申请/专利权人：华中农业大学

申请日：2023-09-11

公开（公告）日：2024-03-22

公开（公告）号：CN117143924B

主分类号：C12N15/867

分类号：C12N15/867;C12N7/01;A61K39/12;A61K39/245;A61K39/295;A61K39/23;A61P31/22;A61P31/20;A61P31/14

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.22#授权;2023.12.19#实质审查的生效;2023.12.01#公开

摘要：本发明公开了共表达猫杯状病毒和猫细小病毒抗原蛋白的重组猫疱疹病毒及其活载体疫苗和应用，属于动物生物制品和病毒学技术领域，本发明公开了该重组猫疱疹病毒的构建方法，包括以下步骤：利用同源重组和PCR扩增方法，获得TKhm1‑VP2‑TKhm2和gIhm1‑VP1‑gEhm2同源重组片段；将同源重组片段转染至CRFK稳转细胞系，将转染细胞感染rWH2020‑△TKgIgE‑EGFP+‑mCherry+毒株即可。本发明构建的重组猫疱疹病毒的活载体疫苗可防控猫细小、猫杯状病毒病和猫传染性鼻气管炎，能大大减少猫只免疫次数，降低免疫成本，对提升养猫业经济效益和宠物福利意义重大，具有良好的应用前景。

主权项：1.一种共表达猫杯状病毒和猫细小病毒抗原蛋白的重组猫疱疹病毒的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：分别获取FCV病毒的VP1基因、FPV病毒的VP2基因以及FHV-1病毒的TK左右侧同源臂TKhm1、TKhm2和gI、gE同源臂gIhm1、gEhm2，利用同源重组和PCR扩增方法，获得TKhm1-VP2-TKhm2和gIhm1-VP1-gEhm2片段；依据CMV、polyA基因的sgRNA引物，利用CRISPR基因编辑方法构建CMV、polyA基因的sgRNA表达载体，转染、收取慢病毒、感染CRFK细胞，获得CRFK稳转细胞系；将TKhm1-VP2-TKhm2和gIhm1-VP1-gEhm2片段转染至CRFK稳转细胞系，得到转染细胞，将转染细胞感染rWH2020-△TKgIgE-EGFP+-mCherry+毒株，得到共表达猫杯状病毒和猫细小病毒抗原蛋白的重组猫疱疹病毒；所述TKhm1-VP2-TKhm2片段的核苷酸序列如SEQIDNO：1所示，所述gIhm1-VP1-gEhm2片段的核苷酸序列如SEQIDNO：2所示；所述sgRNA引物的核苷酸序列如SEQIDNO：3-6所示。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 华中农业大学 共表达猫杯状病毒和猫细小病毒抗原蛋白的重组猫疱疹病毒及其活载体疫苗和应用

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