申请/专利权人：江苏省海洋水产研究所

申请日：2021-12-30

公开（公告）日：2024-03-22

公开（公告）号：CN114480666B

主分类号：C12Q1/6888

分类号：C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.22#授权;2022.05.31#实质审查的生效;2022.05.13#公开

摘要：本发明涉及一种区分黑鲷鱼及其两种杂交子代的ISSR分子标记方法，包括利用2个ISSR分子标记对黑鲷及2个杂交新品系的个体进行PCR扩增，根据对PCR产物的电泳条带检测，区分来自黑鲷、杂交子代及回交子代等3种鲷鱼的个体。本发明方法操作简便，费用低，准确度高且通用性好，能快速、有效地鉴别基于黑鲷的不同亲本组合所得的杂交种新品系，为黑鲷新品种培育研究和杂交新种质的鉴别研究提供技术帮助。

主权项：1.一种区分黑鲷鱼及其两种杂交子代的ISSR分子标记方法，包括：（1）分别提取黑鲷、回交及杂交子代3个种质个体的总DNA，4℃以下保存备用；其中，杂交子代为黑鲷♀×真鲷♂反交F1，记作HF1；回交后代为黑鲷♀×HF1，记作BF1；（2）采用ISSR-UBC846、ISSR-UBC847引物对上述总DNA进行PCR扩增；其中，所述ISSR-UBC846的序列为：CACACACACACACACART；所述ISSR-UBC847的序列为：CACACACACACACACARC；所述PCR扩增反应体系为：10pmolL引物1μl，DNA模板1.5μl，Buffer2.5μl，dNTP0.5μl，Mg2+1.5μl，Taq聚合酶0.25μl，添加ddH2O至25μl；所述PCR扩增反应条件为：94℃预变性5min，然后进入循环：94℃45s，56℃45s，72℃45s，共36个循环，最后一个循环结束后再在72℃继续延伸10min，4℃保存；（3）凝胶电泳检测PCR产物的DNA条带情况，其中引物ISSR-UBC847的PCR扩增产物的电泳图谱中，黑鲷个体在750~1000bp间仅有一扩增带，而其它两种鱼的个体无此扩增带；而在引物ISSR-UBC846的PCR扩增产物的电泳图谱中，反交鱼个体无扩增带，其它两种有，据此鉴别出黑鲷、回交或杂交子代的个体。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 江苏省海洋水产研究所 一种利用ISSR分子标记区分黑鲷鱼及其两种杂交子代的方法

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