申请/专利权人：天津师范大学

申请日：2022-04-06

公开（公告）日：2024-03-01

公开（公告）号：CN114574480B

主分类号：C12N15/10

分类号：C12N15/10;C12Q1/6806

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.01#授权;2022.06.21#实质审查的生效;2022.06.03#公开

摘要：本发明公开了一种提取水体表面混合摇蚊科昆虫蜕皮总DNA的方法。本发明主要考察了样本采用蛹皮提取环境DNA，生理盐水处理以及水浴锅保存时间，此外在裂解时对蛹皮的研磨对DNA提取的影响。重点是解决环境DNA提取困难、质量低等问题，传统提取方法与改进后提取方法电泳条带对比，传统方法提取的DNA模糊，较暗，而改进后方法提取的DNA条带亮，且无拖带现象，证明改进后的方法提取的DNA浓度更大，纯度更高。

主权项：1.一种提取水体表面混合摇蚊科昆虫蜕皮总DNA的方法，其特征在于按如下的步骤进行：1去河流、湖泊的下风口处且有少许白色泡沫的岸边，采集摇蚊科蛹皮；2将采集的摇蚊蛹皮用95％的酒精浸泡5分钟，浸泡两次，之后用蒸馏水冲洗三次，洗去蛹皮上的杂质；3用生理盐水浸泡蛹皮两个小时，使蛹皮上残存的细胞恢复活性以方便提取DNA；4将蛹皮放入37℃水浴锅恒温保存2小时；5把处理过的蛹皮放入研钵中，加入解离液充分研磨；所述的解离液200ml的组成如下： 后用去离子水补至200ml；6将样品转移至200ul的试剂盒中，使DNA与蛋白质分离并且稳定的核酸结合到硅胶膜上；7将无水乙醇加入到裂解物中，上样到离心柱上，4℃10000转min离心；8缓冲液洗涤杂质，低盐洗脱出DNA，干燥处理；9用100μL的TE溶解DNA沉淀，得到DNA提取液；所述TE的pH为8.0；10PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳分离后检测；PCR反应体系如下：总体系50ul：ddH2O32.4ul，10×PCRBuffer5ul，2.5mmolL的dNTPs4ul，10umolL的通用引物LCO和HCO各2ul，500U，2.5Uul的Taq酶0.6ul，DNA模板4ul；PCR反应条件如下：94℃预变性5min；94℃变性10s；55℃退火30s；72℃延伸60s；35个循环；72℃延伸10min；4℃保存。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 天津师范大学 一种提取水体表面混合摇蚊科昆虫蜕皮总DNA的方法

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