申请/专利权人：西安天隆科技有限公司

申请日：2023-12-20

公开（公告）日：2024-03-22

公开（公告）号：CN117737207A

主分类号：C12Q1/6844

分类号：C12Q1/6844;G16B5/00;C12N15/11

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.09#实质审查的生效;2024.03.22#公开

摘要：本发明公开了一种DNA聚合酶链置换聚合活性的定量检测方法，通过设计链置换DNA聚合酶特异性分子信标MB，和与分子信标MB荧光量对等的探针标曲‑F1、探针标曲‑F2，利用不同浓度梯度探针和荧光增量建立标准曲线，并利用不同稀释浓度梯度的分子信标和荧光增量的关系，计算得到不同时间下不同稀释浓度链置换DNA聚合酶打开分子信标并释放荧光的分子信标量，然后建立分子信标打开量、链置换DNA聚合酶稀释倍数与时间的线性曲线，得到线性曲线的斜率K值，然后利用K值计算得到在37℃，30min打开1pmol分子信标所需的酶量。本发明的方法解决了现有技术存在的分析时间长，成本高，难以推广的问题。

主权项：1.一种DNA聚合酶链置换聚合活性的定量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：A、配置探针反应体系，以不同梯度探针浓度为横坐标，以各浓度探针荧光稳定期的平均荧光增量y1为纵坐标，建立探针摩尔量与荧光增量的标准曲线；B、配置分子信标MB反应体系，获得不同浓度梯度的链置换DNA聚合酶一定循环数对应的平均荧光增量y2，将荧光增量y2带入步骤A中的标准曲线，计算得到不同反应时间下，不同浓度梯度对应稀释倍数的链置换DNA聚合酶打开的分子信标MB量；C、获得一定循环数内对应时间点打开的分子信标量与1链置换DNA聚合酶不同稀释倍数的“S”型散点图，选取“S”型散点图中近线性区域以及不同实验间变异系数最小对应的时间区域，作为链置换DNA聚合酶聚合活性定量的分析范围，建立该分析范围内不同时间点下打开的分子信标量与链置换DAN聚合酶不同稀释倍数之间的多条线性曲线，其中线性曲线以1链置换DNA聚合酶稀释倍数为横坐标，以对应打开的分子信标量为纵坐标，1链置换DNA聚合酶稀释倍数表示为：链置换DNA聚合酶稀释倍数的倒数；D、以时间为横坐标，以步骤C中获得的多条线性曲线斜率为纵坐标进行线性拟合，获得“打开分子信标量”*“链置换DNA聚合酶稀释倍数”与时间之间的线性曲线，其中线性曲线的斜率为K，所述K的单位为：分子信标量*链置换DNA聚合酶的稀释倍数时间；E、链置换DNA聚合酶酶活计算，1μL待测酶的酶活＝K*酶活定义时间体系加样体积。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 西安天隆科技有限公司 一种DNA聚合酶链置换聚合活性的定量检测方法

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