申请/专利权人：国家粮食和物资储备局科学研究院

申请日：2022-05-05

公开（公告）日：2024-02-09

公开（公告）号：CN115011508B

主分类号：C12N1/20

分类号：C12N1/20;C12N1/36;C12N1/02;A23K10/18;A23K40/30;C12R1/01

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.02.09#授权;2022.09.23#实质审查的生效;2022.09.06#公开

摘要：本发明公开了一株耐高温屎肠球菌、其高稳定性微胶囊制剂和制备方法。本发明通过反复高温胁迫驯化得到一株耐高温性能显著提升的屎肠球菌突变体，对该耐高温屎肠球菌突变体进行微囊化前包被和发酵后包被，从而制备多层复合包被耐高温屎肠球菌微胶囊制剂。本发明的高稳定性屎肠球菌微胶囊制剂经过饲料高温制粒后存活率显著提升，达到50％‑70％；在室温条件下储存6个月，存活率同样显著提升，稳定在60％‑70％，可以满足畜禽饲料企业颗粒饲料产品添加益生菌微生态制剂的需求。

主权项：1.一种屎肠球菌微胶囊制剂的制备方法，其特征在于，该方法包括：1在发酵系统的补料罐中配制浓度为10gL-20gL的海藻酸钠溶液；2按与所述海藻酸钠质量比为1:1-1.5的比例称取碳酸钙，加入补料罐中，混合均匀，灭菌，然后冷却至35℃-38℃，加入生长稳定期的保藏编号为CGMCCNo.24004的屎肠球菌Enterococcusfaecium种子液，至活菌浓度为1×106-5×106CFUmL，充分混匀作为水相；3向液体石蜡中加入司盘80作为油相，所述司盘80的体积百分含量为0.1％-0.3％，并将油相加入到发酵罐中，灭菌；4在另一补料罐中配制0.1-0.3molL的氯化钙溶液作为沉降剂，灭菌；5在400-500rpm的搅拌速度下，按照水相与油相的体积比为1:3-5的比例，将水相混合液缓慢转入发酵罐的油相中，搅拌2-5min，然后按冰醋酸与油相体积比为1:500-600的比例加入冰醋酸，固定化10-20min，停止搅拌，再按与水相体积比1:10-20的比例向反应体系中加入沉降剂，微胶囊缓慢沉降，再吸走油相；6将适于所述屎肠球菌生长的发酵培养基加入到发酵罐中，在35-38℃，搅拌速度为50-100rpm条件下，流加氨水控制发酵液pH值为6.2-6.9，继续培养8-22h，直至所述屎肠球菌充满90％以上微胶囊内部空间，离心，得到单层微胶囊菌泥；7向步骤6得到的微胶囊菌泥中加入保护剂；混匀后，再加入制粒辅料，通过摇摆制粒机制得20-30目微胶囊颗粒，随即投入到球形抛丸机中对微胶囊颗粒进行抛圆；其中，所述保护剂的组成为：以所述微胶囊菌泥的重量为100份计，向微胶囊菌泥中加入甘油5-10份、乳糖5-10份、大豆分离蛋白10-15份、维生素C1-2份、氯化钙0.5-1份、D-山梨醇0.5-1份；所述制粒辅料的组成为：以所述微胶囊菌泥的重量为100份计，向微胶囊菌泥中加入玉米淀粉100-200份、微晶纤维素5-10份、羧甲基纤维素钠0.06-0.25份、水100-200份；8将步骤7制得的包裹保护剂并经抛圆后的微胶囊颗粒转入流化造粒包衣干燥机中，控制进风温度为40-55℃，干燥至样品含水量为10％以下；采用肠溶性包衣材料对其进行喷涂、包衣，当肠溶性包衣材料全部喷涂完毕，干燥，过筛，得到粒径为20-60目的屎肠球菌微胶囊制剂；所述肠溶性包衣材料是将质量百分含量为20％-40％的聚丙烯酸树脂乳胶液与配套预混剂一起加入到两者总质量1.5倍的水中配制而成；其中，所述配套预混剂的组成为羟丙甲基纤维素、聚乙二醇6000、滑石粉、聚山梨酯80、二氧化钛、三氧化二铁，质量比为1:1-2:3-5:0.5-1:1-2:0.3-0.5；所述聚丙烯酸树脂乳胶液与配套预混剂的质量比是8-12:1。

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