申请/专利权人：华东理工大学;天康制药股份有限公司

申请日：2023-11-11

公开（公告）日：2024-03-22

公开（公告）号：CN117736906A

主分类号：C12N1/20

分类号：C12N1/20;G06F17/11;G06F17/18;G16B25/20;C12R1/35

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.09#实质审查的生效;2024.03.22#公开

摘要：本发明涉及培养基领域，特别涉及一种可以提高猪肺炎支原体CJ株菌量的优化培养基，包括括猪肺炎支原体CJ株和基础Friis培养基，具体优化步骤如下：S1.建立菌量检测；S2.构建初始模型；S3.模型优化；S4.配置优化后培养基。本发明通过开发生长指数的检测方法，实现了对猪肺炎支原体的快速及定量检测，以此为基础对猪肺炎支原体的培养条件进行优化，并用qPCR方法检测毒力蛋白基因P46、P97、P116、P60的表达，获得了菌量提高，毒力蛋白表达提高的优化培养基，优化后的培养基具有检测周期短，准确性高和检测范围更广的技术效果。

主权项：1.一种可以提高猪肺炎支原体CJ株菌量的优化培养基，其特征在于，包括猪肺炎支原体CJ株和基础Friis培养基，具体优化步骤如下：S1.建立菌量检测，猪肺炎支原体CJ株为葡萄糖发酵类型，在培养基中生长时会产生酸性物质，使得酚红由红色变为黄色，从培养液颜色的变化程度来判断支原体的生长快慢，通过酶标仪进行全波长扫描，在两个波长430nm与560nm处有吸收峰，之后以黄色出现OD430和红色消失OD560定义为生长指数；S2.构建初始模型，基于pH值回归拟合的曲线，通过数据收集建立拟合方程：生长指数＝+3.42+0.042*A+0.24*B+5.580e_003*C-0.020*D-6.881e_003E；其中A为无水葡萄糖，B为接种量，C为过氧化氢酶，D为核苷酸类，E为油酸钠；S3.模型优化，设置最陡爬坡实验，得到当葡萄糖浓度为9gL，接种量为7％，核苷酸类为20μmolL时，生长指数值达到最高，以生长指数为响应值，以A:无水葡萄糖、B:接种量、C:核苷酸类为自变量，进行方差分析和二次多项回归拟合，最终得到：生长指数＝+3.81+0.017*A+0.036*B-4.106e_003*C+0.045*AB-0.023*AC-0.033*BC-0.012*A2-0.024B2-0.036*C2S4.配置优化后培养基，根据S3下优化模型，设计了包含有葡萄糖、过氧化氢酶液、核苷酸类和油酸钠的调制配比，以获得优化后的Friis培养基。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 华东理工大学;天康制药股份有限公司 一种可以提高猪肺炎支原体CJ株菌量的优化培养基

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