申请/专利权人:重庆医科大学附属口腔医院
申请日:2021-05-31
公开(公告)日:2024-03-12
公开(公告)号:CN113322230B
主分类号:C12N5/0775
分类号:C12N5/0775;A61L27/38
优先权:
专利状态码:有效-授权
法律状态:2024.03.12#授权;2021.09.17#实质审查的生效;2021.08.31#公开
摘要:本发明涉及细胞外泌体制备技术领域,具体涉及一种牙髓干细胞外泌体及其制备方法和应用。牙髓干细胞外泌体的制备方法,包括以下依次进行的步骤:将牙髓间充质细胞悬液与低熔点琼脂糖溶液混合,获得混合物,然后将混合物接种在培养容器中,经过预培养和诱导培养后获得含有外泌体的上清液;提取上清液中的外泌体。本方案的制备方法解决采用现有技术方法获得的外泌体治疗的效果有限的技术问题。在本方案获得的外泌体中,miR‑302abcd家族和miR‑24‑3p等miRNA的表达量得以显著提升,使用三维培养牙髓间充质细胞获得的外泌体具有较为显著的治疗应用潜能。
主权项:1.一种牙髓干细胞外泌体的制备方法,其特征在于:将牙髓间充质细胞悬液与低熔点琼脂糖溶液混合,获得混合物;所述混合物中的牙髓间充质细胞经过预培养和诱导培养,获得含有外泌体的上清液;牙髓间充质细胞悬液与低熔点琼脂糖溶液的体积比为1:1;所述低熔点琼脂糖溶液中低熔点琼脂糖的质量分数为1.5%;所述牙髓间充质细胞悬液中牙髓间充质细胞的浓度为106个ml;所述预培养的方法如下:待所述混合物结胶后,加入含有胎牛血清的α-MEM培养基,然后培养2-3天;所述诱导培养的方法如下:预培养结束后,将含有胎牛血清的α-MEM培养基替换为不含胎牛血清的α-MEM培养基,然后培养24-48h,收集上清;所述牙髓间充质细胞悬液中含有P3-P6代牙髓间充质细胞。
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