申请/专利权人：湖北翔睿生态农业科技有限公司;湖北省农业科学院经济作物研究所

申请日：2023-12-27

公开（公告）日：2024-03-15

公开（公告）号：CN117694245A

主分类号：A01H4/00

分类号：A01H4/00

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.05.10#实质审查的生效;2024.03.15#公开

摘要：本发明公开了一种佛手山药组培苗快速繁殖方法，涉及植物组织培养技术领域。包括以下步骤：（1）切取带节茎段；（2）带节茎段酒精消毒；（3）诱导愈伤组织及不定芽形成；（4）带芽材料继代培养；（5）：继代后的不定芽生根；（6）茎尖带伤侧芽形成带愈伤团的丛生芽；（7）：切下单个丛生芽，转入培养基中继续形成带愈伤团的丛生芽；（8）循环往复步骤（6）和（7），实现佛手山药组培苗快速繁殖。本方法优化了佛手山药试管苗快速扩繁工艺，通过研究不同植物生长调节剂浓度配比、不同褐化抑制剂浓度配比对佛手山药快速扩繁的影响，解决了佛手山药组培苗扩繁系数低的问题，扩繁系数达到4.2，提高了佛手山药的繁殖效率。

主权项：1.一种佛手山药组培苗快速繁殖方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤（1）、取材：以田间生长的佛手山药茎蔓顶端10cm左右的幼嫩部分为试材，并将佛手山药茎蔓顶端10cm的幼嫩部分进行切断，剪成3cm左右的带节茎段；步骤（2）、茎段消毒：先用自来水将带节茎段冲洗干净，用纱布轻轻擦干，然后在超净工作台上，按下列程序消毒：用75%的酒精浸润30-60s，无菌水冲洗1次；步骤（3）、培养愈伤组织和不定芽：选用MS培养基，将无菌佛手山药茎段放置在MS培养基内，并且选用6-BA与NAA组合、ZT与NAA组合，以及30gL蔗糖、5gL琼脂、pH5.8置于MS培养基中，促进佛手山药诱导愈伤组织及不定芽，30-40天后依次统计形成愈伤组织频率和形成不定芽频率；形成愈伤组织频率=形成愈伤的材料数试验材料数×100%；形成不定芽频率=形成不定芽的材料数试验材料数×100%；步骤（4）、不同植物生长调节剂配比对佛手山药不定芽增殖的影响：将步骤（3）中诱导出的带芽材料转入继代培养基中，以MS为基本培养基，添加不同浓度的6-BA和NAA组合，以及30gL蔗糖、5gL琼脂、pH5.8，研究不同植物生长调节剂配比对佛手山药不定芽增殖的影响，培养45天后观察不定芽的生长情况，计算出增殖系数；步骤（5）、佛手山药不定芽生根试验：将继代培养后3cm左右的佛手山药不定芽转入MS附加不同浓度的NAA或IBA的生根培养基中培养，30天后观察生根状态，计算出生根率；生根率=生根的不定芽数接种的不定芽数×100%；步骤（6）、佛手山药组织培养中褐化现象控制研究：以MS+BA0.2mgL+NAA0.02mgL+蔗糖30gL+琼脂5gL，pH5.8为基本培养基，分别添加100、150、200mgL的聚乙烯吡咯烷酮PVP或0、50、100、200mgL的维生素CVC，将获得的无菌佛手山药1cm左右的带节切段分别置于上述培养基中，观察不同培养基对佛手山药切段生长的褐化现象的影响；步骤（7）、带伤的侧芽培养：将佛手山药的茎尖带伤的侧芽放置在MS培养基中进行培养，带伤的侧芽继续增殖，从而使带伤的侧芽的侧芽在增殖后形成带愈伤团的丛生芽；步骤（8）、丛生芽培养：将步骤7中的带愈伤团的丛生芽上切下单个丛生芽，将单个丛生芽放置在步骤（7）中的培养基中继续培养，继而形成带愈伤团的丛生芽；步骤（9）、重复操作：将步骤（8）中培养得出的带愈伤团的丛生芽中继续切下单个丛生芽，继续放置在放置在步骤（7）中的培养基中培养，循环往复，从而实现对佛手山药组培苗快速繁殖，繁殖系数可达4.2。

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