申请/专利权人：朱灏

申请日：2021-01-27

公开（公告）日：2024-02-09

公开（公告）号：CN112730415B

主分类号：G01N21/84

分类号：G01N21/84;G01N1/30

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.02.09#授权;2021.05.21#实质审查的生效;2021.04.30#公开

摘要：本发明公开了一种人间充质干细胞诱导分化成软骨的染色鉴定方法，主要步骤包含以下几步：1取软骨诱导分化完成的软骨细胞，加入氯化钠注射液润洗培养瓶底面；2加入软骨固定剂，室温下静置；3加入第一软骨冲洗液，润洗细胞；4加入软骨染色液，室温避光使用软骨染色剂进行染色过夜；5加入第二软骨冲洗液，润洗细胞；6吸弃第二软骨冲洗液，再次加入第二软骨冲洗液，再次漂洗细胞，直至上清液不再显示出蓝色；7最后加入软骨检查液，置于显微镜下观察、拍照。使用该染色鉴定方法进行染色后的软骨分化完成的软骨细胞显色清晰，无染色剂凝结影响观察情况且细胞球团状态良好，适宜在干细胞领域推广。

主权项：1.一种人间充质干细胞诱导分化成软骨的染色鉴定方法，其特征在于：步骤包含以下几步：1取96孔板中的软骨诱导分化完成的软骨细胞，密度为1x105孔，吸弃分化培养基，每孔加入0.05ml氯化钠注射液轻轻润洗培养瓶底面；2吸弃氯化钠注射液，加入0.05ml软骨固定剂，轻轻晃动培养瓶，使底面浸润均匀，室温下静置30分钟；3吸弃软骨固定剂，加入0.05ml第一软骨冲洗液，润洗细胞，静置3分钟；4吸弃第一软骨冲洗液，加入0.05ml软骨染色液，均匀浸润底面，并将96孔板用铝箔纸包裹，室温避光使用0.05mL阿尔新蓝进行染色过夜；5吸弃软骨染色液，加入0.05ml第二软骨冲洗液，润洗细胞；6吸弃第二软骨冲洗液，再次加入0.05ml第二软骨冲洗液，再次漂洗细胞，循环此过程直至上清液不再显示出蓝色；7吸弃第二软骨冲洗液，加入0.02ml软骨检查液，置于显微镜下观察、拍照；所述软骨诱导分化的步骤包含以下几步：1将1mL血清替代物与19mL的无血清培养基配制成细胞培养基；（2）将18mL基础培养基和2mL培养基补充剂配制成软骨诱导分化培养基，备用；3使用细胞培养基将间充质干细胞重悬，调整间充质干细胞的密度为1x10510μl，并使用96孔板进行间充质干细胞的接种，接种密度为1x10510μl孔；4接种完成后，放置在37℃，5％CO2浓度的培养箱静置2小时后，补加0.1mL的细胞培养基；5放置24小时后，将培养基更换为软骨诱导分化培养基，进行软骨诱导分化，分化时间14天；所述软骨固定剂为ViVacell公司出售的Chondrogenic-Fixation型号的产品；所述第一软骨冲洗液为ViVacell公司出售的Chondrogenic-WashI型号的产品；所述软骨染色液为ViVacell公司出售的Chondrogenic-Staining型号的产品；所述第二软骨冲洗液为ViVacell公司出售的Chondrogenic-WashII型号的产品；所述软骨检查液为ViVacell公司出售的Chondrogenic-Inspection型号的产品；所述血清替代物为EliteCell生物医药集团公司出售的EliteGroTM型号的血清替代物产品；所述无血清培养基为以色列BI公司出售的NutriStemXFMedium型号的无血清培养基产品；所述培养基补充剂为以色列BI公司出售的ChondrogenicDifferentiationSupplementMix型号的产品；所述基础培养基为以色列BI公司出售的ChondrogenicDifferentiationBasalMedium型号的产品。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 朱灏 一种人间充质干细胞诱导分化成软骨的染色鉴定方法

免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。

阅读全文 双屏查看 官方信息 专利公告 收藏专利 下载PDF 下载WORD