申请/专利权人：扬州大学;江苏省家禽科学研究所

申请日：2023-12-12

公开（公告）日：2024-03-12

公开（公告）号：CN117683813A

主分类号：C12N15/85

分类号：C12N15/85;C12N15/64;C12N5/10

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.03.29#实质审查的生效;2024.03.12#公开

摘要：本发明提供了DF‑1细胞中EE0.6位点敲除载体和NC_006127.4位点敲除载体，属于基因编辑技术领域。本发明通过设计靶向EE0.6序列的sgRNA和靶向NC_006127.4位点的sgRNA，设计oligo引物，将双链oligo与PX458质粒、PX461连接，获得不同的重组质粒，本发明还制备了双sgRNA敲除载体，并将不同的重组质粒导入DF‑1细胞中，获得了不同的EE0.6位点和NC_006127.4的敲除载体，并进行了敲除效率验证。结果表明，DF‑1细胞中EE0.6位点敲除载体以及NC_006127.4位点敲除载体构建成功，为DF‑1细胞外源靶基因高效整合奠定了基础。

主权项：1.一种DF-1细胞中EE0.6位点敲除载体，其特征在于，所述DF-1细胞中EE0.6位点敲除载体的制备包括如下步骤：1设计三条靶向EE0.6序列的sgRNA，为EE0.6-sg1、EE0.6-sg2、EE0.6-sg3，EE0.6-sg1、EE0.6-sg2、EE0.6-sg3的序列如SEQIDNO.4～SEQIDNO.6所示；2根据EE0.6-sg1、EE0.6-sg2、EE0.6-sg3的核酸序列设计oligo引物，将设计合成的oligo引物进行退火和杂交处理，得到双链oligo引物，将双链oligo引物与线性化的质粒载体连接，分别得到EE0.6-sg1、EE0.6-sg2、EE0.6-sg3敲除载体。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 扬州大学;江苏省家禽科学研究所 DF-1细胞中EE0.6位点敲除载体和NC_006127.4位点敲除载体

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