeuValAsn354045SerVal5050150DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物50gtggatttcagcgacgttgggtggaatgactgggctgtggcaccgccggggtatcacgcc60ttctattgccacggagaatgcccgttcccactggctgatcatctgaactcagataaccat120gccattgttcagaccctcgttaattctgtt1505150PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物51ValAspPheSerAspValGlyTrpAsnAspTrpAlaValAlaProPro151015GlyTyrHisAlaPheTyrCysHisGlyGluCysProPheProLeuAla202530AspHisLeuAsnSerAspAsnHisAlaIleValGlnThrLeuValAsn354045SerVal5052150DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物52gtggatttcagcgacgttgggtggaatgactggatcgtggcaccgccggggtatcacgcc60ttctattgccacggagaatgcccgttcccactggctgatcatctgaactcagataaccat120gccattgttcagaccctcgttaattctgtt1505350PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物53ValAspPheSerAspValGlyTrpAsnAspTrpIleValAlaProPro151015GlyTyrHisAlaPheTyrCysHisGlyGluCysProPheProLeuAla202530AspHisLeuAsnSerAspAsnHisAlaIleValGlnThrLeuValAsn354045SerVal5054150DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物54gtggatttctctgacgttgggtggaatgaccatgctgtggcaccgccggggtatcacgcc60ttctattgccacggagaatgcccgttcccactggctgatcatctgaactcaacgaaccat120gccattgttcagacccttgttaattctgtt1505550PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物55ValAspPheSerAspValGlyTrpAsnAspHisAlaValAlaProPro151015GlyTyrHisAlaPheTyrCysHisGlyGluCysProPheProLeuAla202530AspHisLeuAsnSerThrAsnHisAlaIleValGlnThrLeuValAsn354045SerVal5056132DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物56aatagcaaagatcccaaggcatgctgtgtcccgacagaactcagtgcccccagcccgctg60taccttgacgagaatgagaagcctgtactcaagaactatcaggacatggtagtccatggg120tgtgggtgtcgc1325744PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物57AsnSerLysAspProLysAlaCysCysValProThrGluLeuSerAla151015ProSerProLeuTyrLeuAspGluAsnGluLysProValLeuLysAsn202530TyrGlnAspMetValValHisGlyCysGlyCysArg354058132DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物58aatagcaaaatccccaaggcatgctgtcagccgacagaactcagtgcccccagcccgctg60taccttgacgagaatgagaagcctgtactcaagaactatcaggacatggtagtcgaaggg120tgtgggtgtcgc1325944PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物59AsnSerLysIleProLysAlaCysCysGlnProThrGluLeuSerAla151015ProSerProLeuTyrLeuAspGluAsnGluLysProValLeuLysAsn202530TyrGlnAspMetValValGluGlyCysGlyCysArg354060132DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物60aactctaagattcctaaggcatgctgtgtcccgacagaactcagtgctatctcgatgctg60taccttgacgagaatgaaaaggttgtattaaagaactatcaggacatggttgtggagggt120tgtgggtgtcgc1326144PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物61AsnSerLysIleProLysAlaCysCysValProThrGluLeuSerAla151015IleSerMetLeuTyrLeuAspGluAsnGluLysValValLeuLysAsn202530TyrGlnAspMetValValGluGlyCysGlyCysArg354062132DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物62aatagcaaaatccccaaggcatgctgtgtcccgacagaactcagtgccataagcccgctg60taccttgacgagaatgagaaggtcgtactcaagaactatcaggacatggtagtccatggg120tgtgggtgtcgc1326344PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物63AsnSerLysIleProLysAlaCysCysValProThrGluLeuSerAla151015IleSerProLeuTyrLeuAspGluAsnGluLysValValLeuLysAsn202530TyrGlnAspMetValValHisGlyCysGlyCysArg354064132DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物64aatagcaaaatacccaaggcatgctgtgtcccgacagaactcagtgccattagcatgctg60taccttgacgagaatgagaagcctgtactcaagaactatcaggacatggtagtcgaaggg120tgtgggtgtcgc1326544PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物65AsnSerLysIleProLysAlaCysCysValProThrGluLeuSerAla151015IleSerMetLeuTyrLeuAspGluAsnGluLysProValLeuLysAsn202530TyrGlnAspMetValValGluGlyCysGlyCysArg354066132DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物66aatagcaaagatcccaaggcatgctgtgtcccgacagaactcagtgccataagcatgctg60taccttgacgagaatgagaaggtggtactcaagaactatcaggacatggtagtccatggg120tgtgggtgtcgc1326744PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物67AsnSerLysAspProLysAlaCysCysValProThrGluLeuSerAla151015IleSerMetLeuTyrLeuAspGluAsnGluLysValValLeuLysAsn202530TyrGlnAspMetValValHisGlyCysGlyCysArg35406890DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物68acgtatccagcctctccgaagccgatgaggcataaaatgcggagctgcgcgtgctgcgcc60ggaggtctccggaaccgaacagggacagtg906930PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物69ThrTyrProAlaSerProLysProMetArgHisLysMetArgSerCys151015AlaCysCysAlaGlyGlyLeuArgAsnArgThrGlyThrVal2025307090DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物70acgtatcccgcctctccgaagccgatgaggcattcaatgcggagctgcgcgtgctgcgcc60ggaggtctccggaaccagacagggacagtg907130PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物71ThrTyrProAlaSerProLysProMetArgHisSerMetArgSerCys151015AlaCysCysAlaGlyGlyLeuArgAsnGlnThrGlyThrVal2025307290DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物72acgtatccagcctctccgaagccgatgaggtggaagatgcggagctgcgcgtgctgcgcc60ggaggtctccggaaccggacagggacagtg907330PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物73ThrTyrProAlaSerProLysProMetArgTrpLysMetArgSerCys151015AlaCysCysAlaGlyGlyLeuArgAsnArgThrGlyThrVal20253074120DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物74gagcccctgggcggcgcgcgctgggaagcgttcgacgtgacggacgcggtgcagagccac60cgccgctcgccacgagcctcccgcaagtgctgcctggggctgcgcgcggtgacggcctcg1207540PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物75GluProLeuGlyGlyAlaArgTrpGluAlaPheAspValThrAspAla151015ValGlnSerHisArgArgSerProArgAlaSerArgLysCysCysLeu202530GlyLeuArgAlaValThrAlaSer354076120DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物76gagcccctgggcggcgcgcgctgggaagcgttcgacgtgacggacgcggtgcagagccac60cgccgctcgcagcgagcctcccgcaagtgctgcctggttctgcgcgcggtgacggcctcg1207740PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物77GluProLeuGlyGlyAlaArgTrpGluAlaPheAspValThrAspAla151015ValGlnSerHisArgArgSerGlnArgAlaSerArgLysCysCysLeu202530ValLeuArgAlaValThrAlaSer354078174DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物78accgccctagatgggactcggggagcgcagggaagcggtggtggcggcggtggcggtggc60ggcggcggcggcggcggcggcggcggcggcggcggcgcaggcaggggccacgggcgcaga120ggccggagccgctgcagtcgcaagtcactgcacgtggactttaaggagctgggc17479126DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物79gcccaagccaaacataaagggtataaacgccttaagtccagctgtaagagacaccctttg60tacgctcaagccaaacacaaaggtcggaaacgccttaagtccagctgtaagagacaccct120ttgtac1268042PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物80AlaGlnAlaLysHisLysGlyTyrLysArgLeuLysSerSerCysLys151015ArgHisProLeuTyrAlaGlnAlaLysHisLysGlyArgLysArgLeu202530LysSerSerCysLysArgHisProLeuTyr35408124DNA人工序列artificialsequence引物81ttaaccatggcccaagccaaacat248225DNA人工序列artificialsequence引物82gtttggcttgagcgtacaaagggtg258325DNA人工序列artificialsequence引物83caccctttgtacgctcaagccaaac258425DNA人工序列artificialsequence引物84ggatccttagtacaaagggtgtctc2585126DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物85gctcaagccaaacacaaaggtcggaaacgccttaagtccagctgtaagagacaccctttg60tacgcccaagccaaacataaagggtataaacgccttaagtccagctgtaagagacaccct120ttgtac1268642PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物86AlaGlnAlaLysHisLysGlyArgLysArgLeuLysSerSerCysLys151015ArgHisProLeuTyrAlaGlnAlaLysHisLysGlyTyrLysArgLeu202530LysSerSerCysLysArgHisProLeuTyr35408725DNA人工序列artificialsequence引物87ttaaccatggctcaagccaaacaca258825DNA人工序列artificialsequence引物88gtttggcttgggcgtacaaagggtg258925DNA人工序列artificialsequence引物89caccctttgtacgcccaagccaaac259025DNA人工序列artificialsequence引物90ggatccttagtacaaagggtgtctc2591300DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物91gtggatttcagcgacgttgggtggaatgactggatcgtggcaccgccggggtatcacgcc60ttctattgccacggagaatgcccgttcccactggctgatcatctgaactcagataaccat120gccattgttcagaccctcgttaattctgttgtggatttctctgacgttgggtggaatgac180catgctgtggcaccgccggggtatcacgccttctattgccacggagaatgcccgttccca240ctggctgatcatctgaactcaacgaaccatgccattgttcagacccttgttaattctgtt30092100PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物92ValAspPheSerAspValGlyTrpAsnAspTrpIleValAlaProPro151015GlyTyrHisAlaPheTyrCysHisGlyGluCysProPheProLeuAla202530AspHisLeuAsnSerAspAsnHisAlaIleValGlnThrLeuValAsn354045SerValValAspPheSerAspValGlyTrpAsnAspHisAlaValAla505560ProProGlyTyrHisAlaPheTyrCysHisGlyGluCysProPhePro65707580LeuAlaAspHisLeuAsnSerThrAsnHisAlaIleValGlnThrLeu859095ValAsnSerVal1009325DNA人工序列artificialsequence引物93ttaaccatggtggatttcagcgacg259425DNA人工序列artificialsequence引物94cagagaaatccacaacagaattaac259525DNA人工序列artificialsequence引物95gttaattctgttgtggatttctctg259625DNA人工序列artificialsequence引物96ggatccttaaacagaattaacaagg2597300DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物97gtggatttctctgacgttgggtggaatgaccatgctgtggcaccgccggggtatcacgcc60ttctattgccacggagaatgcccgttcccactggctgatcatctgaactcaacgaaccat120gccattgttcagacccttgttaattctgttgtggatttcagcgacgttgggtggaatgac180tggatcgtggcaccgccggggtatcacgccttctattgccacggagaatgcccgttccca240ctggctgatcatctgaactcagataaccatgccattgttcagaccctcgttaattctgtt30098100PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物98ValAspPheSerAspValGlyTrpAsnAspHisAlaValAlaProPro151015GlyTyrHisAlaPheTyrCysHisGlyGluCysProPheProLeuAla202530AspHisLeuAsnSerThrAsnHisAlaIleValGlnThrLeuValAsn354045SerValValAspPheSerAspValGlyTrpAsnAspTrpIleValAla505560ProProGlyTyrHisAlaPheTyrCysHisGlyGluCysProPhePro65707580LeuAlaAspHisLeuAsnSerAspAsnHisAlaIleValGlnThrLeu859095ValAsnSerVal1009925DNA人工序列artificialsequence引物99ttaaccatggtggatttctctgacg2510025DNA人工序列artificialsequence引物100cgctgaaatccacaacagaattaac2510125DNA人工序列artificialsequence引物101gttaattctgttgtggatttcagcg2510225DNA人工序列artificialsequence引物102ggatccttaaacagaattaacgagg25103264DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物103aatagcaaaatacccaaggcatgctgtgtcccgacagaactcagtgccattagcatgctg60taccttgacgagaatgagaagcctgtactcaagaactatcaggacatggtagtcgaaggg120tgtgggtgtcgcaatagcaaagatcccaaggcatgctgtgtcccgacagaactcagtgcc180ataagcatgctgtaccttgacgagaatgagaaggtggtactcaagaactatcaggacatg240gtagtccatgggtgtgggtgtcgc26410488PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物104AsnSerLysIleProLysAlaCysCysValProThrGluLeuSerAla151015IleSerMetLeuTyrLeuAspGluAsnGluLysProValLeuLysAsn202530TyrGlnAspMetValValGluGlyCysGlyCysArgAsnSerLysAsp354045ProLysAlaCysCysValProThrGluLeuSerAlaIleSerMetLeu505560TyrLeuAspGluAsnGluLysValValLeuLysAsnTyrGlnAspMet65707580ValValHisGlyCysGlyCysArg8510525DNA人工序列artificialsequence引物105ttaaccatgaatagcaaaataccca2510626DNA人工序列artificialsequence引物106gatctttgctattgcgacacccacac2610726DNA人工序列artificialsequence引物107gtgtgggtgtcgcaatagcaaagatc2610825DNA人工序列artificialsequence引物108ggatccttacgacacccacacccat25109264DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物109aatagcaaagatcccaaggcatgctgtgtcccgacagaactcagtgccataagcatgctg60taccttgacgagaatgagaaggtggtactcaagaactatcaggacatggtagtccatggg120tgtgggtgtcgcaatagcaaaatacccaaggcatgctgtgtcccgacagaactcagtgcc180attagcatgctgtaccttgacgagaatgagaagcctgtactcaagaactatcaggacatg240gtagtcgaagggtgtgggtgtcgc26411088PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物110AsnSerLysAspProLysAlaCysCysValProThrGluLeuSerAla151015IleSerMetLeuTyrLeuAspGluAsnGluLysValValLeuLysAsn202530TyrGlnAspMetValValHisGlyCysGlyCysArgAsnSerLysIle354045ProLysAlaCysCysValProThrGluLeuSerAlaIleSerMetLeu505560TyrLeuAspGluAsnGluLysProValLeuLysAsnTyrGlnAspMet65707580ValValGluGlyCysGlyCysArg8511125DNA人工序列artificialsequence引物111ttaaccatgaatagcaaagatccca2511226DNA人工序列artificialsequence引物112gtattttgctattgcgacacccacac2611326DNA人工序列artificialsequence引物113gtgtgggtgtcgcaatagcaaaatac2611425DNA人工序列artificialsequence引物114ggatccttagcgacacccacaccct25115153DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物115gctcaagccaaacacaaacagtacaaacgccttaagtccagctgtaagagacaccctttg60tacacgtatccagcctctccgaagccgatgaggcataaaatgcggagctgcgcgtgctgc120gccggaggtctccggaaccgaacagggacagtg15311651PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物116AlaGlnAlaLysHisLysGlnTyrLysArgLeuLysSerSerCysLys151015ArgHisProLeuTyrThrTyrProAlaSerProLysProMetArgHis202530LysMetArgSerCysAlaCysCysAlaGlyGlyLeuArgAsnArgThr354045GlyThrVal5011726DNA人工序列artificialsequence引物117ttaaccatggctcaagccaaacacaa2611826DNA人工序列artificialsequence引物118gaggctggatacgtgtacaaagggtg2611926DNA人工序列artificialsequence引物119caccctttgtacacgtatccagcctc2612025DNA人工序列artificialsequence引物120ggatccttacactgtccctgttcgg25121153DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物121acgtatccagcctctccgaagccgatgaggcataaaatgcggagctgcgcgtgctgcgcc60ggaggtctccggaaccgaacagggacagtggctcaagccaaacacaaacagtacaaacgc120cttaagtccagctgtaagagacaccctttgtac15312251PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物122ThrTyrProAlaSerProLysProMetArgHisLysMetArgSerCys151015AlaCysCysAlaGlyGlyLeuArgAsnArgThrGlyThrValAlaGln202530AlaLysHisLysGlnTyrLysArgLeuLysSerSerCysLysArgHis354045ProLeuTyr5012326DNA人工序列artificialsequence引物123ttaaccatgacgtatccagcctctcc2612427DNA人工序列artificialsequence引物124gtttggcttgagccactgtccctgttc2712527DNA人工序列artificialsequence引物125gaacagggacagtggctcaagccaaac2712625DNA人工序列artificialsequence引物126ggatccttagtacaaagggtgtctc25127240DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物127gtggatttcagcgacgttgggtggaatgactgggctgtggcaccgccggggtatcacgcc60ttctattgccacggagaatgcccgttcccactggctgatcatctgaactcagataaccat120gccattgttcagaccctcgttaattctgttacgtatcccgcctctccgaagccgatgagg180cattcaatgcggagctgcgcgtgctgcgccggaggtctccggaaccagacagggacagtg24012880PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物128ValAspPheSerAspValGlyTrpAsnAspTrpAlaValAlaProPro151015GlyTyrHisAlaPheTyrCysHisGlyGluCysProPheProLeuAla202530AspHisLeuAsnSerAspAsnHisAlaIleValGlnThrLeuValAsn354045SerValThrTyrProAlaSerProLysProMetArgHisSerMetArg505560SerCysAlaCysCysAlaGlyGlyLeuArgAsnGlnThrGlyThrVal6570758012925DNA人工序列artificialsequence引物129ttaaccatggtggatttcagcgacg2513025DNA人工序列artificialsequence引物130ggcgggatacgtaacagaattaacg2513125DNA人工序列artificialsequence引物131cgttaattctgttacgtatcccgcc2513225DNA人工序列artificialsequence引物132ggatccttacactgtccctgtctgg25133240DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物133acgtatcccgcctctccgaagccgatgaggcattcaatgcggagctgcgcgtgctgcgcc60ggaggtctccggaaccagacagggacagtggtggatttcagcgacgttgggtggaatgac120tgggctgtggcaccgccggggtatcacgccttctattgccacggagaatgcccgttccca180ctggctgatcatctgaactcagataaccatgccattgttcagaccctcgttaattctgtt24013480PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物134ThrTyrProAlaSerProLysProMetArgHisSerMetArgSerCys151015AlaCysCysAlaGlyGlyLeuArgAsnGlnThrGlyThrValValAsp202530PheSerAspValGlyTrpAsnAspTrpAlaValAlaProProGlyTyr354045HisAlaPheTyrCysHisGlyGluCysProPheProLeuAlaAspHis505560LeuAsnSerAspAsnHisAlaIleValGlnThrLeuValAsnSerVal6570758013526DNA人工序列artificialsequence引物135ttaaccatgacgtatcccgcctctcc2613626DNA人工序列artificialsequence引物136cgctgaaatccaccactgtccctgtc2613726DNA人工序列artificialsequence引物137gacagggacagtggtggatttcagcg2613826DNA人工序列artificialsequence引物138ggatccttaaacagaattaacgaggg26139183DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物139gctcaagccaaacacaaacagtacaaacgccttaagtccagctgtaagagacaccctttg60tacgagcccctgggcggcgcgcgctgggaagcgttcgacgtgacggacgcggtgcagagc120caccgccgctcgccacgagcctcccgcaagtgctgcctggggctgcgcgcggtgacggcc180tcg18314061PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物140AlaGlnAlaLysHisLysGlnTyrLysArgLeuLysSerSerCysLys151015ArgHisProLeuTyrGluProLeuGlyGlyAlaArgTrpGluAlaPhe202530AspValThrAspAlaValGlnSerHisArgArgSerProArgAlaSer354045ArgLysCysCysLeuGlyLeuArgAlaValThrAlaSer50556014128DNA人工序列artificialsequence引物141ttaaccatggctcaagccaaacacaaac2814228DNA人工序列artificialsequence引物142ccgcccaggggctcgtacaaagggtgtc2814328DNA人工序列artificialsequence引物143gacaccctttgtacgagcccctgggcgg2814428DNA人工序列artificialsequence引物144ggatccttacgaggccgtcaccgcgcgc28145183DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物145gagcccctgggcggcgcgcgctgggaagcgttcgacgtgacggacgcggtgcagagccac60cgccgctcgccacgagcctcccgcaagtgctgcctggggctgcgcgcggtgacggcctcg120gctcaagccaaacacaaacagtacaaacgccttaagtccagctgtaagagacaccctttg180tac18314661PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物146GluProLeuGlyGlyAlaArgTrpGluAlaPheAspValThrAspAla151015ValGlnSerHisArgArgSerProArgAlaSerArgLysCysCysLeu202530GlyLeuArgAlaValThrAlaSerAlaGlnAlaLysHisLysGlnTyr354045LysArgLeuLysSerSerCysLysArgHisProLeuTyr50556014725DNA人工序列artificialsequence引物147ttaaccatggagcccctgggcggcg2514825DNA人工序列artificialsequence引物148gtttggcttgagccgaggccgtcac2514925DNA人工序列artificialsequence引物149gtgacggcctcggctcaagccaaac2515025DNA人工序列artificialsequence引物150ggatccttagtacaaagggtgtctc25151270DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物151gtggatttcagcgacgttgggtggaatgactgggctgtggcaccgccggggtatcacgcc60ttctattgccacggagaatgcccgttcccactggctgatcatctgaactcagataaccat120gccattgttcagaccctcgttaattctgttgagcccctgggcggcgcgcgctgggaagcg180ttcgacgtgacggacgcggtgcagagccaccgccgctcgcagcgagcctcccgcaagtgc240tgcctggttctgcgcgcggtgacggcctcg27015290PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物152ValAspPheSerAspValGlyTrpAsnAspTrpAlaValAlaProPro151015GlyTyrHisAlaPheTyrCysHisGlyGluCysProPheProLeuAla202530AspHisLeuAsnSerAspAsnHisAlaIleValGlnThrLeuValAsn354045SerValGluProLeuGlyGlyAlaArgTrpGluAlaPheAspValThr505560AspAlaValGlnSerHisArgArgSerGlnArgAlaSerArgLysCys65707580CysLeuValLeuArgAlaValThrAlaSer859015325DNA人工序列artificialsequence引物153ttaaccatggtggatttcagcgacg2515425DNA人工序列artificialsequence引物154gcccaggggctcaacagaattaacg2515525DNA人工序列artificialsequence引物155cgttaattctgttgagcccctgggc2515625DNA人工序列artificialsequence引物156ggatccttacgaggccgtcaccgcg25157270DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物157gagcccctgggcggcgcgcgctgggaagcgttcgacgtgacggacgcggtgcagagccac60cgccgctcgcagcgagcctcccgcaagtgctgcctggttctgcgcgcggtgacggcctcg120gtggatttcagcgacgttgggtggaatgactgggctgtggcaccgccggggtatcacgcc180ttctattgccacggagaatgcccgttcccactggctgatcatctgaactcagataaccat240gccattgttcagaccctcgttaattctgtt27015890PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物158GluProLeuGlyGlyAlaArgTrpGluAlaPheAspValThrAspAla151015ValGlnSerHisArgArgSerGlnArgAlaSerArgLysCysCysLeu202530ValLeuArgAlaValThrAlaSerValAspPheSerAspValGlyTrp354045AsnAspTrpAlaValAlaProProGlyTyrHisAlaPheTyrCysHis505560GlyGluCysProPheProLeuAlaAspHisLeuAsnSerAspAsnHis65707580AlaIleValGlnThrLeuValAsnSerVal859015925DNA人工序列artificialsequence引物159ttaaccatggagcccctgggcggcg2516025DNA人工序列artificialsequence引物160gctgaaatccaccgaggccgtcacc2516125DNA人工序列artificialsequence引物161ggtgacggcctcggtggatttcagc2516225DNA人工序列artificialsequence引物162ggatccttaaacagaattaacgagg25163237DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物163accgccctagatgggactcggggagcgcagggaagcggtggtggcggcggtggcggtggc60ggcggcggcggcggcggcggcggcggcggcggcggcgcaggcaggggccacgggcgcaga120ggccggagccgctgcagtcgcaagtcactgcacgtggactttaaggagctgggcgctcaa180gccaaacacaaacagtacaaacgccttaagtccagctgtaagagacaccctttgtac23716479PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物164ThrAlaLeuAspGlyThrArgGlyAlaGlnGlySerGlyGlyGlyGly151015GlyGlyGlyGlyGlyGlyGlyGlyGlyGlyGlyGlyGlyGlyGlyGly202530AlaGlyArgGlyHisGlyArgArgGlyArgSerArgCysSerArgLys354045SerLeuHisValAspPheLysGluLeuGlyAlaGlnAlaLysHisLys505560GlnTyrLysArgLeuLysSerSerCysLysArgHisProLeuTyr65707516526DNA人工序列artificialsequence引物165ttaaccatgaccgccctagatgggac2616626DNA人工序列artificialsequence引物166gtttggcttgagcgcccagctcctta2616726DNA人工序列artificialsequence引物167taaggagctgggcgctcaagccaaac2616826DNA人工序列artificialsequence引物168ggatccttagtacaaagggtgtctct26169237DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物169gctcaagccaaacacaaacagtacaaacgccttaagtccagctgtaagagacaccctttg60tacaccgccctagatgggactcggggagcgcagggaagcggtggtggcggcggtggcggt120ggcggcggcggcggcggcggcggcggcggcggcggcggcgcaggcaggggccacgggcgc180agaggccggagccgctgcagtcgcaagtcactgcacgtggactttaaggagctgggc23717079PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物170AlaGlnAlaLysHisLysGlnTyrLysArgLeuLysSerSerCysLys151015ArgHisProLeuTyrThrAlaLeuAspGlyThrArgGlyAlaGlnGly202530SerGlyGlyGlyGlyGlyGlyGlyGlyGlyGlyGlyGlyGlyGlyGly354045GlyGlyGlyGlyGlyAlaGlyArgGlyHisGlyArgArgGlyArgSer505560ArgCysSerArgLysSerLeuHisValAspPheLysGluLeuGly65707517125DNA人工序列artificialsequence引物171ttaaccatggctcaagccaaacaca2517225DNA人工序列artificialsequence引物172catctagggcggtgtacaaagggtg2517325DNA人工序列artificialsequence引物173caccctttgtacaccgccctagatg2517425DNA人工序列artificialsequence引物174ggatccttagcccagctccttaaag25175324DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物175gtggatttcagcgacgttgggtggaatgactgggctgtggcaccgccggggtatcacgcc60ttctattgccacggagaatgcccgttcccactggctgatcatctgaactcagataaccat120gccattgttcagaccctcgttaattctgttaccgccctagatgggactcggggagcgcag180ggaagcggtggtggcggcggtggcggtggcggcggcggcggcggcggcggcggcggcggc240ggcggcgcaggcaggggccacgggcgcagaggccggagccgctgcagtcgcaagtcactg300cacgtggactttaaggagctgggc324176108PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物176ValAspPheSerAspValGlyTrpAsnAspTrpAlaValAlaProPro151015GlyTyrHisAlaPheTyrCysHisGlyGluCysProPheProLeuAla202530AspHisLeuAsnSerAspAsnHisAlaIleValGlnThrLeuValAsn354045SerValThrAlaLeuAspGlyThrArgGlyAlaGlnGlySerGlyGly505560GlyGlyGlyGlyGlyGlyGlyGlyGlyGlyGlyGlyGlyGlyGlyGly65707580GlyGlyAlaGlyArgGlyHisGlyArgArgGlyArgSerArgCysSer859095ArgLysSerLeuHisValAspPheLysGluLeuGly10010517725DNA人工序列artificialsequence引物177ttaaccatggtggatttcagcgacg2517825DNA人工序列artificialsequence引物178catctagggcggtaacagaattaac2517925DNA人工序列artificialsequence引物179gttaattctgttaccgccctagatg2518025DNA人工序列artificialsequence引物180ggatccttagcccagctccttaaag25181213DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物181gctcaagccaaacacaaacagtacaaacgccttaagtccagctgtaagagacaccctttg60tacgtggatttcagcgacgttgggtggaatgactgggctgtggcaccgccggggtatcac120gccttctattgccacggagaatgcccgttcccactggctgatcatctgaactcagataac180catgccattgttcagaccctcgttaattctgtt21318271PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物182AlaGlnAlaLysHisLysGlnTyrLysArgLeuLysSerSerCysLys151015ArgHisProLeuTyrValAspPheSerAspValGlyTrpAsnAspTrp202530AlaValAlaProProGlyTyrHisAlaPheTyrCysHisGlyGluCys354045ProPheProLeuAlaAspHisLeuAsnSerAspAsnHisAlaIleVal505560GlnThrLeuValAsnSerVal657018325DNA人工序列artificialsequence引物183ttaaccatggctcaagccaaacaca2518425DNA人工序列artificialsequence引物184cgctgaaatccacgtacaaagggtg2518525DNA人工序列artificialsequence引物185caccctttgtacgtggatttcagcg2518625DNA人工序列artificialsequence引物186ggatccttaaacagaattaacgagg25187213DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物187gctcaagccaaacacaaacagcggaaacgccttaagtccagctgtaagagacaccctttg60tacgtggacttcagtgacgtggggtggaatgactggattgtggctcccccggggtatcac120gccttttactgccacggagaatgcccttttcctctggctgatcatctgaactccactaat180catgccattgttcagacgttggtcaactctgtt21318871PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物188AlaGlnAlaLysHisLysGlnArgLysArgLeuLysSerSerCysLys151015ArgHisProLeuTyrValAspPheSerAspValGlyTrpAsnAspTrp202530IleValAlaProProGlyTyrHisAlaPheTyrCysHisGlyGluCys354045ProPheProLeuAlaAspHisLeuAsnSerThrAsnHisAlaIleVal505560GlnThrLeuValAsnSerVal657018925DNA人工序列artificialsequence引物189ttaaccatggctcaagccaaacaca2519025DNA人工序列artificialsequence引物190cactgaagtccacgtacaaagggtg2519125DNA人工序列artificialsequence引物191caccctttgtacgtggacttcagtg2519225DNA人工序列artificialsequence引物192ggatccttaaacagagttgaccaac25193213DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物193gtggacttcagtgacgtggggtggaatgactggattgtggctcccccggggtatcacgcc60ttttactgccacggagaatgcccttttcctctggctgatcatctgaactccactaatcat120gccattgttcagacgttggtcaactctgttgctcaagccaaacacaaacagcggaaacgc180cttaagtccagctgtaagagacaccctttgtac21319471PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物194ValAspPheSerAspValGlyTrpAsnAspTrpIleValAlaProPro151015GlyTyrHisAlaPheTyrCysHisGlyGluCysProPheProLeuAla202530AspHisLeuAsnSerThrAsnHisAlaIleValGlnThrLeuValAsn354045SerValAlaGlnAlaLysHisLysGlnArgLysArgLeuLysSerSer505560CysLysArgHisProLeuTyr657019525DNA人工序列artificialsequence引物195ttaaccatggtggacttcagtgacg2519625DNA人工序列artificialsequence引物196gtttggcttgagcaacagagttgac2519725DNA人工序列artificialsequence引物197gtcaactctgttgctcaagccaaac2519825DNA人工序列artificialsequence引物198ggatccttagtacaaagggtgtctc25199282DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物199gtggacttcagtgacgtggggtggaatgactggattgtggctcccccggggtatcacgcc60ttttactgccacggagaatgcccttttcctctggctgatcatctgaactccactaatcat120gccattgttcagacgttggtcaactctgttaactctaagattcctaaggcatgctgtgtc180ccgacagaactcagtgctatctcgatgctgtaccttgacgagaatgaaaaggttgtatta240aagaactatcaggacatggttgtggagggttgtgggtgtcgc28220094PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物200ValAspPheSerAspValGlyTrpAsnAspTrpIleValAlaProPro151015GlyTyrHisAlaPheTyrCysHisGlyGluCysProPheProLeuAla202530AspHisLeuAsnSerThrAsnHisAlaIleValGlnThrLeuValAsn354045SerValAsnSerLysIleProLysAlaCysCysValProThrGluLeu505560SerAlaIleSerMetLeuTyrLeuAspGluAsnGluLysValValLeu65707580LysAsnTyrGlnAspMetValValGluGlyCysGlyCysArg859020125DNA人工序列artificialsequence引物201ttaaccatggtggacttcagtgacg2520225DNA人工序列artificialsequence引物202gaatcttagagttaacagagttgac2520325DNA人工序列artificialsequence引物203gtcaactctgttaactctaagattc2520425DNA人工序列artificialsequence引物204ggatccttagcgacacccacaaccc25205282DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物205aactctaagattcctaaggcatgctgtgtcccgacagaactcagtgctatctcgatgctg60taccttgacgagaatgaaaaggttgtattaaagaactatcaggacatggttgtggagggt120tgtgggtgtcgcgtggacttcagtgacgtggggtggaatgactggattgtggctcccccg180gggtatcacgccttttactgccacggagaatgcccttttcctctggctgatcatctgaac240tccactaatcatgccattgttcagacgttggtcaactctgtt28220694PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物206AsnSerLysIleProLysAlaCysCysValProThrGluLeuSerAla151015IleSerMetLeuTyrLeuAspGluAsnGluLysValValLeuLysAsn202530TyrGlnAspMetValValGluGlyCysGlyCysArgValAspPheSer354045AspValGlyTrpAsnAspTrpIleValAlaProProGlyTyrHisAla505560PheTyrCysHisGlyGluCysProPheProLeuAlaAspHisLeuAsn65707580SerThrAsnHisAlaIleValGlnThrLeuValAsnSerVal859020725DNA人工序列artificialsequence引物207ttaaccatgaactctaagattccta2520825DNA人工序列artificialsequence引物208actgaagtccacgcgacacccacaa2520925DNA人工序列artificialsequence引物209ttgtgggtgtcgcgtggacttcagt2521025DNA人工序列artificialsequence引物210ggatccttaaacagagttgaccaac25211195DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物211aactctaagattcctaaggcatgctgtgtcccgacagaactcagtgctatctcgatgctg60taccttgacgagaatgaaaaggttgtattaaagaactatcaggacatggttgtggagggt120tgtgggtgtcgcgctcaagccaaacacaaacagcggaaacgccttaagtccagctgtaag180agacaccctttgtac19521265PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物212AsnSerLysIleProLysAlaCysCysValProThrGluLeuSerAla151015IleSerMetLeuTyrLeuAspGluAsnGluLysValValLeuLysAsn202530TyrGlnAspMetValValGluGlyCysGlyCysArgAlaGlnAlaLys354045HisLysGlnArgLysArgLeuLysSerSerCysLysArgHisProLeu505560Tyr6521325DNA人工序列artificialsequence引物213ttaaccatgaactctaagattccta2521425DNA人工序列artificialsequence引物214ttggcttgagcgcgacacccacaac2521525DNA人工序列artificialsequence引物215gttgtgggtgtcgcgctcaagccaa2521625DNA人工序列artificialsequence引物216ggatccttagtacaaagggtgtctc25217195DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物217gctcaagccaaacacaaacagcggaaacgccttaagtccagctgtaagagacaccctttg60tacaactctaagattcctaaggcatgctgtgtcccgacagaactcagtgctatctcgatg120ctgtaccttgacgagaatgaaaaggttgtattaaagaactatcaggacatggttgtggag180ggttgtgggtgtcgc19521865PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物218AlaGlnAlaLysHisLysGlnArgLysArgLeuLysSerSerCysLys151015ArgHisProLeuTyrAsnSerLysIleProLysAlaCysCysValPro202530ThrGluLeuSerAlaIleSerMetLeuTyrLeuAspGluAsnGluLys354045ValValLeuLysAsnTyrGlnAspMetValValGluGlyCysGlyCys505560Arg6521925DNA人工序列artificialsequence引物219ttaaccatggctcaagccaaacaca2522025DNA人工序列artificialsequence引物220gaatcttagagttgtacaaagggtg2522125DNA人工序列artificialsequence引物221caccctttgtacaactctaagattc2522225DNA人工序列artificialsequence引物222ggatccttagcgacacccacaaccc25223213DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物223ggccaagccaaacgcaaagggtataaacgccttaagtccagctgtaagagacaccctttg60tacgtggatttcaaggacgttgggtggaatgaccatgctgtggcaccgccggggtatcac120gccttctattgccacggagaatgcccgttcccactggctgatcatctgaactcagataac180catgccattgttcagaccaaggttaattctgtt21322471PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物224GlyGlnAlaLysArgLysGlyTyrLysArgLeuLysSerSerCysLys151015ArgHisProLeuTyrValAspPheLysAspValGlyTrpAsnAspHis202530AlaValAlaProProGlyTyrHisAlaPheTyrCysHisGlyGluCys354045ProPheProLeuAlaAspHisLeuAsnSerAspAsnHisAlaIleVal505560GlnThrLysValAsnSerVal657022525DNA人工序列artificialsequence引物225ttaaccatgggccaagccaaacgca2522625DNA人工序列artificialsequence引物226ccttgaaatccacgtacaaagggtg2522725DNA人工序列artificialsequence引物227caccctttgtacgtggatttcaagg2522825DNA人工序列artificialsequence引物228ggatccttaaacagaattaaccttg25229213DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物229gtggatttcaaggacgttgggtggaatgaccatgctgtggcaccgccggggtatcacgcc60ttctattgccacggagaatgcccgttcccactggctgatcatctgaactcagataaccat120gccattgttcagaccaaggttaattctgttggccaagccaaacgcaaagggtataaacgc180cttaagtccagctgtaagagacaccctttgtac21323071PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物230ValAspPheLysAspValGlyTrpAsnAspHisAlaValAlaProPro151015GlyTyrHisAlaPheTyrCysHisGlyGluCysProPheProLeuAla202530AspHisLeuAsnSerAspAsnHisAlaIleValGlnThrLysValAsn354045SerValGlyGlnAlaLysArgLysGlyTyrLysArgLeuLysSerSer505560CysLysArgHisProLeuTyr657023125DNA人工序列artificialsequence引物231ttaaccatggtggatttcaaggacg2523225DNA人工序列artificialsequence引物232gtttggcttggccaacagaattaac2523325DNA人工序列artificialsequence引物233gttaattctgttggccaagccaaac2523425DNA人工序列artificialsequence引物234ggatccttagtacaaagggtgtctc25235195DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物235aatagcaaagatcccaaggcatgctgtgtcccgacagaactcagtgcccccagcccgctg60taccttgacgagaatgagaagcctgtactcaagaactatcaggacatggtagtccatggg120tgtgggtgtcgcggccaagccaaacgcaaagggtataaacgccttaagtccagctgtaag180agacaccctttgtac19523665PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物236AsnSerLysAspProLysAlaCysCysValProThrGluLeuSerAla151015ProSerProLeuTyrLeuAspGluAsnGluLysProValLeuLysAsn202530TyrGlnAspMetValValHisGlyCysGlyCysArgGlyGlnAlaLys354045ArgLysGlyTyrLysArgLeuLysSerSerCysLysArgHisProLeu505560Tyr6523725DNA人工序列artificialsequence引物237ttaaccatgaatagcaaagatccca2523825DNA人工序列artificialsequence引物238ttggcttggccgcgacacccacacc2523925DNA人工序列artificialsequence引物239ggtgtgggtgtcgcggccaagccaa2524025DNA人工序列artificialsequence引物240ggatccttagtacaaagggtgtctc25241195DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物241ggccaagccaaacgcaaagggtataaacgccttaagtccagctgtaagagacaccctttg60tacaatagcaaagatcccaaggcatgctgtgtcccgacagaactcagtgcccccagcccg120ctgtaccttgacgagaatgagaagcctgtactcaagaactatcaggacatggtagtccat180gggtgtgggtgtcgc19524265PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物242GlyGlnAlaLysArgLysGlyTyrLysArgLeuLysSerSerCysLys151015ArgHisProLeuTyrAsnSerLysAspProLysAlaCysCysValPro202530ThrGluLeuSerAlaProSerProLeuTyrLeuAspGluAsnGluLys354045ProValLeuLysAsnTyrGlnAspMetValValHisGlyCysGlyCys505560Arg6524325DNA人工序列artificialsequence引物243ttaaccatgggccaagccaaacgca2524425DNA人工序列artificialsequence引物244gatctttgctattgtacaaagggtg2524525DNA人工序列artificialsequence引物245caccctttgtacaatagcaaagatc2524625DNA人工序列artificialsequence引物246ggatccttagcgacacccacaccca25247282DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物247aatagcaaagatcccaaggcatgctgtgtcccgacagaactcagtgcccccagcccgctg60taccttgacgagaatgagaagcctgtactcaagaactatcaggacatggtagtccatggg120tgtgggtgtcgcgtggatttcaaggacgttgggtggaatgaccatgctgtggcaccgccg180gggtatcacgccttctattgccacggagaatgcccgttcccactggctgatcatctgaac240tcagataaccatgccattgttcagaccaaggttaattctgtt28224894PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物248AsnSerLysAspProLysAlaCysCysValProThrGluLeuSerAla151015ProSerProLeuTyrLeuAspGluAsnGluLysProValLeuLysAsn202530TyrGlnAspMetValValHisGlyCysGlyCysArgValAspPheLys354045AspValGlyTrpAsnAspHisAlaValAlaProProGlyTyrHisAla505560PheTyrCysHisGlyGluCysProPheProLeuAlaAspHisLeuAsn65707580SerAspAsnHisAlaIleValGlnThrLysValAsnSerVal859024925DNA人工序列artificialsequence引物249ttaaccatgaatagcaaagatccca2525025DNA人工序列artificialsequence引物250cttgaaatccacgcgacacccacac2525125DNA人工序列artificialsequence引物251gtgtgggtgtcgcgtggatttcaag2525225DNA人工序列artificialsequence引物252ggatccttaaacagaattaaccttg25253282DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物253gtggatttcaaggacgttgggtggaatgaccatgctgtggcaccgccggggtatcacgcc60ttctattgccacggagaatgcccgttcccactggctgatcatctgaactcagataaccat120gccattgttcagaccaaggttaattctgttaatagcaaagatcccaaggcatgctgtgtc180ccgacagaactcagtgcccccagcccgctgtaccttgacgagaatgagaagcctgtactc240aagaactatcaggacatggtagtccatgggtgtgggtgtcgc28225494PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物254ValAspPheLysAspValGlyTrpAsnAspHisAlaValAlaProPro151015GlyTyrHisAlaPheTyrCysHisGlyGluCysProPheProLeuAla202530AspHisLeuAsnSerAspAsnHisAlaIleValGlnThrLysValAsn354045SerValAsnSerLysAspProLysAlaCysCysValProThrGluLeu505560SerAlaProSerProLeuTyrLeuAspGluAsnGluLysProValLeu65707580LysAsnTyrGlnAspMetValValHisGlyCysGlyCysArg859025525DNA人工序列artificialsequence引物255ttaaccatggtggatttcaaggacg2525625DNA人工序列artificialsequence引物256gatctttgctattaacagaattaac2525725DNA人工序列artificialsequence引物257gttaattctgttaatagcaaagatc2525825DNA人工序列artificialsequence引物258ggatccttagcgacacccacaccca25259345DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物259gctcaagccaaacacaaacagcggaaacgccttaagtccagctgtaagagacaccctttg60tacgtggacttcagtgacgtggggtggaatgactggattgtggctcccccggggtatcac120gccttttactgccacggagaatgcccttttcctctggctgatcatctgaactccactaat180catgccattgttcagacgttggtcaactctgttaactctaagattcctaaggcatgctgt240gtcccgacagaactcagtgctatctcgatgctgtaccttgacgagaatgaaaaggttgta300ttaaagaactatcaggacatggttgtggagggttgtgggtgtcgc345260115PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物260AlaGlnAlaLysHisLysGlnArgLysArgLeuLysSerSerCysLys151015ArgHisProLeuTyrValAspPheSerAspValGlyTrpAsnAspTrp202530IleValAlaProProGlyTyrHisAlaPheTyrCysHisGlyGluCys354045ProPheProLeuAlaAspHisLeuAsnSerThrAsnHisAlaIleVal505560GlnThrLeuValAsnSerValAsnSerLysIleProLysAlaCysCys65707580ValProThrGluLeuSerAlaIleSerMetLeuTyrLeuAspGluAsn859095GluLysValValLeuLysAsnTyrGlnAspMetValValGluGlyCys100105110GlyCysArg11526125DNA人工序列artificialsequence引物261ttaaccatggctcaagccaaacaca2526225DNA人工序列artificialsequence引物262cactgaagtccacgtacaaagggtg2526325DNA人工序列artificialsequence引物263caccctttgtacgtggacttcagtg2526425DNA人工序列artificialsequence引物264gaatcttagagttaacagagttgac2526525DNA人工序列artificialsequence引物265gtcaactctgttaactctaagattc2526625DNA人工序列artificialsequence引物266ggatccttagcgacacccacaaccc25267345DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物267gtggacttcagtgacgtggggtggaatgactggattgtggctcccccggggtatcacgcc60ttttactgccacggagaatgcccttttcctctggctgatcatctgaactccactaatcat120gccattgttcagacgttggtcaactctgttgctcaagccaaacacaaacagcggaaacgc180cttaagtccagctgtaagagacaccctttgtacaactctaagattcctaaggcatgctgt240gtcccgacagaactcagtgctatctcgatgctgtaccttgacgagaatgaaaaggttgta300ttaaagaactatcaggacatggttgtggagggttgtgggtgtcgc345268115PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物268ValAspPheSerAspValGlyTrpAsnAspTrpIleValAlaProPro151015GlyTyrHisAlaPheTyrCysHisGlyGluCysProPheProLeuAla202530AspHisLeuAsnSerThrAsnHisAlaIleValGlnThrLeuValAsn354045SerValAlaGlnAlaLysHisLysGlnArgLysArgLeuLysSerSer505560CysLysArgHisProLeuTyrAsnSerLysIleProLysAlaCysCys65707580ValProThrGluLeuSerAlaIleSerMetLeuTyrLeuAspGluAsn859095GluLysValValLeuLysAsnTyrGlnAspMetValValGluGlyCys100105110GlyCysArg11526925DNA人工序列artificialsequence引物269ttaaccatggtggacttcagtgacg2527025DNA人工序列artificialsequence引物270gtttggcttgagcaacagagttgac2527125DNA人工序列artificialsequence引物271gtcaactctgttgctcaagccaaac2527225DNA人工序列artificialsequence引物272gaatcttagagttgtacaaagggtg2527325DNA人工序列artificialsequence引物273caccctttgtacaactctaagattc2527425DNA人工序列artificialsequence引物274ggatccttagcgacacccacaaccc25275345DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物275aactctaagattcctaaggcatgctgtgtcccgacagaactcagtgctatctcgatgctg60taccttgacgagaatgaaaaggttgtattaaagaactatcaggacatggttgtggagggt120tgtgggtgtcgcgtggacttcagtgacgtggggtggaatgactggattgtggctcccccg180gggtatcacgccttttactgccacggagaatgcccttttcctctggctgatcatctgaac240tccactaatcatgccattgttcagacgttggtcaactctgttgctcaagccaaacacaaa300cagcggaaacgccttaagtccagctgtaagagacaccctttgtac345276115PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物276AsnSerLysIleProLysAlaCysCysValProThrGluLeuSerAla151015IleSerMetLeuTyrLeuAspGluAsnGluLysValValLeuLysAsn202530TyrGlnAspMetValValGluGlyCysGlyCysArgValAspPheSer354045AspValGlyTrpAsnAspTrpIleValAlaProProGlyTyrHisAla505560PheTyrCysHisGlyGluCysProPheProLeuAlaAspHisLeuAsn65707580SerThrAsnHisAlaIleValGlnThrLeuValAsnSerValAlaGln859095AlaLysHisLysGlnArgLysArgLeuLysSerSerCysLysArgHis100105110ProLeuTyr11527725DNA人工序列artificialsequence引物277ttaaccatgaactctaagattccta2527825DNA人工序列artificialsequence引物278cactgaagtccacgcgacacccaca2527925DNA人工序列artificialsequence引物279tgtgggtgtcgcgtggacttcagtg2528025DNA人工序列artificialsequence引物280gtttggcttgagcaacagagttgac2528125DNA人工序列artificialsequence引物281gtcaactctgttgctcaagccaaac2528225DNA人工序列artificialsequence引物282ggatccttagtacaaagggtgtctc25283345DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物283aactctaagattcctaaggcatgctgtgtcccgacagaactcagtgctatctcgatgctg60taccttgacgagaatgaaaaggttgtattaaagaactatcaggacatggttgtggagggt120tgtgggtgtcgcgctcaagccaaacacaaacagcggaaacgccttaagtccagctgtaag180agacaccctttgtacgtggacttcagtgacgtggggtggaatgactggattgtggctccc240ccggggtatcacgccttttactgccacggagaatgcccttttcctctggctgatcatctg300aactccactaatcatgccattgttcagacgttggtcaactctgtt345284115PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物284AsnSerLysIleProLysAlaCysCysValProThrGluLeuSerAla151015IleSerMetLeuTyrLeuAspGluAsnGluLysValValLeuLysAsn202530TyrGlnAspMetValValGluGlyCysGlyCysArgAlaGlnAlaLys354045HisLysGlnArgLysArgLeuLysSerSerCysLysArgHisProLeu505560TyrValAspPheSerAspValGlyTrpAsnAspTrpIleValAlaPro65707580ProGlyTyrHisAlaPheTyrCysHisGlyGluCysProPheProLeu859095AlaAspHisLeuAsnSerThrAsnHisAlaIleValGlnThrLeuVal100105110AsnSerVal11528525DNA人工序列artificialsequence引物285ttaaccatgaactctaagattccta2528625DNA人工序列artificialsequence引物286gtttggcttgagcgcgacacccaca2528725DNA人工序列artificialsequence引物287tgtgggtgtcgcgctcaagccaaac2528825DNA人工序列artificialsequence引物288cactgaagtccacgtacaaagggtg2528925DNA人工序列artificialsequence引物289caccctttgtacgtggacttcagtg2529025DNA人工序列artificialsequence引物290ggatccttaaacagagttgaccaac25291345DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物291ggccaagccaaacgcaaagggtataaacgccttaagtccagctgtaagagacaccctttg60tacgtggatttcaaggacgttgggtggaatgaccatgctgtggcaccgccggggtatcac120gccttctattgccacggagaatgcccgttcccactggctgatcatctgaactcagataac180catgccattgttcagaccaaggttaattctgttaatagcaaagatcccaaggcatgctgt240gtcccgacagaactcagtgcccccagcccgctgtaccttgacgagaatgagaagcctgta300ctcaagaactatcaggacatggtagtccatgggtgtgggtgtcgc345292115PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物292GlyGlnAlaLysArgLysGlyTyrLysArgLeuLysSerSerCysLys151015ArgHisProLeuTyrValAspPheLysAspValGlyTrpAsnAspHis202530AlaValAlaProProGlyTyrHisAlaPheTyrCysHisGlyGluCys354045ProPheProLeuAlaAspHisLeuAsnSerAspAsnHisAlaIleVal505560GlnThrLysValAsnSerValAsnSerLysAspProLysAlaCysCys65707580ValProThrGluLeuSerAlaProSerProLeuTyrLeuAspGluAsn859095GluLysProValLeuLysAsnTyrGlnAspMetValValHisGlyCys100105110GlyCysArg11529325DNA人工序列artificialsequence引物293ttaaccatgggccaagccaaacgca2529425DNA人工序列artificialsequence引物294ccttgaaatccacgtacaaagggtg2529525DNA人工序列artificialsequence引物295caccctttgtacgtggatttcaagg2529625DNA人工序列artificialsequence引物296gatctttgctattaacagaattaac2529725DNA人工序列artificialsequence引物297gttaattctgttaatagcaaagatc2529825DNA人工序列artificialsequence引物298ggatccttagcgacacccacaccca25299345DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物299gtggatttcaaggacgttgggtggaatgaccatgctgtggcaccgccggggtatcacgcc60ttctattgccacggagaatgcccgttcccactggctgatcatctgaactcagataaccat120gccattgttcagaccaaggttaattctgttggccaagccaaacgcaaagggtataaacgc180cttaagtccagctgtaagagacaccctttgtacaatagcaaagatcccaaggcatgctgt240gtcccgacagaactcagtgcccccagcccgctgtaccttgacgagaatgagaagcctgta300ctcaagaactatcaggacatggtagtccatgggtgtgggtgtcgc345300115PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物300ValAspPheLysAspValGlyTrpAsnAspHisAlaValAlaProPro151015GlyTyrHisAlaPheTyrCysHisGlyGluCysProPheProLeuAla202530AspHisLeuAsnSerAspAsnHisAlaIleValGlnThrLysValAsn354045SerValGlyGlnAlaLysArgLysGlyTyrLysArgLeuLysSerSer505560CysLysArgHisProLeuTyrAsnSerLysAspProLysAlaCysCys65707580ValProThrGluLeuSerAlaProSerProLeuTyrLeuAspGluAsn859095GluLysProValLeuLysAsnTyrGlnAspMetValValHisGlyCys100105110GlyCysArg11530125DNA人工序列artificialsequence引物301ttaaccatggtggatttcaaggacg2530225DNA人工序列artificialsequence引物302gtttggcttggccaacagaattaac2530325DNA人工序列artificialsequence引物303gttaattctgttggccaagccaaac2530425DNA人工序列artificialsequence引物304gatctttgctattgtacaaagggtg2530525DNA人工序列artificialsequence引物305caccctttgtacaatagcaaagatc2530625DNA人工序列artificialsequence引物306ggatccttagcgacacccacaccca25307345DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物307aatagcaaagatcccaaggcatgctgtgtcccgacagaactcagtgcccccagcccgctg60taccttgacgagaatgagaagcctgtactcaagaactatcaggacatggtagtccatggg120tgtgggtgtcgcggccaagccaaacgcaaagggtataaacgccttaagtccagctgtaag180agacaccctttgtacgtggatttcaaggacgttgggtggaatgaccatgctgtggcaccg240ccggggtatcacgccttctattgccacggagaatgcccgttcccactggctgatcatctg300aactcagataaccatgccattgttcagaccaaggttaattctgtt345308115PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物308AsnSerLysAspProLysAlaCysCysValProThrGluLeuSerAla151015ProSerProLeuTyrLeuAspGluAsnGluLysProValLeuLysAsn202530TyrGlnAspMetValValHisGlyCysGlyCysArgGlyGlnAlaLys354045ArgLysGlyTyrLysArgLeuLysSerSerCysLysArgHisProLeu505560TyrValAspPheLysAspValGlyTrpAsnAspHisAlaValAlaPro65707580ProGlyTyrHisAlaPheTyrCysHisGlyGluCysProPheProLeu859095AlaAspHisLeuAsnSerAspAsnHisAlaIleValGlnThrLysVal100105110AsnSerVal11530925DNA人工序列artificialsequence引物309ttaaccatgaatagcaaagatccca2531025DNA人工序列artificialsequence引物310gtttggcttggccgcgacacccaca2531125DNA人工序列artificialsequence引物311tgtgggtgtcgcggccaagccaaac2531225DNA人工序列artificialsequence引物312ccttgaaatccacgtacaaagggtg2531325DNA人工序列artificialsequence引物313caccctttgtacgtggatttcaagg2531425DNA人工序列artificialsequence引物314ggatccttaaacagaattaaccttg25315345DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物315aatagcaaagatcccaaggcatgctgtgtcccgacagaactcagtgcccccagcccgctg60taccttgacgagaatgagaagcctgtactcaagaactatcaggacatggtagtccatggg120tgtgggtgtcgcgtggatttcaaggacgttgggtggaatgaccatgctgtggcaccgccg180gggtatcacgccttctattgccacggagaatgcccgttcccactggctgatcatctgaac240tcagataaccatgccattgttcagaccaaggttaattctgttggccaagccaaacgcaaa300gggtataaacgccttaagtccagctgtaagagacaccctttgtac345316115PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物316AsnSerLysAspProLysAlaCysCysValProThrGluLeuSerAla151015ProSerProLeuTyrLeuAspGluAsnGluLysProValLeuLysAsn202530TyrGlnAspMetValValHisGlyCysGlyCysArgValAspPheLys354045AspValGlyTrpAsnAspHisAlaValAlaProProGlyTyrHisAla505560PheTyrCysHisGlyGluCysProPheProLeuAlaAspHisLeuAsn65707580SerAspAsnHisAlaIleValGlnThrLysValAsnSerValGlyGln859095AlaLysArgLysGlyTyrLysArgLeuLysSerSerCysLysArgHis100105110ProLeuTyr11531725DNA人工序列artificialsequence引物317ttaaccatgaatagcaaagatccca2531825DNA人工序列artificialsequence引物318cttgaaatccacgcgacacccacac2531925DNA人工序列artificialsequence引物319gtgtgggtgtcgcgtggatttcaag2532025DNA人工序列artificialsequence引物320gtttggcttggccaacagaattaac2532125DNA人工序列artificialsequence引物321gttaattctgttggccaagccaaac2532225DNA人工序列artificialsequence引物322ggatccttagtacaaagggtgtctc25323345DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物323gctcaagccaaacacaaacagcggaaacgccttaagtccagctgtaagagacaccctttg60tacgtggatttcaaggacgttgggtggaatgaccatgctgtggcaccgccggggtatcac120gccttctattgccacggagaatgcccgttcccactggctgatcatctgaactcagataac180catgccattgttcagaccaaggttaattctgttaactctaagattcctaaggcatgctgt240gtcccgacagaactcagtgctatctcgatgctgtaccttgacgagaatgaaaaggttgta300ttaaagaactatcaggacatggttgtggagggttgtgggtgtcgc345324115PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物324AlaGlnAlaLysHisLysGlnArgLysArgLeuLysSerSerCysLys151015ArgHisProLeuTyrValAspPheLysAspValGlyTrpAsnAspHis202530AlaValAlaProProGlyTyrHisAlaPheTyrCysHisGlyGluCys354045ProPheProLeuAlaAspHisLeuAsnSerAspAsnHisAlaIleVal505560GlnThrLysValAsnSerValAsnSerLysIleProLysAlaCysCys65707580ValProThrGluLeuSerAlaIleSerMetLeuTyrLeuAspGluAsn859095GluLysValValLeuLysAsnTyrGlnAspMetValValGluGlyCys100105110GlyCysArg11532524DNA人工序列artificialsequence引物325ttaaccatggctcaagccaaacac2432624DNA人工序列artificialsequence引物326cttgaaatccacgtacaaagggtg2432724DNA人工序列artificialsequence引物327caccctttgtacgtggatttcaag2432825DNA人工序列artificialsequence引物328gaatcttagagttaacagaattaag2532925DNA人工序列artificialsequence引物329gttaattctgttaactctaagattc2533025DNA人工序列artificialsequence引物330ggatccttagcgacacccacaaccc25331345DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物331ggccaagccaaacgcaaagggtataaacgccttaagtccagctgtaagagacaccctttg60tacgtggacttcagtgacgtggggtggaatgactggattgtggctcccccggggtatcac120gccttttactgccacggagaatgcccttttcctctggctgatcatctgaactccactaat180catgccattgttcagacgttggtcaactctgttaatagcaaagatcccaaggcatgctgt240gtcccgacagaactcagtgcccccagcccgctgtaccttgacgagaatgagaagcctgta300ctcaagaactatcaggacatggtagtccatgggtgtgggtgtcgc345332115PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物332GlyGlnAlaLysArgLysGlyTyrLysArgLeuLysSerSerCysLys151015ArgHisProLeuTyrValAspPheSerAspValGlyTrpAsnAspTrp202530IleValAlaProProGlyTyrHisAlaPheTyrCysHisGlyGluCys354045ProPheProLeuAlaAspHisLeuAsnSerThrAsnHisAlaIleVal505560GlnThrLeuValAsnSerValAsnSerLysAspProLysAlaCysCys65707580ValProThrGluLeuSerAlaProSerProLeuTyrLeuAspGluAsn859095GluLysProValLeuLysAsnTyrGlnAspMetValValHisGlyCys100105110GlyCysArg11533324DNA人工序列artificialsequence引物333ttaaccatgggccaagccaaacgc2433424DNA人工序列artificialsequence引物334actgaagtccacgtacaaagggtc2433524DNA人工序列artificialsequence引物335caccctttgtacgtggacttcagt2433625DNA人工序列artificialsequence引物336gatctttgctattaacagagttgac2533725DNA人工序列artificialsequence引物337gtcaactctgttaatagcaaagatc2533825DNA人工序列artificialsequence引物338ggatccttagcgacacccacaccca25339345DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物339gctcaagccaaacacaaacagcggaaacgccttaagtccagctgtaagagacaccctttg60tacaatagcaaagatcccaaggcatgctgtgtcccgacagaactcagtgcccccagcccg120ctgtaccttgacgagaatgagaagcctgtactcaagaactatcaggacatggtagtccat180gggtgtgggtgtcgcgtggatttcaaggacgttgggtggaatgaccatgctgtggcaccg240ccggggtatcacgccttctattgccacggagaatgcccgttcccactggctgatcatctg300aactcagataaccatgccattgttcagaccaaggttaattctgtt345340115PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物340AlaGlnAlaLysHisLysGlnArgLysArgLeuLysSerSerCysLys151015ArgHisProLeuTyrAsnSerLysAspProLysAlaCysCysValPro202530ThrGluLeuSerAlaProSerProLeuTyrLeuAspGluAsnGluLys354045ProValLeuLysAsnTyrGlnAspMetValValHisGlyCysGlyCys505560ArgValAspPheLysAspValGlyTrpAsnAspHisAlaValAlaPro65707580ProGlyTyrHisAlaPheTyrCysHisGlyGluCysProPheProLeu859095AlaAspHisLeuAsnSerAspAsnHisAlaIleValGlnThrLysVal100105110AsnSerVal11534125DNA人工序列artificialsequence引物341ttaaccatggctcaagccaaacaca2534225DNA人工序列artificialsequence引物342gatctttgctattgtacaaagggtg2534325DNA人工序列artificialsequence引物343caccctttgtacaatagcaaagatc2534425DNA人工序列artificialsequence引物344cttgaaatccacgcgacacccacac2534525DNA人工序列artificialsequence引物345gtgtgggtgtcgcgtggatttcaag2534625DNA人工序列artificialsequence引物346ggatccttaaacagaattaaccttg25347345DNA人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物347ggccaagccaaacgcaaagggtataaacgccttaagtccagctgtaagagacaccctttg60tacaactctaagattcctaaggcatgctgtgtcccgacagaactcagtgctatctcgatg120ctgtaccttgacgagaatgaaaaggttgtattaaagaactatcaggacatggttgtggag180ggttgtgggtgtcgcgtggacttcagtgacgtggggtggaatgactggattgtggctccc240ccggggtatcacgccttttactgccacggagaatgcccttttcctctggctgatcatctg300aactccactaatcatgccattgttcagacgttggtcaactctgtt345348115PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物PCR融合产物348GlyGlnAlaLysArgLysGlyTyrLysArgLeuLysSerSerCysLys151015ArgHisProLeuTyrAsnSerLysIleProLysAlaCysCysValPro202530ThrGluLeuSerAlaIleSerMetLeuTyrLeuAspGluAsnGluLys354045ValValLeuLysAsnTyrGlnAspMetValValGluGlyCysGlyCys505560ArgValAspPheSerAspValGlyTrpAsnAspTrpIleValAlaPro65707580ProGlyTyrHisAlaPheTyrCysHisGlyGluCysProPheProLeu859095AlaAspHisLeuAsnSerThrAsnHisAlaIleValGlnThrLeuVal100105110AsnSerVal11534924DNA人工序列artificialsequence引物349ttaaccatgggccaagccaaacgc2435025DNA人工序列artificialsequence引物350gaatcttagagttgtacaaagggtg2535125DNA人工序列artificialsequence引物351caccctttgtacaactctaagattc2535225DNA人工序列artificialsequence引物352tcactgaagtccacgcgacacccac2535325DNA人工序列artificialsequence引物353gtgggtgtcgcgtggacttcagtga2535425DNA人工序列artificialsequence引物354ggatccttaaacagagttgaccaac2535558PRT人工序列artificialsequencepQE-80L-Kana衍生物355ThrAlaLeuAspGlyThrArgGlyAlaGlnGlySerGlyGlyGlyGly151015GlyGlyGlyGlyGlyGlyGlyGlyGlyGlyGlyGlyGlyGlyGlyGly202530AlaGlyArgGlyHisGlyArgArgGlyArgSerArgCysSerArgLys354045SerLeuHisValAspPheLysGluLeuGly50553569PRT人工序列artificialsequence重组多肽的第三域片段356ProLysAlaCysCysValProThrGlu153575PRT人工序列artificialsequence重组多肽的第三域片段357GlyCysGlyCysArg15

权利要求：1.一种重组多肽，其包含：第一域，其选自由SEQIDNO:35及SEQIDNO:39所组成的群组；第二域，其选自由SEQIDNO:47及SEQIDNO:49所组成的群组；及第三域，其选自由SEQIDNO:57及SEQIDNO:61所组成的群组；其中该第一域择一融合于该第二域的C端或N端，该第三域融合于该第二域或同时融合该第一域及该第二域，且其中该重组多肽具有诱导碱性磷酸酶活性的能力。2.如权利要求1的重组多肽，其中该第一域相较于该第二域位于接近该重组多肽的C端、该第三域相较于该第二域位于接近该重组多肽的N端、或该第一域相较于该第三域位于接近该重组多肽的N端。3.如权利要求1的重组多肽，其中该第二域包含一分子内二硫键。4.如权利要求1的重组多肽，其中该第二域包含在该第二域的第23个氨基酸和该第二域的第27个氨基酸之间的一个分子内二硫键。5.如权利要求1的重组多肽，其中该第三域包含：第氨基酸序列PKACCVPTESEQIDNO:356及第二氨基酸序列GCGCRSEQIDNO:357，且其中该第三域包含在该第一和该第二氨基酸序列之间的二个分子内二硫键。6.如权利要求5的重组多肽，其中该重组多肽包含：a在该第氨基酸序列的该第4个氨基酸和该第二氨基酸序列的该第2个氨基酸之间的第一分子内二硫键，以及在该第氨基酸序列的该第5个氨基酸和该第二氨基酸序列的该第4个氨基酸之间的第二分子内二硫键；或b在该第氨基酸序列的该第5个氨基酸和该第二氨基酸序列的该第2个氨基酸之间的第一分子内二硫键，以及在该第氨基酸序列的该第4个氨基酸和该第二氨基酸序列的该第4个氨基酸之间的第二分子内二硫键。7.一种重组多肽，其包含一条氨基酸序列，该氨基酸序列选自由SEQIDNO:260、SEQIDNO:268、SEQIDNO:276、SEQIDNO:284、SEQIDNO:292、SEQIDNO:300、SEQIDNO:308、SEQIDNO:316、SEQIDNO:324、SEQIDNO:332、SEQIDNO:340及SEQIDNO:348所组成的群组，其中该重组多肽具有诱导碱性磷酸酶活性的能力。8.一种同型二聚体蛋白，其包含如权利要求1的二个相同的重组多肽，其中该同型二聚体蛋白包含在该二个重组多肽的第一域之间的分子间二硫键。9.如权利要求8的同型二聚体蛋白，其中该同型二聚体蛋白包含在该二个重组多肽其一的该第一域中的第15个氨基酸和另一重组多肽的该第一域中的第15个氨基酸之间的一个分子间二硫键。10.如权利要求8的同型二聚体蛋白，其中每一该重组多肽的该第三域包含：第氨基酸序列PKACCVPTESEQIDNO:356及第二氨基酸序列GCGCRSEQIDNO:357，且其中该同型二聚体蛋白包含在该二个重组多肽的其一的该第三域中的该第氨基酸序列和该另一重组多肽的该第三域中的该第二氨基酸序列之间的二个分子间二硫键。11.如权利要求10的同型二聚体蛋白，其中该同型二聚体蛋白包含：a在该二个重组多肽的其一的该第氨基酸序列的该第4个氨基酸和该另一重组多肽的该第二氨基酸序列的该第2个氨基酸之间的第一分子间二硫键，以及在该二个重组多肽的其一的该第氨基酸序列的该第5个氨基酸和该另一重组多肽的该第二氨基酸序列的该第4个氨基酸之间的第二分子间二硫键；或b在该二个重组多肽的其一的该第氨基酸序列的该第5个氨基酸和该另一重组多肽的该第二氨基酸序列的该第2个氨基酸之间的第一分子间二硫键，以及在该二个重组多肽的其一的该第氨基酸序列的该第4个氨基酸和该另一重组多肽的该第二氨基酸序列的该第4个氨基酸之间的第二分子间二硫键。12.一种可生物分解组合物，具有诱导骨生成以在一个位置形成骨质的能力，其包含：如权利要求8的同型二聚体蛋白；及可生物分解的磷酸钙载体，其具有多个孔洞，其中该同型二聚体蛋白是约0.003-0.32％ww。13.如权利要求12的可生物分解组合物，其中该可生物分解的磷酸钙载体的孔隙率大于70％，且孔径为约300μm至约600μm。14.如权利要求12的可生物分解组合物，其中该可生物分解的磷酸钙载体的孔洞连通分布于该可生物分解的磷酸钙载体；其中该同型二聚体蛋白的有效量为约0.03mgg至3.2mgg的该可生物分解的磷酸钙载体。15.如权利要求12的可生物分解组合物，其中该可生物分解组合物适用于使一个组织凸出，该组织选自鼻沟、眉间、中面部组织、下颚轮廓线、下巴及脸颊。16.如权利要求12的可生物分解组合物，其中该位置选自由长骨骨折缺损、二个相邻脊椎骨体的空隙、不愈合骨的缺陷、上颚截骨切口、下颚截骨切口、矢状劈开截骨切口、颏整型截骨切口、快速颚扩张截骨切口、以及在二个相邻脊椎骨的二个相邻横突之间纵向延伸的空间所组成的群组。17.如权利要求12的可生物分解组合物，其中单一剂量的该同型二聚体蛋白为约0.006mg至15mg。18.如权利要求12的可生物分解组合物，其中该可生物分解的磷酸钙载体供该同型二聚体蛋白流入该可生物分解的磷酸钙载体于体内时不渗漏，从而使所形成的骨质限制于该可生物分解的磷酸钙载体的体积内。

百度查询： 博晟生医股份有限公司 重组多肽及其组合物及方法

免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。

阅读全文 双屏查看 官方信息 专利公告 收藏专利 下载PDF 下载WORD