申请/专利权人：浙江大学

申请日：2023-12-22

公开（公告）日：2024-03-22

公开（公告）号：CN117737270A

主分类号：C12Q1/689

分类号：C12Q1/689;C12Q1/6816;C12N15/11;C12N15/113;C12R1/19

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.09#实质审查的生效;2024.03.22#公开

摘要：本发明公开了一种基于CRISPRCas12a的碳青霉烯抗性基因blaNDM检测方法，属于分子生物学领域。该方法以待测样本的blaNDM序列为模板，利用核苷酸序列如SEQIDNo.1所示的引导RNA、核苷酸序列如SEQIDNo.2所示的单链荧光探针和Cas12a蛋白进行CRISPRCas12a反应。反应在37℃恒温条件下进行，获取不同时间点的荧光信号值组成荧光曲线，并选取线性区域的斜率衡量待测样本的荧光值大小，用于定性判定或定量计算blaNDM浓度。相较于传统方法，本发明特异性强、检测速度快、对仪器依赖性低，为抗生素抗性基因现场检测提供新的技术路线。

主权项：1.一种基于CRISPRCas12a的碳青霉烯抗性基因blaNDM检测方法，其特征在于，具体方法如下：S1：采集待测样本，并提取待测样本的总DNA；S2：以所述待测样本的总DNA中的碳青霉烯抗性基因blaNDM序列为模板，利用核苷酸序列如SEQIDNo.1所示的引导RNA、核苷酸序列如SEQIDNo.2所示的单链荧光探针和Cas12a蛋白进行CRISPRCas12a反应；所述单链荧光探针5’端标记有荧光报告基团6-FAM，3’端标记有荧光淬灭基团BHQ-1；S3：所述CRISPRCas12a反应在37±0.5℃恒温条件下进行，设置荧光测量参数，获取不同时间点的荧光信号值组成的荧光曲线；选取该荧光曲线线性区域的斜率用于定性判定或定量计算blaNDM浓度。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 浙江大学 基于CRISPR/Cas12a的碳青霉烯抗性基因bla_NDM检测方法

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