申请/专利权人：广州华大基因医学检验所有限公司;深圳华大基因股份有限公司;深圳华大医学检验实验室

申请日：2019-11-14

公开（公告）日：2024-03-22

公开（公告）号：CN112795990B

主分类号：C40B80/00

分类号：C40B80/00;C40B50/06;C12Q1/6806;C12N15/10;G16B20/50

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.22#授权;2024.03.12#著录事项变更;2021.06.01#实质审查的生效;2021.05.14#公开

摘要：本发明公开了一种灵活多变的降低污染及PCR偏倚的多标签二代测序文库接头。本发明提供了接头，由DNA单链A5’端到3’端依次为前导区、随机标签、固定区、标签1和引物1结合区和DNA单链B5’端到3’端依次为固定区1、引物2结合区、固定区2、标签2和前导区退火形成。本发明能为二代测序的DNA文库加入多个标签序列，大大提高样本间的分辨率。同时能为每个插入片段加入唯一序列，可识别原始插入片段及PCR复制子。因此本发明能解决病原微生物筛查中由于单标签污染导致的假阳性以及突变检测中的由于PCR扩增导致的突变比例偏移。所有本发明在病原微生物检测、肿瘤基因检测、单基因病检测等领域均具有较大的应用价值。

主权项：1.接头，由DNA单链A和DNA单链B退火形成；所述DNA单链A由5’端到3’端依次由前导区A、随机标签、固定区、标签1和引物1结合区组成；所述DNA单链B由5’端到3’端依次由固定区1、引物2结合区、固定区2、标签2和前导区B组成；所述DNA单链B中的所述固定区1和所述固定区2分别能够与所述DNA单链A中的所述固定区靠近3’端和靠近5’端的部分反向互补；所述DNA单链B中的所述引物2结合区与所述DNA单链A中的所述固定区不匹配；所述DNA单链B中的所述前导区B与所述DNA单链A中的所述前导区A反向互补，且所述前导区A的5’末端核苷酸经磷酸化修饰，所述前导区B的3’末端多出一个游离的核苷酸T；所述随机标签为若干个连续的N组成的寡核苷酸，每个N均为A、T、C或G；在所述DNA单链A中，所述前导区A的长度为6-9nt；所述随机标签的长度为6-10nt；所述固定区的长度为27-37nt；所述标签1的长度为6-10nt；所述引物1结合区的长度为15-23nt；在所述DNA单链B中，所述固定区1的长度为10-18nt；所述引物2结合区的长度为15-23nt；所述固定区2的长度为5-12nt；所述标签2的长度为6-10nt；所述前导区B的长度为6-10nt。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 广州华大基因医学检验所有限公司;深圳华大基因股份有限公司;深圳华大医学检验实验室 一种灵活多变的降低污染及PCR偏倚的多标签二代测序文库接头

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