申请/专利权人：徐州医科大学

申请日：2023-11-27

公开（公告）日：2024-03-15

公开（公告）号：CN117701608A

主分类号：C12N15/70

分类号：C12N15/70;C07K14/81;C07K1/30;C12R1/19

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.02#实质审查的生效;2024.03.15#公开

摘要：本发明公开了一种人ADAM10pro‑domain大肠杆菌表达的优化方法，根据密码子的简并性，将ADAM10pro‑domain序列进行密码子优化，通过同义突变替换掉ADAM10pro‑domain天然序列中的稀有密码子，且通过同义突变平衡编码序列的GC含量，先使用10％‑25％的过饱和硫酸铵预沉淀杂质，再使用30％‑50％的过饱和硫酸铵沉淀ADAM10pro‑domain重组蛋白。本发明翻译的ADAM10蛋白含有一个20kD的pro‑domain，该结构域与ADAM10蛋白酶活性中心结合，抑制ADAM10的蛋白酶活性。当ADAM10活化时，ADAM10的pro‑domain被切除，形成具有蛋白酶活性的ADAM10活性形式。ADAM10的pro‑domain被切割下来后形成可溶性蛋白，仍然保留了与ADAM10活性中心结合的能力，是ADAM10内源性的抑制剂。因此，给予外源性重组表达的ADAM10pro‑domain蛋白是一个行之有效的抑制ADAM10活性的策略。

主权项：1.一种人ADAM10pro-domain大肠杆菌表达的优化方法，其特征在于，所述优化方法是通过同义突变替换掉ADAM10pro-domain天然序列中的稀有密码子，且通过同义突变平衡编码序列的GC含量；所述ADAM10pro-domain编码序列的优化位点包括精氨酸ATG→CGCCGT、谷氨酰胺CAA→CAG、天冬酰胺AAT→AAC、酪氨酸TAT→TAC、亮氨酸TTA→CTG、亮氨酸CTA→CTG、天冬氨酸GAT→GAC、天冬氨酸GAC→GAT、丙氨酸GCC→GCG、丙氨酸GCA→GCG、精氨酸AGA→CGT、精氨酸CGA→CGT、精氨酸AGG→CGT、苯丙氨酸TTT→TTC、苯丙氨酸TTC→TTT、苏氨酸ACA→ACC、苏氨酸ACC→ACG、苏氨酸ACT→ACC、缬氨酸GTA→GTG、缬氨酸GTT→GTG、谷氨酸GAA→GAG、甘氨酸GGA→GGC、甘氨酸GGT→GGC、甘氨酸GGG→GGT、脯氨酸CCA→CCG、脯氨酸CCC→CCG、脯氨酸CCT→CCG、组氨酸CAT→CAC、丝氨酸GCA→GCT、精氨酸AGG→CGT、精氨酸AGA→CGCCGT、赖氨酸AAA→AAG和精氨酸AGG→AGACGT；所述优化是使用10％-25％的过饱和硫酸铵预沉淀杂质，使用30％-50％的过饱和硫酸铵沉淀ADAM10pro-domain重组蛋白。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 徐州医科大学 一种人ADAM10 pro-domain大肠杆菌表达的优化方法

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