申请/专利权人：山东新时代药业有限公司

申请日：2021-12-31

公开（公告）日：2024-03-15

公开（公告）号：CN114350588B

主分类号：C12N1/38

分类号：C12N1/38;C12N1/20;C12P21/02;C12R1/19

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.15#授权;2022.05.03#实质审查的生效;2022.04.15#公开

摘要：本发明属于微生物发酵技术领域，特别涉及rhG‑CSF的发酵培养基及发酵方法。本发明通过优化不同时期发酵温度的控制范围和发酵pH值控制范围，改变基础培养基碳源的添加时间，优化培养基配比和补料量，限制性流加补料，低浓度的IPTG与乳糖协同诱导，更有利于rhG‑CSF发酵的高密度高表达。发酵结束，发酵密度OD600值达到100以上，发酵目的蛋白表达量达到77％以上，质粒丢失率在4％以内，本发明的rhG‑CSF高密度发酵提高了生产效率，具有很好的应用前景。

主权项：1.一种用于生产rhG-CSF的发酵方法，其特征在于，具体技术方案如下：I.将工程菌菌种在种子培养基中逐级放大，获得种子液；II.将种子液接种至不含碳源的基础培养基中进行高密度培养，培养2-4h后流加碳源至发酵体系中，并控制2-4h流加完毕，分批次流加补料培养基至培养结束；其中，所述分批次流加补料培养基为分两次流加补料培养基，当发酵体系溶氧和pH同步上升时第一次流加补料培养基1；第一次补料结束后，当发酵液的OD600值增长至30-40时，加入诱导剂进行诱导培养；加入诱导剂后第二次流加补料培养基2；所述基础培养基中包含如下所示的组分： 其中，碳源为山梨醇或甘露醇，碳源浓度为200-600gL，碳源需要单独配制；所述补料培养基1包含如下所示的组分：山梨醇或甘露醇400-600gL，酵母提取物35-55gL，胰蛋白胨45-75gL，硫酸镁0.5-3gL；补料培养基2包含如下所示的组分：山梨醇或甘露醇200-300gL，乳糖200-300gL，胰蛋白胨45-75gL，硫酸镁0.5-3gL；所述诱导剂为IPTG；所述工程菌菌种为pET-G-CSFBL21（DE3）PlysS。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 山东新时代药业有限公司 一种rhG-CSF的发酵培养基及其发酵方法

免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。

阅读全文 双屏查看 官方信息 专利公告 收藏专利 下载PDF 下载WORD