申请/专利权人：河南工业大学

申请日：2023-12-19

公开（公告）日：2024-03-01

公开（公告）号：CN117625754A

主分类号：C12Q1/6844

分类号：C12Q1/6844;G01N33/53;G01N33/531

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.03.19#实质审查的生效;2024.03.01#公开

摘要：本发明提供了一种基于三链体‑锁型探针结合滚环扩增（RCA）和催化发夹组装（CHA）双循环的荧光适配体传感器的制备方法及应用。本发明所述的适配体传感器，包括DNA三链体结构、圆形模板链，发夹探针HP1、HP2，其中HP2为6‑FAM,BHQ‑1双端标记发夹。DNA三链体结构由适配体链和触发链组成，触发链可以在目标物黄曲霉毒素B1（AFB1）存在的情况下，启动RCA扩增反应，并进一步出发CHA反应，使原本猝灭的荧光信号得以恢复。本发明所述的AFB1适配体传感器，巧妙的运用了DNA三链体结构，结合RCA‑CHA级联扩增反应，在双重放大信号的同时有效的降低了反应的背景信号，从而实现了对食品中AFB1的灵敏检测。

主权项：1.一种基于三螺旋分子开关结合RCA-CHA级联扩增技术检测AFB1的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）三链体-锁型结构的制备：将适配体链和引物链加入到灭菌的离心管中，加入Tric-HCl缓冲溶液进行恒温孵育，组装成三链体-锁型结构，制备完成后将其置于低温环境下保存；（2）DNA链H1、DNA链H2的预处理：H1、H2经活化配置成母液，使用前应经过退火处理，形成发夹结构，具体步骤为：取H1和H2分别加入到两个灭菌离心管中，在每个离心管中分别加入Tric-HCl缓冲溶液，将离心管进行高温退火，退火完成后静置使其缓慢冷却至室温，获得反应产物，并将反应产物置于低温环境中保存；（3）荧光适配体传感器的构建：预先制备三链体-锁型结构，当样本中含有AFB1时，适配体链与AFB1特异性结合，打开“锁型”结构，释放出三链体-锁型结构中的引物链，用于启动环化的圆形模板链，加入Phi29DNA聚合酶体系溶液以及处理后的DNA链H1和DNA链H2，涡旋充分混合，制备得适配体传感器。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 河南工业大学 一种基于三螺旋分子开关结合RCA-CHA级联扩增技术检测AFB1的方法

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