申请/专利权人：浙江工业大学

申请日：2022-06-24

公开（公告）日：2024-03-26

公开（公告）号：CN115109793B

主分类号：C12N15/70

分类号：C12N15/70;C12N15/60;C12N15/52;C12N15/53;C12N15/54;C12N9/88;C12N9/00;C12N9/02;C12N9/10;C12N1/21;C12P19/44;C12R1/19

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.26#授权;2022.10.18#实质审查的生效;2022.09.27#公开

摘要：本发明涉及一种重组大肠杆菌，以大肠杆菌W3110为宿主细胞，通过代谢工程改造提高络缌关键前体L‑Phe，再过表达来源于粘红酵母的苯丙氨酸解氨酶RgPAL、链霉菌的肉桂酰CoA连接酶Sc4CL、拟南芥的肉桂酰CoA还原酶AtCCR和糖苷转移酶AtUGT73C5，实现了络缌Rosin的从头合成，该菌株在5L发酵罐分批补料发酵后，产量为4.01gL，是目前报道的最高产量。

主权项：1.一种从头合成络缌的重组大肠杆菌的构建方法，其特征在于包括如下步骤：将pET-28a-P4CU重组质粒转入大肠杆菌WT3中；所述pET-28a-P4CU重组质粒包含携带T7启动子的苯丙氨酸解氨酶基因、携带T7启动子的肉桂酰CoA连接酶基因、携带T7启动子的肉桂酰CoA还原酶基因和携带T7启动子的糖苷转移酶基因；所述pET-28a-P4CU重组质粒的载体为pET-28a；所述苯丙氨酸解氨酶基因编码的氨基酸序列如SEQIDNO:2所示；所述肉桂酰CoA连接酶基因编码的氨基酸序列如SEQIDNO:4所示；所述肉桂酰CoA还原酶基因编码的氨基酸序列如SEQIDNO:6所示；所述糖苷转移酶基因编码的氨基酸序列如SEQIDNO:8所示；所述大肠杆菌WT3，其制备方法如下：通过CRISPRCas9技术对大肠杆菌W3110进行基因编辑，敲除tyrR基因、pykF基因、trpD基因和tyrA基因；将galP基因的启动子、glk基因的启动子、ppsA基因的启动子和pheA基因的启动子分别替换为trc启动子；将编码如SEQIDNO:11所示氨基酸序列的pheA基因突变为如SEQIDNO:12所示氨基酸序列的pheAfbr基因；以及将crr基因替换为携带lac启动子的T7RNA聚合酶基因，得到所述大肠杆菌WT3；所述T7RNA聚合酶基因编码如SEQIDNO:10所示氨基酸序列；所述pheA基因编码如SEQIDNO:11所示氨基酸序列；所述pheAfbr基因编码如SEQIDNO:12所示氨基酸序列。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 浙江工业大学 一种从头合成络缌的重组大肠杆菌及其构建方法和应用

免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。

阅读全文 双屏查看 官方信息 专利公告 收藏专利 下载PDF 下载WORD