申请/专利权人：鲁东大学;烟台海育海洋科技有限公司

申请日：2023-12-08

公开（公告）日：2024-03-12

公开（公告）号：CN117378599B

主分类号：A01N1/02

分类号：A01N1/02;C12N5/076

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.12#授权;2024.01.30#实质审查的生效;2024.01.12#公开

摘要：本发明公开了一种太平洋牡蛎四倍体精子的超低温冻存和激活方法，属于精子超低温保存技术领域。其中，本发明采用液氮面直接降温的方法冻存四倍体精子，操作简便、效率高，适宜大规模冻存精子，完全可以满足实际生产的需要；本发明采用二步升温的方法复苏冻存的四倍体精子，冻存的精子温度在30s内即可迅速达到25℃，有效防止了因冰晶生成而引起的细胞损伤。在冻存四倍体精子时，使用了由基础液、质膜保护剂和微管稳定剂组成的精子冷冻保存液，有效保护了四倍体精子；在激活四倍体精子时，使用了由基础液、钙镁离子和二甲双胍组成的精子激活液，有效保证了四倍体精子的活力。

主权项：1.一种太平洋牡蛎四倍体精子的超低温冻存方法，其特征在于，包括以下步骤：Step1：挑选肥满且精子活跃度佳的四倍体太平洋牡蛎置于4℃冷藏；Step2：用蒸馏水配制基础液，各物质的浓度分别如下：NaCl8gL，KCl0.4gL，Na2HPO4·2H2O0.1gL，KH2PO40.1gL，NaH2PO4·H2O0.1gL，NaHCO30.35gL；Step3：用基础液配制精子冷冻保存液，各物质的浓度分别如下：肌肽5.0mmolL，脯氨酸50mmolL，6-DMAP1.5mmolL；Step4：用基础液配制精子激活液，各物质的浓度分别如下：CaCl20.14gL，MgSO4·7H2O0.20gL，二甲双胍300μmolL；Step5：将四倍体太平洋牡蛎的雄性生殖腺挤成浆状，除杂后置于冻存管中，并向冻存管中加入预冷的精子冷冻保存液，混匀后4℃平衡20min；Step6：向保温罐中加入液氮，将装有四倍体精子的冻存管置于保温罐中，熏蒸20min；Step7：向保温罐中继续加入液氮，再熏蒸10min；Step8：打开保温盖，迅速将冻存管从保温罐中取出并装入液氮罐中存储。

全文数据：

权利要求：

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