申请/专利权人：无锡生基医药科技有限公司

申请日：2019-12-27

公开（公告）日：2024-03-19

公开（公告）号：CN111057800B

主分类号：C12Q3/00

分类号：C12Q3/00;C12P1/04;C12N15/63;C12R1/19

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.19#授权;2020.05.19#实质审查的生效;2020.04.24#公开

摘要：本发明公开一种采用饥饿发酵工艺生产基因治疗质粒的方法，包括以下步骤：1发酵罐准备：将一次性pH电极、一次性DO电极和冷却管路插入一次性罐体相应位置；发酵培养基配制好后将一次性罐体灭菌；完成发酵罐各管路的连接，设定温控系统TCU的温度并运行；2参数设置；3接种；4饥饿发酵控制。本发明的方法结合了饥饿发酵工艺和一次性全封闭式工艺，能够显著降低质粒产品中细菌宿主蛋白HCP残留含量。本发明还公开一种用于前述方法的发酵培养基，能够有效提高质粒发酵产量。

主权项：1.一种采用饥饿发酵工艺生产基因治疗质粒的方法，其特征在于，包括以下步骤：1发酵罐准备：将一次性pH电极、一次性DO电极和一次性冷却管路插入到一次性罐体相应位置；发酵培养基配制好后将一次性罐体灭菌；完成发酵罐各管路的连接，设定温控系统TCU的温度并运行；所述发酵培养基每1L发酵培养基含：大豆蛋白胨10g-20g，酵母粉5g～10g，NH42SO42g～6g，Na2HPO4·7H2O12g～24g，KH2PO42g～4g，甘油15g～30g，MgSO40.4g～0.8g，所述发酵培养基的配方中还含有适量的消泡剂，0.3～1g；2参数设置：设置工艺空气减压阀压力0.50bar；设置发酵罐参数：温度37.0℃、通气量3.0Lmin、转速200rpm；设置pH7.20±0.02开启自动控制补碱瓶进行补碱；在移除溶氧电极线时调节DO零点0％，插上电极线，设置最大转速，调节DO满度95-100％；3接种：通过接种管路接种，即通过无菌接管机将摇瓶的一次性转接盖管路与发酵罐连接，将摇瓶中菌液泵入发酵罐，用并无菌封管机封闭管路；4饥饿发酵控制：将溶氧DO与转速关联控制，控制DO≥20％，设置最小转速200rpm为初始转速，最大转速1200rpm，开启DO自动控制；定义接种时间为0小时，当培养至3.5h，开始补料，设定补料泵速度0.2mlmin；5.5小时后，补料速度提高至0.4mlmin；14小时后停止补料，使大肠杆菌消耗培养基中残留的营养物质；待DO上升至40％以上后，此时大肠杆菌呈现饥饿状态，停止生长，但质粒仍然保持复制状态，继续消耗大肠杆菌菌体的宿主蛋白来维持生命，继续培养20min结束发酵，此时收获。

全文数据：

权利要求：

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