申请/专利权人：苏州索真生物技术有限公司

申请日：2023-11-23

公开（公告）日：2024-03-15

公开（公告）号：CN117701553A

主分类号：C12N15/10

分类号：C12N15/10;C12Q1/6806

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.02#实质审查的生效;2024.03.15#公开

摘要：本发明公开一种有效提取过量尿液样本中ctDNA的方法，包括提取、纯化和ctDNA保存。1）离子交换色谱富集尿液样本ctDNA。利用净表面电荷和pH间的差异对核酸分子进行分离，可将尿液上样量提高至百毫升级别，从而提高样本ctDNA的量；2）二氧化硅吸附柱纯化ctDNA。利用二氧化硅膜在特定盐离子浓度缓冲液中结合DNA的能力，对少量ctDNA进行纯化；3）优化的尿液ctDNA保存液，用于长期保存小片段核酸分子。本发明提取的尿液ctDNA完整性高，包括约80bp的小片段ctDNA，且尿液ctDNA中基因突变信息与肿瘤组织检测结果高度一致，为实现液体无创活检提供提供有效的、高质量的ctDNA来源。

主权项：1.一种有效提取过量尿液样本中ctDNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）离子交换色谱富集尿液样本ctDNA：尿液样本离心取上清液以去除基因组DNA，向上清液中加入阴离子交换树脂，充分混匀后离心得到沉淀的树脂；用低盐-乙酸钠缓冲液一重新悬浮树脂，并转移至干净的离心管中，反复清洗树脂三次，离心弃上清液，得到尿液样本富集后的核酸；2）二氧化硅吸附柱纯化ctDNA：向步骤1）中清洗完毕的树脂中加入高盐-乙酸钠缓冲液二重新悬浮树脂并离心，将得到的上清液转移至另一干净的离心管中，并向其中加入无水乙醇，用于沉淀核酸分子；将处理后的溶液转移至二氧化硅吸附柱中，离心使核酸吸附在二氧化硅膜上；使用高盐-乙醇缓冲液三过柱清洗三次，以有效去除溶液内的有机分子和杂质；再使用乙酸钠-乙醇缓冲液四过柱清洗三次；空转离心吸附柱，甩干膜上残留液体；向膜中央加入洗脱液，离心后得到纯化的尿液样本ctDNA。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 苏州索真生物技术有限公司 一种有效提取过量尿液样本中ctDNA的方法

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