申请/专利权人：福建片仔癀化妆品有限公司;片仔癀(上海)生物科技研发有限公司

申请日：2023-11-27

公开（公告）日：2024-03-01

公开（公告）号：CN117625513A

主分类号：C12N5/071

分类号：C12N5/071;C12Q1/02;C12Q1/6888

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.03.19#实质审查的生效;2024.03.01#公开

摘要：本发明涉及化妆品检测领域，具体涉及一种化妆品原料滋养功效的评价筛选方法，包括：将人角质形成细胞复苏和传代培养，然后进行细胞活力测试，选择细胞活力≥80％的样品浓度，进行SPT、FASN以及HMGCoA基因表达测试，采用t‑test统计分析，统计分析均为双尾；P0.05认为具有显著差异，P0.01认为具有极显著差异；与空白对照组相比，样品组的SPT、FASN、HMGCoA基因表达均显著上调，则样品具有滋养功效；若与空白对照组相比，样品组的SPT、FASN、HMGCoA基因表达任一项未显著上调，则样品未具滋养功效。本发明操作简单，检测周期短，体系标准化，可为快速筛选具有滋养功效的化妆品原料以及评价化妆品原料的滋养功效提供方法依据，填补了化妆品原料滋养功效评价方法的空缺。

主权项：1.一种化妆品原料滋养功效的评价筛选方法，其特征在于：包括以下步骤：1人角质形成细胞在培养基上完成复苏和传代培养；所述培养基为DMEM培养基，含10％胎牛血清和1％青链霉素混合液；2测试细胞活力：取1中至少传代一次的细胞接种培养24±2h；样品组加入6-8个用培养基稀释的不同浓度梯度的待测样品；空白组加入培养基，有细胞；溶剂组仅培养基，无细胞；继续培养24h±2h后，加入CCK-8或MTT溶液，检测吸光值，计算细胞活力；细胞活力＝样品组吸光值-溶剂组吸光值空白组吸光值-溶剂组吸光值*100；选择细胞活力≥80％的待测样品浓度进行以下测试；3测试脂质合成相关酶丝氨酸棕榈酰转移酶SPT、脂肪酸合成酶FASN、三羟基三甲基戊二酰辅酶AHMGCoA基因的表达：将培养好的细胞，消化离心，计数，配置细胞浓度为2～3×105个mL，吹打均匀，在12孔板中每孔加入1mL，放入CO2培养箱中培养24±2h；24±2h后，吸弃上清液，每孔加入1mL无血清培养基，让细胞饥饿24±2h；24±2h后，吸弃培养基；设3个复孔；样品组加入含待测样品的培养基，每孔1mL；空白对照组加入培养基，每孔1mL；阳性对照组加入含0.1％白池花籽油的培养基，每孔1mL；继续培养24h±2h；24±2h后，吸弃培养基，用RNA提取试剂盒提取总RNA；利用超微量紫外-可见光分光光度计对总RNA浓度和纯度进行测定；使用反转录试剂盒在普通PCR扩增仪进行反转录，合成cDNA；利用dsDNA荧光染料进行点板后用荧光定量PCR仪检测SPT、FASN、HMGCoA基因的表达；各组间比较采用t-test统计分析，统计分析均为双尾；P0.05认为具有显著差异，P0.01认为具有极显著差异；与空白对照组相比，样品组的SPT、FASN、HMGCoA基因表达均显著上调，则样品具有滋养功效；若与空白对照组相比，样品组的SPT、FASN、HMGCoA基因表达任一项未显著上调，则样品未具滋养功效。

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