申请/专利权人：态创生物科技(广州)有限公司;广州市乾相生物科技有限公司

申请日：2022-09-22

公开（公告）日：2024-03-19

公开（公告）号：CN117721130A

主分类号：C12N15/70

分类号：C12N15/70;C12N9/22;C12N9/12;C07K14/005;C07K14/32;C12N15/33;C12N15/31;C12N15/54;C07K19/00

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.05#实质审查的生效;2024.03.19#公开

摘要：本申请是202211157671.X的分案申请。本发明公开了一种体内靶向诱变的系统，由位点特异性DNA切口酶和低保真性DNA聚合酶组成，切口酶和低保真性DNA聚合酶通过二聚化短肽组装在一起。位点特异性DNA切口酶在靶位点两端结合并在靶基因方向产生缺口，通过二聚化短肽募集低保真DNA聚合酶进行靶区域基因的合成，最终产生随机的基因突变。切口酶结合位点不断募集切口酶，切口酶不断募集低保真DNA聚合酶。通过这种迭代突变的方式，可以不断地在靶基因上产生诱变。本发明具有靶向性高、靶基因突变随机、对非靶基因区域影响小、可迭代诱变、靶区域范围广和操作简单等优点，非常适用于基因功能研究和酶进化。

主权项：1.一种体内靶向诱变的系统，其特征在于包括：位点特异性切口酶；低保真性DNA聚合酶；由两个短肽组成的二聚化短肽体系；其中二聚化短肽体系中的第一短肽与位点特异性DNA切口酶形成融合蛋白，第一短肽位于位点特异性DNA切口酶的N端或C端，二聚化短肽中的第二短肽与低保真性DNA聚合酶形成融合蛋白，第二短肽位于低保真性DNA聚合酶的N端或C端；其中所述位点特异性切口酶为Cas12n蛋白变体，其氨基酸序列如SEQIDNO:9所示；所述低保真性DNA聚合酶为phi29DNA聚合酶重组蛋白变体，其氨基酸序列如SEQIDNO:13所示；所述二聚化短肽体系为RIDD短肽系统或Spy短肽系统。

全文数据：

权利要求：

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