申请/专利权人：天津市农业科学院

申请日：2022-10-19

公开（公告）日：2024-03-22

公开（公告）号：CN115322914B

主分类号：C12N1/19

分类号：C12N1/19;C12N15/81;C12N15/56;C12N15/12;A61K38/17;A61K38/47;A61P31/04;C12R1/84

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.22#授权;2022.11.29#实质审查的生效;2022.11.11#公开

摘要：本发明公开了共表达石斑鱼c型溶菌酶（Ec‑cLYZ）及蜂毒肽（MEL）重组毕赤酵母菌株的构建方法及抗菌活性。将目的基因Ec‑cLYZ和MEL序列用T2A连接肽连接，克隆至载体pPICZαA，获得高效稳定表达的重组质粒pPICZαA‑Ec‑cLYZ‑MEL；将测序和验证正确的重组质粒用限制性内切酶SacI单酶切线性化，电转化至毕赤酵母表达菌株GS115内，筛选得到高效表达的Mut+菌株；利用0.5%甲醇诱导表达以及His‑tag蛋白纯化试剂盒纯化；利用溶血性试验评价其的溶血活性；通过测定重组蛋白的抑菌率，牛津杯法测定重组蛋白对实验菌株的抑菌圈直径，评价重组蛋白的抑菌活性。

主权项：1.一种共表达石斑鱼c型溶菌酶Ec-cLYZ基因和蜂毒肽MEL基因的重组毕赤酵母表达菌株GS115pPICZαA-Ec-cLYZ-MEL，所述重组毕赤酵母表达菌株GS115pPICZαA-Ec-cLYZ-MEL以毕赤酵母GS115为出发菌株并含有Ec-cLYZ-MEL基因，所述Ec-cLYZ-MEL基因的核苷酸序列如SEQIDNO.9所示。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 天津市农业科学院 一种Ec-cLYZ和MEL基因共表达重组毕赤酵母的构建方法及应用

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