申请/专利权人：北京市农林科学院

申请日：2023-12-21

公开（公告）日：2024-03-26

公开（公告）号：CN117757839A

主分类号：C12N15/84

分类号：C12N15/84;A01H4/00;A01H5/00;A01H6/00

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.12#实质审查的生效;2024.03.26#公开

摘要：本发明公开了杨树良种‘森海2号’根癌农杆菌遗传转化体系的方法建立。本发明属于植物学领域，具体涉及杨树良种‘森海2号’根癌农杆菌遗传转化体系的方法建立。本发明的根癌农杆菌介导的杨树遗传转化方法，包括如下：M1用含有目的DNA的重组根癌农杆菌侵染杨树‘森海2号’的外植体得到侵染的外植体；M2培养所述侵染的外植体得到外源基因表达的杨树‘森海2号’转基因植株；M3培养所述转基因植株完成杨树遗传转化。通过优化影响农杆菌转化的关键因子，建立了杨树良种‘森海2号’根癌农杆菌介导的遗传转化体系，为‘森海2号’抗逆抗虫害优良新品种的培育提供技术支撑。

主权项：1.根癌农杆菌介导的杨树遗传转化方法，包括M1和M2和M3：M1用含有目的DNA的重组根癌农杆菌侵染杨树‘森海2号’的外植体得到侵染的外植体；所述杨树‘森海2号’的外植体按照包括如下步骤的方法制备：将杨树‘森海2号’的叶片从垂直主脉方向一分为二，留主脉清晰的上段，将所述叶片叶边缘去除，得到所述杨树‘森海2号’的外植体；M2培养所述侵染的外植体得到外源基因表达的杨树‘森海2号’转基因植株；M3培养所述转基因植株完成杨树遗传转化；所述M2包括如下A1-A5步骤：A1共培养所侵染的外植体，得到共培养的外植体；A2将所述共培养的外植体进行恢复培养，得到恢复培养的外植体；A3将所述恢复培养的外植体进行分化培养得到抗性丛生芽；A4将所述抗性丛生芽进行生根培养得到已生出根的杨树幼苗转基因抗性植株；A5将所述杨树幼苗转基因抗性植株进行培养得到所述外源基因稳定表达的杨树转基因植株；所述侵染为将所述外植体在所述含有农杆菌的侵染培养液的侵染培养基中振荡培养15min，所述侵染培养基为以12MS基本培养基为基础培养基，向该基础培养基中添加MES、肌醇、谷氨酰胺、D+-半乳糖、AS和FV维他命得到的液体培养基，侵染培养基中MES的浓度为0.25gL，肌醇的浓度为0.1gL，谷氨酰胺的浓度为0.2gL，D+-半乳糖的浓度为1.8gL，AS的浓度为100μM，FV维他命的浓度为10mlL；其中所述FV维他命由水和溶质组成，所述溶质及其浓度为：烟酸浓度为0.1gL、烟酸吡哆醇浓度为0.1gL、泛酸钙浓度为0.1gL、盐酸硫胺浓度为0.1gL、L-半胱氨酸浓度为0.1gL和生物素浓度为5mlL；所述共培养为将所侵染的外植体在共培养基上培养，所述共培养基为以MS基本培养基为基础培养基，向该基础培养基中MES、6-BA、IBA、AS、琼脂粉得到的固体培养基，共培养基中MES浓度为0.25gL、6-BA浓度为0.5mgL、IBA浓度为0.25mgL、AS浓度为100μM和琼脂粉浓度为7.0gL；所述恢复培养为将所述共培养的外植体在恢复培养基上培养，所述恢复培养基为向MS培养基中加入6-BA、Zeatin、IBA、特美汀、Cefotaxime和琼脂粉得到的固体培养基，其中6-BA浓度为0.5mgL、Zeatin浓度为0.25mgL、IBA0.浓度为25mgL、Timentin浓度为250mgL、Cefotaxime浓度为200mgL、琼脂粉浓度为7.0gL；所述分化培养为将所述恢复培养的外植体在分化培养基上培养，所述分化培养基为向MS培养基中加入6-BA、Zeatin、IBA、Timentin、Cefotaxime、Kanamycin和琼脂粉得到的固体培养基，其中6-BA的浓度为0.5mgL、Zeatin的浓度为0.25mgL+IBA的浓度为0.25mgL、Timentin的浓度为250mgL、Cefotaxime的浓度为200mgL、Kanamycin的浓度为25mgL、琼脂粉的浓度为7.0gL；所述生根培养为将所述抗性丛生芽在生根培养基上培养；所述生根培养基为向12MS培养基中加入IBA、NAA、Timentin、Kanamycin和琼脂粉得到的固体培养基，其中IBA浓度为0.05mgL、NAA浓度为0.02mgL、Timentin浓度为250mgL、Kanamycin浓度为25mgL和琼脂粉浓度为7.0gL。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 北京市农林科学院 杨树良种‘森海2号’根癌农杆菌遗传转化体系的方法建立

免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。

阅读全文 双屏查看 官方信息 专利公告 收藏专利 下载PDF 下载WORD