申请/专利权人：华南农业大学

申请日：2023-11-15

公开（公告）日：2024-03-08

公开（公告）号：CN117660510A

主分类号：C12N15/74

分类号：C12N15/74;C12N15/31;C12N15/66;C12N1/21;C12Q1/04;C12R1/01

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.03.26#实质审查的生效;2024.03.08#公开

摘要：本发明属于生物技术领域，公开了一种副鸡禽杆菌基因缺失与筛选系统的构建方法，具体包括如下步骤：步骤10：将质粒pSJ001导入副鸡禽杆菌，经与抗性基因相对应的抗生素筛选，得到第一次同源重组的菌株；步骤20：将质粒pSJ002导入第一次重组菌株，经蓝白斑筛选系统筛选得到第二次同源重组的菌株；该方法应用到菌株筛选后，通过正向筛选使用所对应的抗生素筛选出含有lacZ基因和抗性基因的目标菌株，反向筛选使用X‑Gal蓝白系统进行筛选。两种方法的结合后，可以直观、简便且高效地筛选出副鸡禽杆菌基因缺失突变株。同时本发明还公开了该采用重组表达载体系统敲除副鸡禽杆菌的基因的应用。

主权项：1.一种副鸡禽杆菌基因缺失与筛选系统的构建方法，其特征在于，具体包括如下步骤：步骤10：将质粒pSJ001导入副鸡禽杆菌，经与抗性基因相对应的抗生素筛选，得到第一次同源重组的菌株；步骤20：将质粒pSJ002导入第一次重组菌株，经蓝白斑筛选系统筛选得到第二次同源重组的菌株；所述质粒pSJ001是将目的基因的上下游同源臂以及lacZ基因和抗性基因整合到pUC19载体中构建所得，质粒pSJ002是将含有目的基因的上下游同源臂的敲除盒整合到pUC19载体中构建所得。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 华南农业大学 副鸡禽杆菌基因缺失与筛选系统的构建及其应用

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