申请/专利权人：中国科学院武汉植物园

申请日：2023-11-27

公开（公告）日：2024-03-01

公开（公告）号：CN117625680A

主分类号：C12N15/84

分类号：C12N15/84;C12N15/54

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.03.19#实质审查的生效;2024.03.01#公开

摘要：本发明提供了一种在莲子子叶瞬时表达基因的方法，该方法主要包含以下步骤：（1）授粉后9‑15天莲子的选择和子叶的获取；（2）目的基因表达载体的构建；（3）重组表达载体转化到农杆菌；（4）农杆菌注射到莲子子叶。本发明所述的方法通过注射特定发育阶段的莲子子叶，实现对目的基因的瞬时超表达，操作简便快捷，可操作性强，结果可靠，可快速高效地进行莲子代谢物合成和发育相关基因功能的本体验证。

主权项：1.一种在莲子子叶瞬时表达基因的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）莲子的选择和子叶的获取：选用授粉后9-15天、发育正常、形状和大小一致的莲子，剥去莲子的果皮和种皮，选取完整、没有损伤的子叶；（2）目的基因表达载体的构建：将目的基因克隆至表达载体，并转化大肠杆菌，提取质粒DNA进行测序确认，构建目的基因的重组表达载体；（3）重组表达载体转化到农杆菌：采用电击法，将含有目的基因的重组表达载体转化农杆菌，在抗性固体培养基上筛选阳性菌落并进行菌落PCR验证，将阳性菌落重悬后制成农杆菌侵染液；（4）农杆菌注射到莲子子叶：使用无菌注射器将农杆菌侵染液注射到步骤（1）所选取的莲子子叶，将莲子子叶放置于带有滤纸的12MS固体培养基上，避光培养3-5天。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 中国科学院武汉植物园 一种在莲子子叶中瞬时表达基因的方法

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