申请/专利权人：重庆交通大学

申请日：2022-08-18

公开（公告）日：2024-03-22

公开（公告）号：CN115141755B

主分类号：C12N1/12

分类号：C12N1/12;C12N1/02;C12R1/89

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.22#授权;2022.10.25#实质审查的生效;2022.10.04#公开

摘要：本发明公开了一种气生微藻的分离培养方法，其特征在于，先制备富含无机营养源和有机碳源的培养液，基于该培养液获得液体培养基和固体培养基，利用液体培养基进行富集培育和扩大培养，再采用固体培养基进行反复的分离纯化培养，再挑选特征一致性好的藻斑外围转移到液体培养基中进行增殖培养后进行纯种检测。本发明能够更好地从自然环境中分离出气生微藻目标物，能够有效促进气生微藻的生长，减小细菌、真菌的影响，从而有效分离纯化气生微藻。

主权项：1.一种气生微藻的分离培养方法，其特征在于，先制备富含无机营养源和有机碳源的培养液，基于该培养液获得液体培养基和固体培养基，利用液体培养基进行富集培育和扩大培养，再采用固体培养基进行反复的分离纯化培养，再挑选特征一致性好的藻斑外围转移到液体培养基中进行增殖培养后进行纯种检测；本方法具体包括以下步骤：a制备培养液备用，培养液包含有无机营养源成分和有机碳源成分，无机营养源成分包括有离子态的钠、钾、镁、钙、铁、硼、锰、锌、铜和钴元素；b富集培养，采集待培养目标的气生微藻，采用无菌水对采集的气生微藻样品进行清洗，获得气生微藻溶液，添加培养液进行增殖培养，获得气生微藻增殖后的藻液；c气生微藻扩大培养，取部分富集培养后的藻液，添加较大比例的培养液进行增殖培养，得到较高浓度的藻液；d气生微藻接种培养，在a步骤制得的培养液中添加琼脂，制得固体培养基，将c步骤获得的藻液，采用无菌水进行至少一次稀释后涂布接种到固体培养基表面，进行增殖培养，在固体培养基上得到肉眼可见的气生微藻群落；e气生微藻纯化培养，在d步骤获得的气生微藻群落中，挑选部分具有特征一致性的藻斑外围，采用无菌水稀释后在新的固体培养基表面进行划线，待长出藻斑后，挑选部分特征一致性好的藻斑外围转移到新的装有液体培养液的锥形瓶中进行增殖培养，待微藻在培养液中充分增殖后，采用无菌水稀释培养藻液，在新的固体培养基表面进行划线，重复以上步骤至少三次；再将重复增殖培养获得的气生微藻群落中，挑选部分特征一致性好的藻斑外围转移到新的装有液体培养液的器皿中进行增殖培养；f纯种检查，吸取部分e步骤获得的藻液，通过肉眼观察和或显微镜观察，需分离培养气生微藻含量大于预定值，则培养合格；培养液制备过程中，添加成分包括硝酸钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、EDTA、七水硫酸镁、二水氯化钙、柠檬酸铁铵、碳酸钠、硼酸、一水氯化锰、七水硫酸锌、五水硫酸铜、二水钼酸钠、六水硝酸钴和无水葡萄糖；培养液中各成分含量浓度为，硝酸钠浓度为1.5gL，磷酸二氢钾0.04gL、磷酸氢二钾0.088gL，EDTA0.001gL、七水硫酸镁0.075gL、二水氯化钙0.036gL、柠檬酸铁铵0.0006gL、碳酸钠0.02gL、硼酸0.00286gL、一水氯化锰0.00181gL、七水硫酸锌0.000222gL、五水硫酸铜0.000079gL、二水钼酸钠0.00039gL、六水硝酸钴0.000049gL、无水葡萄糖0.01gL；a步骤中，采用部分培养液进行浓缩获得补料备用；e步骤中，每次稀释后加入部分补料，控制培养体系中总氮含量不低于200mgL；各步骤中，增殖培养时，在光照强度9000-10000lux，光暗比=16：8，温度25-28℃的光照培养箱中实现，培养过程中每12h用紫外光照射1h，并通入3-5%二氧化碳含量的混合无菌空气作为呼吸气体。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 重庆交通大学 一种气生微藻的分离培养方法

免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。

阅读全文 双屏查看 官方信息 专利公告 收藏专利 下载PDF 下载WORD