申请/专利权人：云南大学

申请日：2022-08-29

公开（公告）日：2024-03-19

公开（公告）号：CN115583997B

主分类号：C08B37/00

分类号：C08B37/00;A01N43/16;A01P1/00;C12P19/04;C12R1/82

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.19#授权;2023.01.31#实质审查的生效;2023.01.10#公开

摘要：本发明公开了一种产黄青霉菌灭活菌丝体多糖及其提取方法和应用，涉及青霉菌领域，针对现有的无法分离出产黄青霉菌灭活菌丝体多糖中具体的活性成分，使得产黄青霉菌灭活菌丝体多糖的应用受到制约的问题。本发明确切公布了产黄青霉菌灭活菌丝体多糖的结构和制备方法，包括乙醇沉淀、酶解除蛋白、凝胶色谱柱分离纯化，红外光谱、高效液相色谱、核磁共振分析结构，制备的产黄青霉菌灭活菌丝体多糖对烟草花叶病毒的防治具有较好的效果，制备的产黄青霉菌灭活菌丝体多糖使得产黄青霉菌灭活菌丝体有效成分更为明确，制备方法简单，药理更为清楚，为开发天然抗病毒制剂提供了依据和方法，在天然产物抗植物病害领域具有广泛的适用性。

主权项：1.一种产黄青霉菌灭活菌丝体多糖，其特征在于，所述产黄青霉菌灭活菌丝体多糖由甘露糖、半乳糖、葡萄糖和鼠李糖组成，所述产黄青霉菌灭活菌丝体多糖分子连接方式为A片段-B片段-C片段，所述A片段、B片段和C片段分子结构如下： 其提取方法包括以下步骤：步骤一：取高温烘干的青霉菌菌丝体，按照每100g青霉菌菌丝体加入1.6L蒸馏水的比例浸泡过夜，次日100℃煮提2-4h，纱布过滤保留上清，向残渣中加入与浸泡时相同体积的蒸馏水，继续煮提2-4h，纱布过滤保留上清，合并两次提取液，浓缩体积至原体积的120，4000rpm离心15min，弃沉淀，向浓缩液中加入95％乙醇，至乙醇终浓度为80％，静置过夜，第二天用4000rpm离心15min，收集沉淀，冷冻干燥；步骤二：将步骤一得到的沉淀物质称重，按照每100g加入400mL蒸馏水的比例溶解粗沉淀物质，待沉淀物质充分溶解后，加入95％乙醇，至乙醇终浓度为60％，4℃醇沉1.5-3h，4000rpm离心15min，收集沉淀，用95％乙醇洗涤两次，无水乙醇洗涤一次，冷冻干燥沉淀；步骤三：将步骤二得到的沉淀物质称重，加入适量蒸馏水溶解直至底物浓度为10mgmL，按照酶底质量比为4％的比例加入胰蛋白酶进行酶解，30-40℃反应1h，100℃煮沸10min使酶失活，4000rpm离心15min，取上清，冷冻干燥过夜；步骤四:将步骤三冷冻干燥得到的沉淀用10倍质量的蒸馏水溶解，室温下充分搅拌至其完全溶解，将样品溶液装入截留量为3.5KDa的透析袋中，在蒸馏水中进行透析，透析4-6次，每次3h，收集透析袋内溶液，冷冻干燥；步骤五：将步骤四冷冻干燥得到的沉淀用0.5倍质量的蒸馏水溶解，室温下充分搅拌至其完全溶解，上样至已装填平衡完全的凝胶色谱柱，用0.15M的NaCl洗脱液洗脱，流速0.4mLmin，15min管，溶液将按分子量从大到小的顺序依次被洗脱下来，使用苯酚-硫酸法测定各试管中样品糖含量，收集至无糖检出，获得两级份DPS和DPS-1溶液；步骤六：将DPS溶液装入截留量为3.5KDa的透析袋中，在蒸馏水中进行透析，透析2-4次，每次3h，收集透析袋内溶液，冷冻干燥，即得到产黄青霉菌灭活菌丝体多糖活性多糖，置于干燥器中保存，备用。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 云南大学 一种产黄青霉菌灭活菌丝体多糖及其提取方法和应用

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