申请/专利权人:大连晶泰生物技术有限公司
申请日:2023-12-21
公开(公告)日:2024-03-22
公开(公告)号:CN117737198A
主分类号:C12Q1/6806
分类号:C12Q1/6806;C12Q1/6886;C12Q1/686;C12Q1/6869;C40B50/06;C12N15/11
优先权:
专利状态码:在审-实质审查的生效
法律状态:2024.04.09#实质审查的生效;2024.03.22#公开
摘要:本发明公开了一种甲基化特异性单端锚定多重PCR扩增子文库的构建方法和试剂盒,属于分子生物学领域。本发明利用分子标签和通用序列组成的短Y接头、特异性甲基化捕获引物和带有Index的适用于测序平台的富集引物组成的引物组构建了适用于甲基化突变位点检测的多重PCR文库构建方法。本发明设计了与结直肠癌密切相关的9个抑癌基因启动子区域的甲基化突变捕获引物组合,使用该引物组合可精准筛选结直肠癌相关基因甲基化突变位点。本发明的甲基化特异性单端锚定多重PCR建库方法具有灵敏度高,简便快捷的特点,提高了模板分子的利用率并降低了背景噪音,大幅提高了结直肠癌筛查的灵敏度和特异性,降低了结直肠癌筛查的操作难度,增加了准确性。
主权项:1.一种甲基化特异性单端锚定多重PCR扩增子文库的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:1提取血浆游离DNA样本,通过末端修复、末端加A,连接短Y接头后纯化;2将步骤1得到的产物经重亚硫酸盐处理,纯化回收;3根据所选的目标基因区域设计相应的甲基化特异性单端锚定PCR引物,对步骤2得到的产物进行甲基化特异性单端锚定多重PCR捕获;4将步骤3得到的产物进行第二轮PCR扩增富集,即得甲基化特异性单端锚定多重PCR扩增子文库。
全文数据:
权利要求:
百度查询: 大连晶泰生物技术有限公司 一种甲基化特异性单端锚定多重PCR扩增子文库的构建方法和试剂盒
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