申请/专利权人：赛欧双源(青岛)生物科技有限公司

申请日：2023-11-29

公开（公告）日：2024-02-20

公开（公告）号：CN117571640A

主分类号：G01N21/31

分类号：G01N21/31;C12N5/09;C12N5/0783

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.03.08#实质审查的生效;2024.02.20#公开

摘要：本发明提供了CIK细胞杀伤肿瘤细胞的检测方法，涉及CIK细胞杀伤肿瘤细胞的检测方法技术领域。复苏后用完全培养基重悬细胞，以1:5入T‑25培养瓶，混匀后转入培养箱中，再转移至离心管，离心处理，离心完成后弃去上清，重悬调整浓度；CIK细胞离心处理，离心完成后弃去上清，加入CIK细胞培养基，将浓度进行稀释为不同浓度的效应细胞，设置实验孔、效应细胞对照孔及靶细胞对照孔进行铺板培养，每孔加入CCK‑8，混匀培养，再用酶标仪测定OD值，最后计算杀伤率。本发明通过统一的检测工艺，包括靶细胞准备、效应细胞准备、铺板以及杀伤检测，实现CIK细胞杀伤肿瘤细胞的可重复检测，以判定细胞对肿瘤细胞的杀伤功能。

主权项：1.CIK细胞杀伤肿瘤细胞的检测方法，其特征在于，步骤如下：S100、靶细胞K562的复苏及培养：取出要复苏的细胞，转入恒温水浴锅中，震荡冻存管使冻存管内容物完全融化，打开冻存管盖，将细胞悬液转移至已准备好的装有RPMI1640培养液的离心管中，混匀后，离心处理，离心完成后弃去上清，用完全培养基重悬细胞，计数活细胞数，以1:5入T-25细胞培养瓶中，混匀后转入5％CO2培养箱中培养静置，48h后待细胞密度为80％-90％后即可为靶细胞，S200、靶细胞K562的准备：培养瓶中的细胞转移至离心管，离心处理，离心完成后弃去上清，加入RPMI1640培养基重悬调整浓度为1×105个ml，S300、效应细胞的准备：将培养的CIK细胞取出，离心处理，离心完成后弃去上清，加入CIK细胞培养基，将浓度进行稀释为1×106个ml、2×106个ml、4×106个ml作为不同浓度的效应细胞，S400、铺板：接种细胞至孔板，将等量的效应细胞和靶细胞按照不同的效应细胞和靶细胞比例加入实验孔中，并设置效应细胞对照孔及靶细胞对照孔，将加入液体的孔板放置在37℃，5％CO2孵箱中培养24h，S500、杀伤检测：取出孔板，每孔加入CCK-8各20μl，混匀后，再放入37℃，5％CO2培养箱中培养4小时后，取出用酶标仪测定波长450nm处OD值，按下式计算效应细胞的杀伤率，杀伤率％＝[1－实验孔OD值－效应细胞对照孔OD值靶细胞对照孔OD值]×100％。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 赛欧双源(青岛)生物科技有限公司 CIK细胞杀伤肿瘤细胞的检测方法

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